本发明专利技术提供一种用于生物技术领域的诱导多能干细胞培养基，其应用及培养方法。以IMDM/F12为基础培养基，每500mL IMDM/F12基础培养基中包括以下浓度的组分：重组人胰岛素，重组转铁蛋白，维生素C，人白蛋白，bFGF，PDGF-bb，EGF，IGF-1，TGF-β，纤维连接蛋白，Fetuin，Betacellulin，β-mercaptoethanol，Thiazovivin。本发明专利技术的诱导多能干细胞培养基中完全不采用动物血清，从而有效避免了带有动物源性病院体的风险，提高了诱导多能干细胞在临床上应用的安全性。本发明专利技术的培养基可以使诱导多能干细胞增殖速度快，在临床上具有很大的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种诱导多能干细胞培养基、应用及培养方 法。
技术介绍
诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells,iPScells)最初是日本人 山中申弥（ShinyaYamanaka)于2006年利用病毒载体将四个转录因子（0ct4，Sox2，Klf4 和c-Myc)的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞的一种细胞 类型。诱导多能干细胞能够通过向体细胞中导入诱导基因，使体细胞重编程获得具有胚胎 干细胞样特性的多能干细胞，也称为去分化。 随后世界各地不同科学家陆续发现其他方法同样也可以制造这种细胞。成功建立 iPS细胞后，应用iPS细胞来治疗疾病是人们的最终目标。iPS细胞不仅可用于分化和移 植，还可以提供体外的疾病模型，以便于研宄疾病形成的机制、筛选新药以及开发新的治疗 方法。人类iPS细胞的建立被公认为2007年最重要的科技进展之一，这项技术不仅可以 从体细胞建立个体特异的多能干细胞系，解决了细胞移植治疗中的免疫排斥问题，而且为 研宄人类细胞的重编程的机理以及研宄个体特异的疾病发生机理提供了有力的方法。在干 细胞研宄领域，iPS细胞技术的出现无疑是具有里程碑意义的突破，多种体细胞经过体外 培养和诱导均可转变成为具有多向分化潜能的干细胞，并且证明了几种已知的转录因子 可以使已分化的体细胞逆转为未分化的状态，表明细胞的巨大可塑性。 在体外，iPS细胞可定向诱导分化出多种细胞，比如神经干细胞、肝脏干细胞、心 肌干细胞等，因此，iPS细胞在理论研宄和临床应用等方面都极具应用价值。目前IPS细胞的培养多采用含有胎牛血清（FBS)的培养基，比如DMEM/F12+20%FBS，但是FBS源于动物，可能含有动物源性病原体，这降低了IPS细胞在临床上的应用价值 和安全性。虽然有少数厂家开发了无血清的IPS细胞培养基，但这种培养基培养的IPS细 胞增殖速度较慢。
技术实现思路
本专利技术解决的技术问题在于提供， 本专利技术的培养基中不含有动物源性病原体，诱导多能干细胞在该培养基中增殖速度快，提 高了安全性及应用价值。 本专利技术公开了一种诱导多能干细胞培养基，以頂DM/F12为基础培养基，每500mL IMDM/F12基础培养基中包括以下浓度的组分：【主权项】1. 一种诱导多能干细胞培养基，以頂DM/F12为基础培养基，每500mL IMDM/F12基础培 养基中包括以下浓度的组分： 重组人肢岛素 0.1~I Omg/mL; 重组转铁蛋白 0.25~25ug/mL; 维生素 C 1.61~161ug/mL; 人白蛋白 0.1~10mg/mL; bFGF 1~1 OOng/mL; PDGF-bb 1~100ng/mL; EGF 1~100ng/mL; IGF-I 卜 100ng/mL; TGF-β 1~100ng/mL; 纤维连接蛋白 1~100ng/mL; Fetuin 0· 1 ~I Omg/mL; Betacellulin 1 ~100ug/mL; β-mercaptoethanol I O-1000 uM ; Thiazovivin I ~100ng/mL。2. 根据权利要求1所述的诱导多能干细胞培养基，其特征在于，每500mL IMDM/F12基 础培养基中包括以下浓度的组分： 重组人腺岛素 1~5mg/mL; 重组转铁蛋白 丨~20ug/mL; 维生素 C 5~100ug/mL; 人白蛋白 丨~5 m g/mL; bFGF 5~80ng/mL; PDGF-bb 10~80ng/mL; EGF 10~80ng/mL; IGF-1 5 ~80ng/mL; TGF-β 10 ~80ng/mL; 纤维连接蛋白 10~80ng/mL; Fetuin 1 ~8mg/mL; Betacellulin 10 ~80ug/mL; β-mercaptoethanol 100~800uM ; Thiazovivin 5 ~80ng/mL。3. 根据权利要求2所述的诱导多能干细胞培养基，其特征在于，每500mL IMDM/F12基 础培养基中包括以下浓度的组分： 重组人胰岛素 lmg/mL; 重组转铁蛋白 2.5ug/mL; 维生素 C 16.1ug/mL; 人白蛋白 Img/mL; bFGF lOng/mL; PDGF-bb I Ong/mL; EGF lOng/mL; IGF-I lOng/mL; TGF-β I Ong/mL; 纤维连接蛋白 lOng/mL; Fetuin I mg/mL; Betacellulin I Oug/mL; β-mercaptoethanol 50uM ; Thiazovivin 10ng/mL〇4. 权利要求1~3任意一项中所述的诱导多能干细胞的培养基在培养诱导多能干细胞 中的应用。5. -种诱导多能干细胞的培养方法，包括以下步骤： (A)重悬诱导多能干细胞，获得诱导多能干细胞悬液； (B)将诱导多能干细胞悬液加入权利要求1~3任意一项中所述的诱导多能干细胞培 养基中进行培养。6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，所述步骤（A)具体为： 用Accutase或IV胶原酶消化诱导多能干细胞； 用权利要求所述的培养基重悬诱导多能干细胞，得到诱导多能干细胞悬液。【专利摘要】本专利技术提供一种用于生物
的诱导多能干细胞培养基，其应用及培养方法。以IMDM/F12为基础培养基，每500mL IMDM/F12基础培养基中包括以下浓度的组分：重组人胰岛素，重组转铁蛋白，维生素C，人白蛋白，bFGF，PDGF-bb，EGF，IGF-1，TGF-β，纤维连接蛋白，Fetuin，Betacellulin，β-mercaptoethanol，Thiazovivin。本专利技术的诱导多能干细胞培养基中完全不采用动物血清，从而有效避免了带有动物源性病院体的风险，提高了诱导多能干细胞在临床上应用的安全性。本专利技术的培养基可以使诱导多能干细胞增殖速度快，在临床上具有很大的应用价值。【IPC分类】C12N5-0735【公开号】CN104830753【申请号】CN201510260848【专利技术人】王一飞, 陈海佳, 葛啸虎, 卢瑞珊, 王小燕, 李平 【申请人】广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司【公开日】2015年8月12日【申请日】2015年5月20日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种诱导多能干细胞培养基，以IMDM/F12为基础培养基，每500mL IMDM/F12基础培养基中包括以下浓度的组分：
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王一飞，陈海佳，葛啸虎，卢瑞珊，王小燕，李平，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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