本发明专利技术公开了一种表面介孔丝素蛋白微球药物缓释载体的制备方法及其应用，将蚕茧进行脱胶、溶解、透析处理后得到丝素蛋白溶液，将丝素蛋白溶液置于透析袋中，并将透析袋置于16~20℃的水浴中，静置1~5天，将所得溶液洗涤，并冷冻离心得到表面介孔丝素蛋白微球药物缓释载体，将表面介孔丝素蛋白微球超声分散于配置成5g/L的表面介孔丝素蛋白微球溶液，加入目标药物，将混合溶液在室温下分散处理10min，然后在4℃的条件下高速冷冻、离心，得到载药表面介孔丝素蛋白微球，本发明专利技术制备的表面介孔丝素蛋白微球药物缓释载体，对其活性无损伤，适用于各种目标缓释药物，微球释放平缓，稳定性好，缓释效果显著。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物缓释载体领域，特别涉及一种不含有机溶剂制备表面介孔丝素蛋白微球药物缓释载体的方法。
技术介绍
对食道和胃粘膜有刺激性的粉末或颗粒药物，由于口感不好、易于挥发、易吸入气管、在口腔中易被唾液分解等原因，常被装入胶囊，避开水分、空气、光线的影响，对具嗅味或稳定性差的药物有一定程度上的遮蔽和保护作用，既阻止药物药性不被破坏，也保护了消化器官和呼吸道。另外，胶囊能延缓药物的释放和定位释药，达到缓释延效和定位智能给药的作用。如肠内溶解吸收药物的胶囊能够保护药物不被胃酸破坏。同时，胶囊剂的生物利用度较高。胶囊剂中的药物不受压力等因素的影响，能在胃肠道中迅速分散、溶出和吸收。但是对于昂贵的基因修复药物，需要高精度的定位给药、高载药量及缓释延效性。常用胶囊的崩解时间是30分钟以内，片剂、丸剂是I小时以内，不能满足基因类药物的需要。在药物缓释体系中，药物载体起着关键性的作用。目前，微球给药系统常用的载体材料有海藻酸钠、聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)、壳聚糖(CS)及其衍生物及蚕丝蛋白等生物降解材料。其中来源于蚕丝的丝素蛋白因其生物相容性好、可生物降解、理化及生物稳定性、极低的毒性，以及较高的载药性等优点，已广泛用作药物、酶和疫苗的载体。但目前所报道的纳米和亚微米尺度的丝素微球制备方法复杂，工艺苛刻，还可能加入其它有害物质，且微球表面平整，载药量低，释放速度过快。因此，开发更高比表面积、载药量、延长药物释放时间的丝素蛋白微球已是刻不容缓。中国专利技术专利(CN102977381A)公开了一种柞蚕丝素蛋白微球及其制备方法，将柞蚕丝进行脱胶、溶解、透析处理后得到柞蚕丝素蛋白溶液，调节溶液浓度为10~100mg/mL，在10~60°C下，加入柠檬酸或醋酸缓冲溶液调节pH值为3~ 6，经超声波震荡和搅拌处理，得到柞蚕丝素蛋白微球悬浊液；经离心分离、冷冻干燥，得到直径为0.1 ~10μπκ可被生物降解的柞蚕丝素蛋白微球。文献(B1materials 31 (2010) 4583-4591)指出在制备过程中使用有机试剂所制备得到的微球不适于用作药物缓释载体。由于中国专利技术专利(CN102977381A)采用在制备过程中采用柠檬酸或醋酸，因此得到的微球不适于用作药物缓释载体。文献(B1materials 31 (2010) 4583-4591)还报道了利用盐析法制备粒径(0.5~2μπι)、二级结构和zeta电位可控的丝素微球，这种缓释载体通过盐的浓度调控，但药物释放性能受二级结构和电荷之间相互作用的影响大，难以用于药物缓释。文献(SoftMatter, 3(2007) 910 - 915)报道了利用自组装的方法制备粒径在0.2-1.5 μπι的纯丝素微球，通过控制乙醇添加量、冻干温度和丝素蛋白溶液浓度可以调控丝素微球的粒径和分布。但乙醇等有机溶剂的实用限制了其在药物缓释领域的应用。文献(B1materials31 (2010) 1025 - 1035)报道了利用 SF/聚乙烯醇(PVA)共混一再溶去PVA—低压冻干制备包埋药物的丝素蛋白微球，微球粒径在0.3~20 μπι，但其药物释放速率和释放量受药物的分子量和水溶性影响较大，且可能存在PVA残留，限制了其在药物缓释上的应用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的问题，提供一种不含有机溶剂制备表面介孔丝素蛋白微球药物缓释载体的方法。该制备方法操作方便，不使用任何有机试剂，且工艺简单，条件温和；制备的表面介孔丝素蛋白微球具有载药量高、无有害物质添加，微球释放平缓，稳定性好，缓释效果显著。为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案: 本专利技术的原理是:丝素蛋白的主要成分是氨基酸，按其亲水性的不同分为极性氨基酸和非极性氨基酸。依据文献(Applied Surface Science 258 (2012) 3948 - 3955)报道丝素蛋白典型的氨基酸序列中包含非极性氨基酸序列和极性氨基酸序列，其中非极性氨基酸序列易于规整排列，形成结晶结构。而余下分子链含有较多的极性基团(一C00H、-NH2),具有良好的亲水性，易于与水分子结合。丝素蛋白稀溶液中，大分子链可以产生相对移动，在一定温度下长时间静置的过程中，非极性氨基酸序列会逐步聚集，并规整排列结晶，形成晶核，而极性链段分布于周围。表面介孔结构的形成可能是自组装微球表面没有形成氢键的一COOH和一NH2缔合微量的水分子。离心干燥后，水分蒸发所致。本专利技术的有益效果:(1)本专利技术利用再生蚕丝素蛋白溶液自组装方法，不使用有机试剂，在室温下制备表面介孔丝素蛋白微球，表面介孔丝素蛋白微球粒径大小为500nm~6 μ m，表面具有形状规则均匀的多孔结构，且不用处理具有良好的耐水性，将目标药物加载于微球中，制备成载药缓释微球，目标药物稳定缓慢释放，在120h能有效释放90%，是一种无毒性、缓释延效显著的药物缓释载体；(2)本专利技术不使用有机试剂，操作方便，工艺简单，条件温和，可操作性好；(3)所制备表面介孔微球具有良好的耐水性，无需不溶处理(有机溶剂处理，诱导产生结晶结构，提高其耐水性)和交联处理(一般用有机交联剂，如戊二醛，提高其耐水性)，无有毒有害物质添加；(4)与一般微球相比，本专利技术制备得到的微球表面光滑，所制得丝素微球表面分布有许多小孔，具有多孔结构，且孔的形状均匀规则，孔与孔之间相互贯通(如图1所示)，这些小孔有利于物质之间的交换或传递；(5)本专利技术制备的表面介孔丝素蛋白微球药物缓释载体，对其活性无损伤，适用于各种目标缓释药物，微球释放平缓，稳定性好，缓释效果显著，具有良好的应用前景。【附图说明】图1为本专利技术实施例4制备得到的表面介孔柞丝素蛋白微球药物缓释载体的FESEM 图。图2为本专利技术实施例4中无氟尿嘧啶(5-FU)负载柞蚕丝素蛋白微球的体外释放图谱。【具体实施方式】下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1 本实施例的表面介孔丝素蛋白微球药物缓释载体的制备方法如下: (1)桑蚕蚕茧(去蛹)于0.5%(w/w)Na2C03水溶液煮沸30min并重复3次，脱除丝胶，将脱胶丝素在7 5 土 2°C条件下用CaCl2/H20/C2H50H 1:8:2三元溶液溶解2h，浴比为1: 10，溶液经纱布过滤置于截留分子量为12-14kD的透析袋中透析3d、过滤得到浓度为0.4-0.6wt%的桑蚕丝素蛋白溶液； (2)将10mL0.4-0.6wt %的桑蚕丝素蛋白溶液置于透析袋中(截留分子量为12-14kD)，于16°C水浴中静置2天，将所得溶液用超纯水反复洗涤，并冷在4°C的条件下冷冻离心30min，得到表面介孔桑蚕当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种表面介孔丝素蛋白微球药物缓释载体的制备方法，将蚕茧进行脱胶、溶解、透析处理后得到丝素蛋白溶液，其特征在于：将丝素蛋白溶液置于透析袋中，然后将透析袋置于16~20℃的水浴中，静置1~5天，将所得溶液洗涤，并冷冻离心得到表面介孔丝素蛋白微球药物缓释载体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周伟涛，李克兢，杜姗，陆振翔，梁江华，米楠楠，
申请(专利权)人：中原工学院，
类型：发明
国别省市：河南;41
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