本发明专利技术属于中药领域，具体涉及一种覆盆子叶粗多糖及其制备方法与应用。本发明专利技术通过热水回流提取、脱色处理和醇沉等步骤，从覆盆子的叶子提取到覆盆子叶粗多糖，该粗多糖在体外能显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的释放，而且能显著抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TNF-α、iNOS和IL-6mRNA的表达。此外，本发明专利技术通过离子交换柱层析法进一步对覆盆子叶粗多糖纯化，得到三个组分，其中含量最高的组分即为覆盆子叶精多糖，该精多糖是包含五种单糖的杂多糖，其中，糖残基摩尔比为：鼠李糖：阿拉伯糖：木糖：葡萄糖：半乳糖＝2.47:4.75:4.12:1:2.48。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药领域，具体设及。
技术介绍
目前最有前途的替代经典抗生素治疗的抗炎方法之一是使用能增强宿主防御反 应的免疫调节剂。现已知的多种免疫调节剂，包括哺乳动物蛋白，如：丫-干扰素、粒细胞集 落刺激因子和粒细胞-巨瞻细胞集落刺激因子及从微生物分离纯化的物质。对于免疫细菌 多糖和人工合成的化合物来说，其不良反应和副作用已引起人们广泛注意。大多数高等植 物来源的多糖均为无不良反应的物质，不会对机体产生较大的副作用，因此，从植物中分离 的多糖在生物医学上引起极大关注。对该些活性物质的作用机制也在不断发展，其中多糖 对非特异性诱导的免疫机制更受到人们的重视。研究发现，植物多糖抗肿瘤、杀菌和其他治 疗作用的免疫激活机制是通过补体系统的调节和巨瞻细胞的刺激来完成。研究发现，植物 来源的多糖能通过调节巨瞻细胞的免疫功能体现出各种有益的药理作用。植物多糖是抗 炎、抗肿瘤和促进伤口愈合的最理想的免疫候选药物。覆盆子（Rubuschingii化），即掌叶覆盆子，系蓄薇科（Rosaceae)悬钩子属植物， 主产于浙江、福建，此外在安徽、江西、江苏等省也有分布，因其主要分布于华东又称华东覆 盆子。覆盆子为《中华人民共和国药典》2010年版一部收录，W其未成熟干燥果实为药用部 位，具有补肾、固精、缩尿之功效，用于肾虚遗尿、小便频数、阳痕早泄、遗精滑精等。对于覆 盆子果实多糖的研究较多，但是对于覆盆子叶子多糖的研究却没有。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种覆盆子叶粗多 糖的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供上述制备方法制备得到的覆盆子叶粗多糖。本专利技术的再一目的在于提供上述覆盆子叶粗多糖的应用。本专利技术的目的通过下述方案实现：[000引一种覆盆子叶粗多糖的制备方法，包含如下步骤： (1)将覆盆子（Rubuschingii化）叶子粉碎后过筛，得到覆盆子叶粉；75°C~ 95°C热水回流提取掌叶覆盆子叶粉，然后将提取液离屯、，取上层澄清液，过滤2~4次，将滤 液减压浓缩，得到多糖溶液； (2)将多糖溶液和经过预处理的大孔吸附树脂混合，于40°C~60°C水浴2~化进 行脱色，然后过滤出多糖溶液，并用水反复洗出树脂中吸附的多糖，将脱色后的多糖溶液合 并，减压浓缩，得到浓缩糖液； (3)在浓缩糖液中加入3~5倍体积的己醇进行醇沉，然后离屯、，弃去上清液，收集 沉淀物并干燥，得到覆盆子叶粗多糖（L-Ps);[001引步骤（1)中所述的热水回流提取的水料比为（10:1)~（30:1);[001引步骤（1)中所述的热水回流提取的时间为2~化，热水回流提取的次数为2~4 次； 步骤（1)中所述的离屯、的转速为3000~5000rpm/min;所述的离屯、的时间为8~ 12min; 步骤（2)中所述的大孔吸附树脂优选为D354抑树脂； 步骤（2)中所述的大孔吸附树脂的预处理的方法为；将大孔吸附树脂先用水浸泡 12~2化，然后依次用质量分数为5 %的盐酸溶液和质量分数为5 %的氨氧化钢溶液各自浸 泡0. 5~化，过滤，水洗至中性，得到经过预处理的大孔吸附树脂； 步骤（1)和似中所述的减压浓缩的温度为40~60°C;[001引步骤做中所述的己醇的体积分数为70%~100%;步骤做中所述的醇沉的温度为0~4°C，醇沉的时间为8~2化； 步骤（3)中所述的离屯、的转速为3000~5000巧m/min;所述的离屯、的时间为12~ 15min； 步骤做中所述的干燥的温度为40~60°C; 一种覆盆子叶粗多糖（L-Ps)，通过上述制备方法制备得到； 一种覆盆子叶精多糖（L-Ps-1)，通过将上述覆盆子叶粗多糖进一步纯化得到； 所述的覆盆子叶精多糖（L-Ps-1)为均一组分，其分子量（Mn)为1268抓a; 所述的覆盆子叶精多糖（L-Ps-1)为包含五种单糖的杂多糖，其中，糖残基摩尔比 为；鼠李糖啊拉伯糖；木糖；葡萄糖；半乳糖=2.47:4. 75:4. 12:1:2.48 ; 所述的覆盆子叶精多糖（L-Ps-1)通过如下步骤制备得到： (1)将经过预处理的DEAE-52树脂于40~60°C旋转蒸发除气泡后转入Z型层析 柱中，用恒流累累送蒸馈水W使填料装柱均匀，平衡后流速5~10s/滴；[002引 （2)将覆盆子叶粗多糖配制成多糖溶液，转入层析柱中，依次用蒸馈水、0.05mol/L 化C1、0.Imol/L化C1、0. 3mol/L化C1、0. 5mol/L化Cl溶液洗脱，流速5~10s/滴，分别收 集各流份，苯酪-硫酸法跟踪检测洗脱液，测定490nm下的吸光度，绘制洗脱曲线，同一吸收 峰内的洗脱液合并；然后旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，经过DEAE-52离子交换柱层析后得到= 个组分，其中，含量最高的组分即为覆盆子叶精多糖（L-Ps-1); 步骤（1)中所述的DEAE-52树脂预处理的方法为：将DEAE-52树脂用水4~30°C 浸泡12~2化；再用0. 5mol/L的盐酸溶液浸泡0. 5~化；0. 5mol/L的化OH溶液浸泡0. 5~ 2h，过滤，水洗至中性，得到经过预处理的DEAE-52树脂； 步骤（2)中所述的旋蒸浓缩的温度为40~60°C; 所述的覆盆子叶粗多糖或覆盆子叶精多糖在制备抗炎药物中的应用； 所述的覆盆子叶粗多糖或覆盆子叶精多糖可作为新型的抗炎药物，应用于炎症的 治疗。 一种抗炎药物，含有上述覆盆子叶粗多糖或覆盆子叶精多糖； 本专利技术的原理：植物来源的多糖能通过调节巨瞻细胞的免疫功能体现出各种有益 的药理作用。本专利技术发现和确证植物多糖L-Ps具有显著的抗炎活性，且植物多糖L-Ps的 使用剂量低，在同样剂量下的毒副作用也较低。 本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果： (1)本专利技术首次发现覆盆子叶粗多糖在体外能显著抑制LPS诱导的RAW264. 7巨瞻 细胞NO的释放。 (2)本专利技术首次发现覆盆子叶粗多糖在体外能显著抑制LPS诱导的RAW264. 7巨瞻 细胞TNF-a、iNOS和IL-6mRNA的表达。[003引（3)覆盆子叶粗多糖的用药剂量比较低，而且在有效用药剂量范围内毒性较低。【附图说明】图1是实施例1制备得到的覆盆子叶粗多糖的紫外扫描光谱图。 图2是实施例1制备得到的覆盆子叶粗多糖的红外光谱图。图3是实施例5的离子交换柱层析洗脱曲线图。[00创图4是实施例5制备得到的覆盆子叶精多糖的GPC图。 图5是覆盆子叶粗多糖对LPS诱导的RAW264. 7巨瞻细胞释放NO的影响图。 图6是覆盆子叶粗多糖对LPS诱导的RAW264. 7巨瞻细胞TNF-amRNA表达的影响 图，其中，##;与control组比较，P<0. 01。 图7是覆盆子叶粗多糖对LI^S诱导当前第1页1 2 3 4 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种覆盆子叶粗多糖的制备方法，其特征在于包含如下步骤：(1)将覆盆子叶子粉碎后过筛，得到覆盆子叶粉；75℃～95℃热水回流提取掌叶覆盆子叶粉，然后将提取液离心，取上层澄清液，过滤2～4次，将滤液减压浓缩，得到多糖溶液；(2)将多糖溶液和经过预处理的大孔吸附树脂混合，于40℃～60℃水浴2～4h进行脱色，然后过滤出多糖溶液，并用水反复洗出树脂中吸附的多糖，将脱色后的多糖溶液合并，减压浓缩，得到浓缩糖液；(3)在浓缩糖液中加入3～5倍体积的乙醇进行醇沉，然后离心，弃去上清液，收集沉淀物并干燥，得到覆盆子叶粗多糖。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：姜建国，张恬恬，梁颖婕，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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