寡肽CD12及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一个小分子寡肽及其制备方法，具体是寡肽CD12及其制备方法和应用,本发明专利技术公开了寡肽的氨基酸序列如SEQ ID:1所示，可以采用合成，提取或者基因工程等方式制备寡肽CD12，在制备治疗抗炎镇痛、创面修复以及提高免疫的药物中有较好的治疗效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白质领域，特别涉及寡肽及其应用。
技术介绍
寡肽是多肽的一种分类，分子量段一般在1000道尔顿以下，也称作小肽，一般由 2-6个氨基酸组成。 炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应。对机体的损伤的 局部组织所呈现的反应称为炎症反应，炎症发展后期会产生渗出液，渗出物的压迫和炎症 介质的作用可引起患者疼痛。现在抗炎的临床应用药物主要为化学合成药物，如萘丁美 酮、吲哚美辛、吡罗昔康、布洛芬等，这些化学药物虽然抗炎效果明显，但不能治本，不能 消除致炎的基本原因，大多都有较严重的不良反应，给患者造成痛苦和损失。 创面修复，创面是正常皮肤(组织）在外界致伤因子如外科手术、外力、热、电流、化 学物质、低温以及机体内在因素如局部血液供应障碍等作用下所导致的损害。常伴有皮肤 完整性的破坏以及一定量正常组织的丢失，同时，皮肤的正常功能受损。也称为伤口或者创 伤。创面修复既伤口修复。 消化道溃疡病，胃溃疡、十二指肠溃疡统称为消化道溃疡病。由于生活节奏加快， 工作压力加大，近年消化道溃疡病的发病率不仅未见下降，反有上升趋势。近10多年来本 病的症状也变得不典型，无规律的胃部隐痛常引不起人们的注意，直到发生呕血或黑便时 方到医院就诊。消化性溃疡主要指发生在胃和十二指肠的慢性溃疡，亦可发生于食管下段、 胃空肠吻合口周围及含有异位胃粘膜的美克尔（MECKEL)憩室。这些溃疡的形成与胃酸和 胃蛋白酶的消化作用有关，故称消化性溃疡。近年研究发现溃疡的形成与幽门螺旋桿菌（H P)的存在有关。本病绝大多数（95%以上)位于胃和十二指肠，故又称胃十二指肠溃疡。本 病的总发病率占人口的5-10%，十二指肠溃疡较胃溃疡多见，以青壮年多发，男多于女，儿 童亦可发病，老年患者所占比例亦逐年有所增。由于复发率很高，给患者带来痛苦。 免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细 菌等）；处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细 胞的能力。现代免疫学认为，免疫力是人体识别和排除"异己"的生理反应。年老体弱的人 员由于自身免疫系统较弱，所以需要提高细胞的识别能力。免疫力低下是会造成人体容易 受到外界的感染，功能下降。
技术实现思路
为了寻找一种可以多角度保护人体创面和抗炎镇痛，同时提高人体免机能的药 物，专利技术人通过大量合成试验，广泛的筛选，采用Fmoc保护的氨基酸来合成，得到大量寡肽 分子，其中部分寡肽分子获得了意想不到的技术效果。意外地发现寡肽CD12治疗效果较 好：寡肽⑶12由H、E、L3个氨基酸残基组成，分子量为397.43Da，其氨基酸序列如SEQID:1 所示。 上述寡肽的制备方法可以使用合成，也可以采用从生物体中提取纯化得到。寡肽 的制备方法，其特征在于包括如下的步骤：a.合成顺序为从C端到N端；取1倍摩尔当量的树脂放入多肽合成仪反应器中， 加入DCM(二氯甲烷）溶胀半小时，然后抽掉DCM，加入序列中第一个Fmoc保护的氨基酸 10mmol，2倍摩尔当量的DIEA(二异丙基乙胺），适量的DMF(二甲基甲酰胺）、DCM溶液(适 量是指以可使树脂充分鼓动起来为宜)，用氮气鼓泡反应60min;然后加入约5倍摩尔当量 甲醇，反应半小时，抽掉反应液，用DMF、甲醇洗净；b.加入适量哌啶去除Fmoc(9-芴甲氧羰基）保护基，洗净，茚三酮检测；c.往反应器中加入序列中第二个氨基酸（也为2倍摩尔当量)，2倍摩尔当量HBTU(苯并三氮唑-N，N，N'，N' -四甲基脲六氟磷酸盐）及DIEA，氮气鼓泡反应半小时，抽掉液体， 用DMF，甲醇洗净，茚三酮检测；d.重复依步骤b、c的方式依次加入序列中氨基酸，抽掉液体，用DMF洗净，茚三酮 检测；e.将树脂用氮气吹干后，从反应柱中取下并称取重量，倒入烧瓶中，然后往烧瓶中 加一定量的95%TFA(三氟乙酸)切割液，震荡反应2h，目的是将多肽从树脂载体上裂解下来 并去除氨基酸的侧链保护基团；f.滤掉树脂，得到滤液，然后向滤液中加入大量乙醚，析出粗产物，然后离心，清洗 即可得到该序列的粗产物； g.分析提纯和质谱检测：用ESI(电喷雾电离)离子源质谱仪和测序仪检测该序列 的正确性，用高效液相色谱将粗品提纯至要求纯度； h.收集纯化好的目标寡肽溶液放入冻干机中进行浓缩，冻干成白色粉末。 本专利技术提供的寡肽可作为普通食品、保健品或者药品的组成部分。本专利技术还提供 一种寡肽的组合物，其中含有药学可以接受的载体。组合物可以以药物制剂形式存在，优选 的是注射剂，更优选的是冷冻干燥注射剂，该药物制剂形式药物组合物，可以按照制剂学常 规技术制备，包括将药物活性成分，本专利技术的寡肽与药物载体混合，按照制剂学常规技术制 成所需要的剂型。 本专利技术中的寡肽，分子量小、人工合成方便、纯度很高，生产方面，适合大规模生 产，在应用方面，这些寡肽抗炎镇痛效果明显，对创面损伤、烧伤、烫伤、消化道溃疡具有显 著的治疗效果；该寡肽还有能提高动物免疫机能的作用，寡肽能够在制备抗菌、抗炎镇痛、 抗肿瘤和提高免疫力的药物中的应用。【具体实施方式】 以下是结合具体试验对本专利技术的说明，并不是对本专利技术保护范围的限制。 实施例1本专利技术中寡肽的制备方法 原料：树脂(WangResin),Fmoc保护的氨基酸， 试剂：N,N-二甲基酰胺（DMF)，DCM，ME0H，乙酸酐，吡啶，DIEA，HBTU，六氢吡啶 仪器：十二通道半自动多肽合成仪，高效液相色谱（HPLC)，型号：Waters2695检测 试剂：苯酚试剂，吡啶，茚三酮试剂 ( 1)合成顺序为从C端到N端。 (2)取lOmmol当前第1页1 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种寡肽CD12，其特征在于，由H 、E、L 3个氨基酸残基组成，分子量为397.43 Da，其氨基酸序列如SEQ ID:1 所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈光健，
申请(专利权)人：陈光健，
类型：发明
国别省市：四川;51