一种电化学发光传感器及其免疫分析方法技术

本发明专利技术公开了一种电化学发光传感器及其免疫分析方法，本发明专利技术的一种电化学发光传感器的制备方法，包括以下步骤：(1)将石英玻璃片在HCL与H2O2的水溶液中浸泡，在1％的3-(2,3环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷GPTMS的甲苯溶液中进行硅烷化反应；(2)用二甲苯和乙醇冲洗并在氩气气氛下吹干；(3)将含有(十二烷基磺酸钠)的金纳米粒子溶液和5.0wt％聚葡萄糖胺(1-4)-2-氨基-B-D葡萄糖溶液混合，与化学发光探针、抗体溶液相混合；(4)将其滴涂到石英玻璃片表面；(5)用磷酸盐缓冲液和烷基酚聚氧乙烯醚冲洗，制得电化学发光免疫传感器。本发明专利技术检测时间短便捷地无标记检测的电化学发光传感器及其免疫分析方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫学领域，具体涉及。
技术介绍
免疫分析法利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质，如药物、激素、蛋白质、微生物等的分析方法。在药物分析中，免疫分析法的应用主要集中在以下几方面:(I)在实验药物动力学和临床药物学中测定生物利用度和药物代谢动力学参数等生物药剂学中的重要数据，以便了解药物在体内的吸收、分解、代谢和排泄情况；(2)在药物的临床检测中，对治疗指数小、超过安全剂量易发生严重不良反应或最佳治疗浓度和毒性反应浓度有交叉的药物血液浓度进行监测；(3)在药物生产中从发酵液或细胞培养液中检测时间短测定有效组分的含量，以实现对生产过程的在线监测；(4)对药品中是否存在特定的微量有害杂质进行评价。免疫分析可分为无标记(直接测定)和标记(间接测定)两种类型。相对标记免疫分析，无标记免疫分析技术能够直接测定生物样品，测定过程中无需预先对抗体或抗原进行标记，具有检测成本低，样品消耗少，耗费时间短，操作简单等显著优势，适应直接、实时、原位、在线的痕量免疫分析，因此引起了人们极大的研宄兴趣，成为生物传感领域发展的一个非常重要方向。目前的无标记型免疫分析主要分为光学免疫分析、压电免疫分析和电化学免疫分析。其中表面等离子共振免疫传感器、石英晶体微天平免疫传感器、电容免疫传感器及交流阻抗免疫传感器，文献中报道的较多。目前，化学发光免疫分析技术在医学临床应用已成为研宄热点，它同时具备了化学发光法的高灵敏度和免疫分析法的高特异性，具有灵敏度高、特异性强、无放射性危害、适用面广、设备简单、线性范围宽等分析优点，日益受到人们的青睐，在生命分析、临床诊断、环境监测、食品安全、药物分析等领域得到了广泛应用，并有取代放射免疫分析和酶联免疫分析成为诊断市场上的主流趋势，而无标记化学发光免疫分析鲜有报道。因此，发展灵敏、检测时间短、成本低和便捷的新型无标记化学发光免疫分析方法，将具有非常重要的科学意义。目前，缺乏一种无标记的检测时间短的电化学发光传感器及其免疫分析方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种无标记的检测时间短的电化学发光传感器及其免疫分析方法。本专利技术的技术方案如下:本专利技术提供了一种电化学发光传感器的制备方法，包括以下步骤:(I)将石英玻璃片在HCL与H2O2的水溶液中浸泡10_12h，用蒸馏水充分清洗后，在氩气气氛中吹干，浸泡在1%的3-(2，3环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷GPTMS的甲苯溶液中进行硅烷化反应，在温度为22°C下放置20-24h ;所述HCL与H2O2的体积比为8:4 ;(2)用二甲苯和乙醇冲洗并在氩气气氛下吹干；(3)将金纳米粒子溶液和5.0wt %聚葡萄糖胺(1-4) -2-氨基_B_D葡萄糖溶液混合后超声至完全分散，然后与化学发光探针、抗体溶液相混合；(4)取上述混合溶液，将其滴涂到石英玻璃片表面，并在温度为22°C下反应2_3h，然后在10°C下放置10-12h;化学发光探针为葡萄糖氧化酶或辣根过氧化物酶；所述抗体溶液为人类免疫球蛋白HIgG抗体溶液或甲胎蛋白AFP抗体溶液；所述葡萄糖氧化酶或辣根过氧化物酶的浓度为6 μ g/ml，人类免疫球蛋白HIgG抗体溶液浓度为50 μ g/ml ；(5)用磷酸盐缓冲液和烷基酚聚氧乙烯醚冲洗五次，并在10°C下用封闭液封闭15-20h，所述封闭液为含I %牛血清白蛋白的0.0lM磷酸盐缓冲液，pH为7.3 ;制得电化学发光免疫传感器。进一步地，在步骤(5)中，磷酸盐缓冲溶液是每0.325-2.469g Na2HPO4.12H20加0.058-0.956g NaH2PO4.2H20在300ml的容量瓶中定容制得。本专利技术的方法制得的电化学发光传感器的免疫分析方法，包括如下步骤:(I)将所述免疫传感器固定在免疫微反应器后，将带抗原样品以0.6ml/min的速度注入流通池，在线温育后形成免疫复合物；所述在线温育时间为18-26min ;(2)用缓冲液PBST以lml/min的速度冲洗免疫复合物，除去未反应的免疫试剂；(3)将化学发光底物溶液以0.5ml/min的速度通入免疫传感器，产生的化学发光信号由光电倍增管记录。进一步地，在步骤(I)中，所述免疫微反应器由带有进口和出口的聚氯乙烯板，所述聚氯乙稀板的长、宽、高分别为3.3cm、l.9cm、l.2cm ;所述娃橡胶片的厚度为3.0mm。进一步地，在步骤(I)中，所述抗原样品为人类免疫球蛋白HIgG，所述人类免疫球蛋白HIgG测量的最佳温育时间为26min。有益效果:本专利技术以化学发光探针和无标记的抗体共固定于具有良好生物相容性的固相界面，制得该免疫传感器，结合流动注射，构建了一种检测时间短便捷的。检测时，免疫传感器固定在免疫微反应器中并通入抗原，在线温育形成免疫复合物，冲洗后通入化学发光底物，随后立即进行发光信号的采集，从而实现成本低，检测时间短，便捷地无标记检测。将流动注射与化学发光免疫分析结合起来，实现分析检测的简单化和自动化，有利于加快整体分析检测时间。【附图说明】图1为本专利技术的HI gG标准样品检测的线性曲线。【具体实施方式】下面将通过附图及具体实施例对本专利技术做进一步的具体描述，但不能理解为是对本专利技术保护范围的限定。实施例1如图1所示，本专利技术提供了一种电化学发光传感器的制备方法，包括以下步骤:(I)将石英玻璃片在HCL与H2O2的水溶液中浸泡10h，用蒸馏水充分清洗后，在氩气气氛中吹干，浸泡在1%的3-(2，3环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷GPTMS的甲苯溶液中进行硅烷化反应，在温度为22°C下放置20h ;所述HCL与H202的体积比为8:4 ；(2)用二甲苯和乙醇冲洗并在氩气气氛下吹干；(3)将金纳米粒子溶液和5.0wt %聚葡萄糖胺(1-4) _2_氨基_B_D葡萄糖溶液混合后超声至完全分散，然后与化学发光探针、抗体溶液相混合；(4)取上述混合溶液，将其滴涂到石英玻璃片表面，并在温度为22°C下反应2h，然后在10°C下放置1h;化学发光探针为葡萄糖氧化酶或辣根过氧化物酶；所述抗体溶液为人类免疫球蛋白HIgG抗体溶液或甲胎蛋白AFP抗体溶液；所述葡萄糖氧化酶或辣根过氧化物酶的浓度为6μ g/ml，人类免疫球蛋白HIgG抗体溶液浓度为50 μ g/ml ；(5)用磷酸盐缓冲液和烷基酚聚氧乙烯醚冲洗五次，并在10°C下用封闭液封闭15h，所述封闭液为含I %牛血清白蛋白的0.0lM磷酸盐缓冲液，pH为7.3 ;制得电化学发光免疫传感器。磷酸盐缓冲溶液是每0.325g Na2HPO4.12H20加0.058g NaH2PO4.2H20在300ml的容量瓶中定容制得。本专利技术的方法制得的电化学发光传感器的免疫分析方法，包括如下步骤:(I)将所述免疫传感器固定在免疫微反应器后，将带抗原样品以0.6ml/min的速度注入流通池，在线温育后形成免疫复合物；所述在线温育时间为18-26min ;(2)用缓冲液PBST以lml/min的速度冲洗免疫复合物，除去未反应的免疫试剂；(3)将化学发光底物溶液以0.5ml/min的速度通入免疫传感器，产生的化学发光信号由光电倍增管记录。在步骤(I)中，所述免疫微反应器由带有进口和出口的聚氯乙烯板，所述聚氯乙稀板的长、宽、高分别为3.3cm、l.9cm、l.2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种电化学发光传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将石英玻璃片在HCL与H2O2的水溶液中浸泡10‑12h，用蒸馏水充分清洗后，在氩气气氛中吹干，浸泡在1％的3‑(2,3环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷GPTMS的甲苯溶液中进行硅烷化反应，在温度为22℃下放置20‑24h；所述HCL与H2O2的体积比为8:4；(2)用二甲苯和乙醇冲洗并在氩气气氛下吹干；(3)将含有(十二烷基磺酸钠)的金纳米粒子溶液和5.0wt％聚葡萄糖胺(1‑4)‑2‑氨基‑B‑D葡萄糖溶液混合后超声至完全分散，然后与化学发光探针、抗体溶液相混合；(4)取上述混合溶液，将其滴涂到石英玻璃片表面，并在温度为22℃下反应2‑3h，然后在10℃下放置10‑12h；化学发光探针为葡萄糖氧化酶或辣根过氧化物酶；所述抗体溶液为人类免疫球蛋白HIgG抗体溶液或甲胎蛋白AFP抗体溶液；所述葡萄糖氧化酶或辣根过氧化物酶的浓度为6μg/ml，人类免疫球蛋白HIgG抗体溶液浓度为50μg/ml；(5)用磷酸盐缓冲液和烷基酚聚氧乙烯醚冲洗五次，并在10℃下用封闭液封闭15‑20h，所述封闭液为含1％牛血清白蛋白的0.01M磷酸盐缓冲液，pH为7.3；制得电化学发光免疫传感器。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张萍，
申请(专利权)人：张萍，
类型：发明
国别省市：广东;44