本发明专利技术涉及一种醛固酮腺瘤的体细胞突变新位点及其应用。揭示一种新型突变型KCNJ5基因，其突变位点能影响细胞膜钾离子通道的选择性，导致细胞膜钾/钠离子通道电流发生变化，从而其与醛固酮腺瘤、高醛固酮血症、原发性醛固酮增多症或离子通道病密切相关。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学及医学领域；更具体地，本专利技术涉及一种醛固酮腺瘤的体 细胞突变新位点及其应用。
技术介绍
原发性醒固酮增多症（Primary Aldosteronism, PA)，是内分泌性高血压最常 见的原因，其特点是肾上腺皮质分泌过多的醛固酮。醛固酮，是一种盐皮质激素，可导 致水钠潴留和钾排泄增加。与原发性高血压患者相比，PA患者可伴有更多的心脑血管 并发症（Savard S et al. Cardiovascular complications associated with primary aldosteronism:a controlled cross-sectional study. Hypertension. 2013, 62 (2):331 ~336;Triantafyllidi H,Arvaniti C, Katsiva V,et al. Bilateral adrenal hyperplasia complicated with severe ischemic stroke in a young patient. Int J Cardiol. 2010,139(3) :299~301)。内分泌学会推荐有难治性高血压等情况的患者需筛 查 PA(Funder Jff et al. Case detection, diagnosis, and treatment of patients with primary aldosteronism:an endocrine society clinical practice guideline. J Clin Endocrinol Metab. 2008,93(9):3266 ~3281)。 目前已明确三种形式的家族性醒固酮增多症（familial hyperaldosteronism， FH)，FH-I、FH-II和FH-III，仅仅占 PA的1-10%，而大多数PA患者是散发性（Zennaro MC, Jeunemaitre X.Mutations in KCNJ5gene cause hyperaldosteronism. Circ Res. 2011，108 (12) : 1417 ~1418)。一般来说，单侧醒固酮腺瘤（aldosterone-producing adenoma，APA)和双侧肾上腺皮质增生（bilateral adrenal hyperplasia，BAH)是散发性 PA的常见病因。APA患者通常需要行单侧肾上腺切除术，而BAH患者需要长期服用盐皮质 激素受体拮抗剂（Nishikawa T et al. Guidelines for the diagnosis and treatment of primary aldosteronism-the Japan Endocrine Society2009.Endocr J. 2011, 58(9) :711 ~721)。 2011年，Choi M等发现，22例APA患者中有8例出现内向整流钾通道家族KCNJ5 基因 （potassium inwardly-rectifying channel, subfamily J, member5)体细胞突变。 KCNJ5突变可导致钾离子通道选择性和醛固酮的合成增加。人们开始了解到KCNJ5基因在 APA发病中的重要作用。然而，目前关于KCNJ5基因体细胞突变在中国APA患者中的发病情 况仍不明确。 综上所述，本专利技术迫切需要了解中国APA人群中KCNJ5的发病特点，以便开发相应 的基因芯片及治疗药物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供。 在本专利技术的第一方面，提供一种突变型KCNJ5基因，该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。 在本专利技术的另一方面，提供一种突变型KCNJ5蛋白，该蛋白由SEQ ID NO: 2所示的 核苷酸序列编码；较佳地，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。 在本专利技术的另一方面，提供所述的突变型基因或其编码的蛋白在制备诊断醛固酮 腺瘤（APA)、原发性醛固酮增多症或离子通道病（包括细胞膜离子电流变化相关的疾病，如 钾离子电流及钠离子电流变化相关的疾病）的试剂或试剂盒中的应用。 在本专利技术的另一方面，提供特异性识别所述的突变型基因或其编码的蛋白的试剂 的用途，用于制备诊断醛固酮腺瘤、高醛固酮血症、原发性醛固酮增多症或离子通道病的试 剂或试剂盒。 在一个优选例中，所述的试剂包括：特异性扩增或鉴定KCNJ5基因第445-446位之 间是否插入GAA的引物；或特异性鉴定KCNJ5基因第445-446位之间是否插入GAA的探针； 或。特异性鉴定KCNJ5基因第445-446位之间是否插入GAA的芯片。 在本专利技术的另一方面，提供一种用于诊断醛固酮腺瘤、醛固酮症、原发性醛固酮增 多症或离子通道病的试剂盒，它包括：特异性扩增或鉴定KCNJ5基因第445-446位之间是否 插入GAA的引物；或特异性鉴定KCNJ5基因第445-446位之间是否插入GAA的探针；或。特 异性鉴定KCNJ5基因第445-446位之间是否插入GAA的芯片。 在一个优选例中，所述的引物是SEQ ID N0:4和SEQ ID N0:5所示序列的引物。 在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：PCR扩增缓冲液，DNA聚合酶和/或说明 试剂盒使用方法的使用说明书。 在本专利技术的另一方面，提供一种筛选治疗醛固酮腺瘤、高醛固酮血症、原发性醛固 酮增多症或离子通道病的潜在物质的方法，所述方法包括： (1)用候选物质处理表达所述的突变型基因的细胞；和 ⑵检测所述细胞的细胞膜离子电流变化情况； 其中，若所述候选物质在统计学上抑制钠离子电流的增加（即减少钠离子电流； 较佳地为：抑制钾离子电流减少（实质恢复正常水平）及抑制钠离子电流增加）（优选显著 抑制，如抑制20%以上，较佳的抑制50%以上；更佳的抑制80%以上），则表明该候选物质是 治疗醛固酮腺瘤、高醛固酮血症、原发性醛固酮增多症或离子通道病的潜在物质。 在一个优选例中，步骤（1)包括：在测试组中，将候选物质加入到表达所述的突变 型基因的细胞中；和/或 步骤（2)包括：检测测试组的细胞中离子电流变化情况，并与对照组比较，其中所 述的对照组是不添加所述候选物质的表达所述的突变型基因的细胞； 如果测试组中钠离子电流显著低于（如低20%以上，较佳的低50%以上；更佳的低 80%以上）对照组，就表明该候选物质是治疗醛固酮腺瘤、高醛固酮血症、原发性醛固酮增 多症或离子通道病的潜在物质。 本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见 的。【附图说明】 图1、KCNJ5基因体细胞突变的具体测序图（1A-1E)及不同物种KCNJ5基因编码的 蛋白质序列比较（IF)。 图2、膜片钳检测KCNJ5新突变位点的功能（2A-2D)。刺激电压为-IOOmv时，新突 变位点引起钾离子电流减小，而钠离子电流增加。【具体实施方式】 本专利技术人经过广泛而深入的研究，发现了一种醛固酮腺瘤相关的KCNJ5的新突变 位点；并且，揭示了该突变位点能影响细胞钾离子通道的选择性，导致细胞膜钾/钠离子通 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种突变型KCNJ5基因，其特征在于，该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高平进，郑芳芳，朱理敏，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，上海市高血压研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31
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