一种检测禽呼肠孤病毒的试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了一种检测禽呼肠孤病毒的试纸条，其包括：检测层，其包括依次连接的样品吸附层、结合层、纤维素膜层和吸水层，所述样品吸附层限定了用于接触待检测样品的第一端，所述吸水层限定了远离待检测样品的第二端，所述结合层包含有胶体金标记的抗禽呼肠孤病毒的第一抗体；检测线，其设置在所述纤维素膜层上，所述检测线包含包被的抗禽呼肠孤病毒的第二抗体，所述第一抗体和所述第二抗体与所述禽呼肠孤病毒结合的位点不同；对照线，其也设置在所述纤维素膜层上且比所述检测线远离所述第一端，所述对照线包含包被的羊/兔抗小鼠免疫球蛋白G。本实用新型专利技术特异性强、灵敏度高、操作简便、结果显示快速，检测成本低廉的。

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及病毒检测
更具体地说，本技术涉及一种检测禽呼 肠孤病毒的试纸条。
技术介绍
禽呼肠孤病毒（Avian reovirus，ARV)可引起禽的多种疾病，常见的有病毒性关节 炎/腿鞘炎、吸收障碍综合征（MAS)、免疫抑制等，同时ARV可以增加其它病原的易感性和 致病性。ARV在世界范围内广泛存在，流行于鸡、火鸡、鸭和其它禽类。自王锡坤（1985)首 次证实我国存在本病以来，研宄人员已经从不同地方分离到多株ARV。目前，国内各鸡场中 ARV的感染已经相当普遍，给养鸡业造成重要经济损失。由于本病以水平和垂直方式传播， 病毒广泛分布及有较强的抵抗力，因此，ARV感染的防制具有一定的难度。 ARV广泛存在于世界各地，对养禽业的危害日趋严重。1954年，ARV首先从患病鸡 的消化道和呼吸道中分离到，随后世界各地从多种禽类分离到ARV。1985年，王锡坤首次证 明国内存在ARV，此后，多个研宄者研宄表明ARV广泛存在于国内鸡场。关于ARV的研宄，大 部分都和键鞘炎有关，本病因运动障碍、生长停滞、淘汰率高、屠宰率下降、饲料转化率低以 及产蛋下降等造成的严重经济损失，极大影响了我国养鸡业的健康发展。近年来，随着ARV 感染的增加、流行趋势和临床疾病表现形式的多样化，ARV的防制难度不断增大。由于本病 主要是早期感染，而且多数情况感染症状不明显，因此对本病的早期确诊就显得尤为重要。 及时、准确、快速检测ARV，是有效控制ARV感染的前提。目前ARV感染的诊断主 要有常规实验室检测和分子生物学两大类方法。常规方法主要有病毒分离鉴定和ARV抗 体的血清学检测，包括琼脂免疫扩散试验（AGP)、间接免疫荧光抗体试验（IFA)、ELISA等方 法。分子生物学方法主要有PCR、荧光定量PCR和核酸探针技术等。但ARV的病毒分离培 养、46?、正441154、？0?和核酸探针等检测技术操作复杂，需要昂贵的仪器设备、过程较长、 耗时费力，需要特定仪器设备和专业技术人员操作，很难在基层普及，不能满足生产一线或 疫病现场的快速诊断需要。因此，研宄一种快速检测禽呼肠孤病毒感染的检测技术非常重 要而迫切。
技术实现思路
本技术的一个目的是实现对禽呼肠孤病毒快速检测，提供一种结果显示直 观、准确、快速检测禽呼肠孤病毒的试纸条，与其他检测方法相比，该试纸条特异性强、灵敏 度高、操作简便、结果显示快速，检测成本低廉。 本技术提供了一种检测禽呼肠孤病毒的试纸条，包括： 检测层，其包括依次连接的样品吸附层、结合层、纤维素膜层和吸水层，所述样品 吸附层限定了用于接触待检测样品的第一端，所述吸水层限定了远离待检测样品的第二 端，所述结合层包含有胶体金标记的抗禽呼肠孤病毒的第一抗体； 检测线，其设置在所述纤维素膜层上，所述检测线包含包被的抗禽呼肠孤病毒的 第二抗体，所述第一抗体和所述第二抗体与所述禽呼肠孤病毒结合的位点不同，并且所述 禽呼肠孤病毒与第一抗体结合，不影响所述禽呼肠孤病毒与第二抗体结合；对照线，其也设置在所述纤维素膜层上且比所述检测线远离所述第一端，所述对 照线包含包被的羊/兔抗小鼠免疫球蛋白G。 优选的是，所述的检测禽呼肠孤病毒的试纸条中，所述第一抗体为抗禽呼肠孤病 毒的单克隆抗体或多克隆抗体，所述第二抗体为抗禽呼肠孤病毒的多克隆抗体或单克隆抗 体。 优选的是，所述的检测禽呼肠孤病毒的试纸条中，还包括： 支撑层，所述检测层固定在所述支撑层的上表面。优选的是，所述的检测禽呼肠孤病毒的试纸条中，还包括：第一保护膜，其设置在所述检测层的上方，且一端向下弯折包覆住所述第一端，而 另一端延伸到所述纤维素膜层一端的上方；第二保护膜，其设置在所述检测层的上方，且一端向下弯折包覆住所述第二端，而 另一端延伸到所述纤维素膜层另一端的上方； 其中，所述第一保护膜为白色，所述第二保护膜的颜色与所述第一保护膜的颜色 不相同；例如，所述第一保护膜为白色，所述第二保护膜为黄色；所述第一保护膜设置有样品标记线，所述样品标记线与远离所述第一端的所述样 品吸附层的一侧的距离为0. 3~0. 7cm处。优选的是，所述的检测禽呼肠孤病毒的试纸条中，所述支撑层由不吸水的硬质塑 胶片或硬纸条制成；所述吸水层用吸水纸制成。优选的是，所述的检测禽呼肠孤病毒的试纸条中，所述纤维素膜层为硝酸纤维素 膜、纤维素膜、羧化纤维素膜和聚偏二氟乙烯膜中的任意一种制成。 优选的是，所述的检测禽呼肠孤病毒的试纸条中，所述样品吸附层由玻璃棉、尼龙 纤维和聚酯纤维中的任意一种制成。 优选的是，所述的检测禽呼肠孤病毒的试纸条中，所述结合层由玻璃棉、尼龙纤维 和聚酯纤维中的任意一种制成。 优选的是，所述的检测禽呼肠孤病毒的试纸条中，所述检测线和所述对照线的排 列形式为" I I i"、"-r T"、和" h I-"中的任意一种。本技术的有益效果在于： (1)本技术根据ELISA的基本原理，用免疫层析试纸检测病毒，利用微孔滤膜 的渗滤浓缩和毛细管作用，将抗原-抗体反应由ELISA的传统液相环境转到固相滤膜上快 速进行，并采用胶体金印迹代替酶印迹，凭肉眼直接观察胶体金的显色状况，即时获得检测 结果，因此该方法比ELISA等血清学方法更为简便、快速。 (2)检测特异性强，敏感性高。该试纸条以胶体金印迹高亲和力的特异性单抗/多 抗为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷 间的范德华力相结合，胶体金标对单抗/多抗的特异性和亲和力（结合力）影响很小，且具 有较高的印迹率。因此，该试纸条具有较高的特异性和敏感性，可检测到2纳克的相应病毒 的蛋白。 (3)操作简便，快速。使用本技术试纸条时无需附加任何其它仪器和试剂，只 要将其测试端插入待检样品液中30秒左右，然后在过5分钟左右即可判定检测结果。 (4)结果显示直观、准确。该试纸条以显示棕红色的检测印迹和对照线作为检测 的阳性和阴性印迹，即在纤维素膜上显示两条棕红色印迹，表示在被检测样品中有病毒检 出，结果为阳性；在纤维素膜上只显示一条棕红色对照印迹C，表示在被检测样品液中未检 出病毒，结果为阴性。结果判定直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。 (5)减少投资和检测成本。使用该试纸条，不需另配其它仪器、设备和试剂，节省大 量仪器、设备和附加试剂费用；专业和非专业人士均可随时随地进行现场检测，无需支付专 家诊断检查费或送样品去诊断室的路费，节省检测成本，检测费用低。 (6)应用范围广，便于普遍推广应用。本技术操作简单，成"一步式"或"傻瓜 式"，而且方便携带和保存，能满足不同层次人员的需要，包括专业化验、海关检疫、卫生防 疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和较好的经济、 社会效益。【附图说明】 图1为本技术其中一个实施例所述的检测禽呼肠孤病毒试纸条的结构示意 图； 图2为本技术其中一个实施例所述的检测禽呼肠孤病毒试纸条的结构示意 图。【具体实施方式】 下面结合附图对本技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明 书文字能够据以实施。 如图1所示，本技术所述的检测禽呼肠孤病毒的试纸条，包括： 检测层，其包本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测禽呼肠孤病毒的试纸条，其特征在于，包括：检测层，其包括依次连接的样品吸附层、结合层、纤维素膜层和吸水层，所述样品吸附层限定了用于接触待检测样品的第一端，所述吸水层限定了远离待检测样品的第二端，所述结合层包含有胶体金标记的抗禽呼肠孤病毒的第一抗体；检测线，其设置在所述纤维素膜层上，所述检测线包含包被的抗禽呼肠孤病毒的第二抗体，所述第一抗体和所述第二抗体与所述禽呼肠孤病毒结合的位点不同；对照线，其也设置在所述纤维素膜层上且比所述检测线远离所述第一端，所述对照线包含包被的羊/兔抗小鼠免疫球蛋白G。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵朴，郑玉姝，陈玲先，高杰，苗培，屈红军，张双燕，来淑云，崔江玉，邓俊红，韩红霞，马慧敏，王亮，崔光辉，马英英，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：新型
国别省市：河南;41