本发明专利技术提供了一种鸦葱总黄酮的制备方法及其指纹图谱，具体步骤为采用溶剂浸泡法进行提取，利用大孔树脂柱色谱制备鸦葱总黄酮；将鸦葱总黄酮制备成供试品溶液，在一定的条件下经过高效液相色谱仪的分离检测，获得鸦葱总黄酮的指纹图谱。本发明专利技术提供的鸦葱总黄酮的制备方法，操作简便，稳定可行，由该方法制备的鸦葱总黄酮中黄酮类成分含量提高至90％以上；本发明专利技术提供的鸦葱总黄酮的指纹图谱，操作简便，稳定性高、重现性好、特征峰多，能全面、准确地评价鸦葱总黄酮的质量。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种鸦葱总黄酮的制备方法；一种鸦葱总黄酮指纹图谱的建立方法， 以及由该方法所得的鸦葱总黄酮标准指纹图谱，属于中药分析领域。
技术介绍
鸦葱为菊科植物Scorzonera austriaca Wild的干燥全草。五月~六月米挖、 晒干。本品全长10~40厘米；根粗壮，倒圆锥状，直径约0. 3~3厘米；茎多数，簇生于 根颈顶端，不分枝，光滑无毛，茎基被稠密褐色的纤维状撕裂的鞘状残遗；基生叶广披针形 至长圆状卵形，长20~30 (-40)厘米，宽1. 2~3. 5 (-5)厘米，边缘平展，基部鞘状扩大， 鞘内被稠密的棉毛，基部边缘有棉毛；茎生叶少数，1~3枚，鳞片状；头状花序单生茎顶， 瘦果无毛。鸦葱作为传统中药，全草入药，具有清热解毒、消炎、通乳的功效，主治痈疮、 淋病、妇女带下、乳腺炎等症。鸦葱也是一味传统藏药（藏名：巴多拉）。关于鸦葱化学 成分的研宄除本研宄室外，只有武全香、祝英、李娟等报道了鸦葱中倍半萜类和三萜类化 学成分的研宄（Wu Q X，Su Y B, Zhu Y. Triterpenes and steroids from the roots of Scorzonera austriaca. Fitoterapia. 2011, 82(3):493 - 496) > (Zhu Y, Hu P Z, He Z ff,et al. Sesquiterpene Lactones from Scorzonera austriaca. Journal of Natural Products. 2010, 73(2):237 - 241)> (Zhu Y, Wu Q X, Hu P Z, et al. Biguaiascorzolides A and B:Two novel dimeric guaianolides with a rare skeleton from Scorzonera austriaca. Food Chemistry. 2009, 114(4):1316 - 1320) > (Li J, Wu Q X, Shi Y P, et al. A new sesquiterpene lactone from Scorzonera austriaca. Chinese Chemical Letters. 2004, 15 (11) : 1309 - 1310)，Ting-Fu Jiang 等报道了香豆素类化学成分的研 宄(T.F. Jiang et.al. Determination of kavalactones and flavonoid glycoside in Scorzonera austriaca by capillary zone electrophoresis. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，2007, 43 (3) :854-858)。本研宄室对鸦葱中 黄酮类化学成分进行了研宄（李泉妙，王广树.鸦葱中黄酮苷类成分的提取分离与结构 鉴定.吉林大学学报（医学版），2010, 36(1): 10-12)、（刘欣，张子龙，王广树等.鸦葱 中黄酮成分的提取分离及结构鉴定.吉林大学学报（医学版），2012, 38 (3) :595-597)、 (何碌.鸦葱中黄酮类化合物的研宄.吉林大学研宄生学位论文，2012)、（李泉妙.鸦 葱中化学成分的研宄及保肝活性的初探.吉林大学研宄生学位论文，2008)。迄今为 止，本研宄室从鸦葱中分得了 10余种黄酮类化合物，对总黄酮提取物进行了生物活性研 宄，发现鸦葱总黄酮具有治疗肝炎和保肝作用，于2013年获得了中国专利技术专利（一种鸦葱 总提取物及其在制备治疗肝炎或保肝药物中的用途，专利号ZL 201110255235. 1，授权公告 日2013-06-04)。本研宄室正在进行以鸦葱为原料，以鸦葱总黄酮为有效部位，以治疗病毒 性肝炎为目标的新药创制的研宄，并获得了国家科技重大专项的资助（国家科技重大专项 "重大新药创制"，治疗病毒性肝炎创新药物-YCZT的研宄，2013ZX09103002-007)。中药指纹 图谱技术是目前国内外公认的用来控制中药、天然药物或中药材整体质量最有效、最准确、 最直接的手段，是一种综合的、宏观的和可量化的鉴别方法，其基本属性是"整体性"和"模 糊性"。"整体性"是指完整地比较色谱的特征"面貌"；"模糊性"强调的是对照物与待测样 品指纹图谱的相似性。运用指纹图谱技术可以鉴别中药材和中成药的真伪，评价原料药材、 半成品和成品质量的均一性和稳定性。 综上所述，为了开发以鸦葱总黄酮为有效部位，以治疗病毒性肝炎为目标的新药， 有必要研宄鸦葱总黄酮的制备方法及其质量控制方法。为此本研宄室专利技术了一种鸦葱总黄 酮的制备方法，以此方法制备的鸦葱总黄酮中黄酮类成分含量提高至90%以上，同时专利技术 一种鸦葱总黄酮的指纹图谱建立方法及标准指纹图谱，该方法操作简便、稳定和重现性好， 能全面、准确地控制鸦葱总黄酮的质量。
技术实现思路
专利技术的目的是为了开发以鸦葱总黄酮为有效部位，以治疗病毒性肝炎为目标的新 药，提供一种稳定可行的鸦葱总黄酮的制备方法和一种由该方法制得的鸦葱总黄酮质量控 制方法，其特点是（1)由该方法制备的鸦葱总黄酮中黄酮类成分含量提高至90%以上；（2) 将鸦葱总黄酮制备成供试品溶液后，经过高效液相色谱仪分离检测，获得鸦葱总黄酮的指 纹图谱，该方法操作简便，稳定性高、重现性好、特征峰多，能全面、准确地控制鸦葱总黄酮 的质量。 1.本专利技术鸦葱总黄酮的制备方法具体包括如下步骤： 1)鸦葱全草用70%乙醇冷浸提取3次，每次7d，提取液过滤后浓缩除醇，过滤，经 DlOl型大孔树脂柱吸附，水、60%乙醇洗脱，收集60 %乙醇洗脱组分，减压回收乙醇，干燥， 得鸦葱提取物； 2)将鸦葱提取物用水溶解，上样于D4020型大孔树脂柱色谱，先以5%乙醇除杂， 再收集10%~30%乙醇洗脱的黄酮类成分组分，合并后减压回收溶剂，干燥至恒重，即得 鸦葱总黄酮。 2.本专利技术一种鸦葱总黄酮指纹图谱的建立方法具体包括如下步骤： 1)供试品溶液的制备：取鸦葱总黄酮，60%乙醇超声溶解并定容，作为供试品溶 液； 2)参照物溶液的制备：取鸦葱黄酮苷A对照品，60%乙醇超声溶解并定容，作为参 照物溶液； 3)制作鸦葱总黄酮指纹图谱：分别精密吸取供试液溶液和参照物溶液，经高效液 相色谱仪分离检测，其中，流动相的组成为乙腈-0.1%甲酸水溶液；采用梯度洗脱；得到鸦 葱总黄酮指纹图谱。 其中，供试品溶液按如下步骤制备：精密称定各批次经干燥至恒重的鸦葱总黄酮 0. 0020g，60%乙醇超声溶解并定容于IOml容量瓶中，摇匀后，作为供试品溶液。 对照物溶液按如下步骤制备：精密称定鸦葱黄酮苷A 0. 0020g，60 %乙醇超声溶 解并定容于IOml容量瓶中，摇匀后备用。 色谱条件为：Phenomenex Gemini 5 μ m C18110A，250mmX 4. 6mm，5 μ m 色谱柱；流 动相A为色谱乙腈，B为0. 1 %甲酸-水；流速0. 8mL · 本文档来自技高网...
【技术保护点】
鸦葱总黄酮的制备方法，其特征在于采用溶剂浸泡法进行提取，利用特定的大孔树脂柱色谱制备鸦葱总黄酮；所述方法包括如下步骤：1)鸦葱全草用70％乙醇冷浸提取3次，每次7d，提取液过滤后浓缩除醇，过滤，经D101型大孔树脂柱吸附，水、60％乙醇洗脱，收集60％乙醇洗脱组分，减压回收乙醇，干燥，得鸦葱提取物；2)将鸦葱提取物用水溶解，上样于D4020型大孔树脂柱色谱，先以5％乙醇除杂，再收集10％～30％乙醇洗脱的黄酮类成分组分，合并后减压回收溶剂，干燥至恒重，即得鸦葱总黄酮。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王广树，谢扬，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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