本发明专利技术涉及一种新的固氮芽孢杆菌及含该菌制备微生物肥料的方法。本发明专利技术从土壤中分离获得了一株新的高效固氮菌，鉴定为解淀粉芽孢杆菌[J-25(1)]。利用J-25(1)和特定颗粒载体，制成具有高效固氮作用的微生物肥料；为保障植物的氮、磷、钾平衡供应，在J-25(1)发酵中可加入解磷芽孢杆菌和解钾芽孢杆菌，在载体中添加含磷和钾矿土，制成既有高效固氮作用，又能提供磷和钾的有机微生物颗粒肥料，可满足蔬菜、果树和农作物营养需求。因在植物生长过程中不再施用化肥，不仅节约了能源，还避免了化肥生产和使用中对环境和水源的污染。同时，该菌肥还可减少土传病害发生，提高农产品产量和质量。经济、社会和生态效益十分显著。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种新的固氮芽孢杆菌及含有该菌株生产微生物肥料的 制备方法。
技术介绍
我国是一个农业大国，肥料在我国粮食生产中占有非常重要的地位。但是由于长 期对化肥的过量和不合理施用，也带来一些不容忽视的问题：1、污染水源：大量使用化肥 和水土流失，氮磷营养物可随地表径流进入地面水体中或下渗，通过土壤进行横向运动，然 后排入下水或地表水体中，使地表水富营养化，或直接污染地下水。2、土壤变板结：由于大 量施用化肥，忽视有机肥的施用，土壤肥力出现某些衰退，有机质匮乏。透气性降低，需氧微 生物活性下降，土壤熟化慢、造成土壤板结、作物根系生长发育不良，影响作物生长。3、盐渍 化加重：过量施用化肥后，土壤中盐离子增多，pH值升高。使土壤盐渍化加重，防碍根系正 常吸水，影响植株生长。4、微量元素缺乏：多年连作的蔬菜等，吸收土壤中的锌、硼、钼、铜、 锰等微量元素，又没有补充施用微肥，致使土壤中微量元素日渐减少，因此严重缺少微量元 素，影响蔬菜等作物的生长发育。5、活土层变浅：大棚和露地蔬菜多实行茬茬交叉间套作， 人工耕作，活土层变浅。6、病虫害积累：连作使病菌虫害在土壤中积累增多，危害加重，根系 因而受害腐烂，甚至全株枯死。由于病虫害严重、农药使用量增加，造成蔬菜污染。降低花 费的用量，是传统农业向生态农业转化重要目标。 微生物肥料是一种环境友好型肥料，也是未来农林业可持续发展的重要方向之 一，它可维持和提高土壤肥力，有利于微生物优势种的繁殖，保持生态平衡，节能减排，且使 用方便等优点。因此，微生物肥料越来越受人类青睐。近年来我国微生物肥料发展很快，品 种不断增加。因菌种、固氮能力、生产技术和配方等原因，目前市场的微生物肥料产品质量 参差不齐。微生物肥料中固氮菌种类、固氮能力、有效活菌数和杂菌量都是产品质量的重要 指标。其中菌种种类和数量是决定微生物肥料肥效的核心问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新型、高效固氮微生物，并将所述固氮微生物吸附于 有机载体上，形成有机微生物肥料。固氮微生物在土壤中温度和湿度适宜的条件下，可大量 繁殖，自行固定空气中的分子态氮，为植物提供氮源。因在植物生长过程中不再施用化学氮 肥，不仅节约了能源，减少了合成氨过程中的三废排放，还避免了过量施肥对环境环境和水 源的污染。同时，有机微生物肥料还可促进作物生长，减少土传病害发生，提高农产品品质 和质量。 本专利技术的目的之一，是提供一株新型、高效固氮的芽孢杆菌。 本专利技术的目的之二，是提供一种适合该高效固氮芽孢杆菌生长培养基 的配方。 本专利技术的目的之三，是提供一种由该新型、高效固氮的芽孢杆菌菌种 制备而成的微生物肥料及其制备方法。 本专利技术的目的之一可以通过采取如下技术方案达到：-株新的高效固氮芽孢杆菌（acillusamyloliquefaciens)，具体的，该菌种被命 名为"J-25(l)"，该菌种从山东省泰安市岱岳区房村镇的蔬菜大棚连续种植番茄10年以上 的土壤中分离，并经驯化，长期保存、转接其性状稳定。 该新型、高效固氮芽孢杆菌已于2014年7月25日通过上海生工生物 工程有限公司通过16SDNA测序，证明该高效固氮芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌，生物学命 名Bacillusamyloliquefaciens，所得序列见序列表，测序单位地址：上海市松江区香闽路 698号，生工生物工程（上海）股份有限公司。 该新型、高效固氮芽孢杆菌的生物学特性为白色，半透明，光滑湿润 菌落，稍隆起，圆形齐整菌落；革兰氏染色菌体紫色，为革兰氏阳性菌，杆状；为生芽孢需氧 菌，可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。生长温度25-55°C，最佳生长温度 37°C，最适PH6. 8-7. 8。在不良条件下，菌体转化产生芽孢，芽孢对不良环境抗逆性强，可短 时间耐受100C尚温。 本专利技术还要求保护一种适合该解淀粉芽孢杆菌（高效固氮芽孢杆菌) 生长的培养基及其制备方法。具体如下： 本专利技术中所使用到的培养基有： 1号固体培养基：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂18-20g/L，PH调 至 7. 2。 1号液体培养基：该培养基不含琼脂，其他成分和含量与1号培养基相同，PH调至 7. 2。 2号固体培养基：牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖2. 5g/L，NaC15g/L，琼脂 18-20g/L，用NaOH调pH至 7. 2。 2号液体培养基：牛肉膏3g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖2. 5g/L，NaC15g/L，用NaOH调 pH至 7. 2。 3号固体培养基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaC15g/L，琼脂18-20g/L，用NaOH调 pH至 7. 2。 3号液体培养基：牛肉膏5g/L，蛋白胨10g/L，NaC15g/L，用NaOH调pH至7. 2。 4号固体培养基：淀粉5g/L，鹿糖lg/L，酵母浸膏0.2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/ L，硫酸铵lg/L，磷酸二氢钾0. 5g/L，硫酸镁0. 2g/L，氯化钠5g/L，琼脂18-20g/L，用NaOH调 pH至 7.2。 4号液体培养基：淀粉5g/L，鹿糖lg/L，酵母浸膏0. 2g/L，蛋白胨5g/L，牛肉膏5g/ L，硫酸铵lg/L，磷酸二氢钾0? 5g/L，硫酸镁0? 2g/L，氯化钠5g/L，用NaOH调pH至7. 2。 以上所有培养基均在使用前经高压蒸汽灭菌（121°C，30分钟），冷却备用。 本专利技术还可采用传统的微生物肥料生产中用到的培养基和培养方法制备该微生 物肥料。该菌的培养条件与普通细菌一致，但为防止其功能退化，需在无糖高盐条件下培 养。 传统的微生物菌种生产中用到的培养基：淀粉100g/L，豆饼粉100g/L，磷酸氢二 钾2g/L，硫酸铵lg/L，硫酸镁0. 5g/L，氯化0. 01g/L，碳酸钙0.lg/L，酵母膏0.lg/L，PH7.2。 高效固氮芽孢杆菌微生物肥料的具体生产方法： -、高效固氮芽孢杆菌菌种保藏及活化培养 菌种以划线培养的方式在1号固体培养基上保藏，短期保藏条件为4°C，每个月活化1 次；长期保藏条件为_20°C，每6个月活化1次。 二、高效固氮芽孢杆菌的培养 1、采用本专利技术提供的方法进行高效固氮芽孢杆菌的培养： 1) 自保存培养基取菌种后，划线接入1号固体斜面培养基，37°C培养箱静置黑暗条件 下培养36小时； 2) 用无菌水冲洗斜面，形成菌悬液； 3) 将1体积菌悬液接入约20体积的1号液体培养基中，37 °C有氧培养至菌体浓度为 109个/ml数量级； 4) 将步骤3)得到的菌悬液加入到约5-10倍体积的2号液体培养基中，37°C有氧培养 至菌体浓度为1〇9个/ml数量级； 5) 将步骤4)得到的菌悬液加入到约50-100倍体积的3号液体培养基中，37°C有氧培 养至菌体浓度为1〇9个/ml数量级； 6) 将步骤5)得到的菌悬液加入到约5-10倍体积的4号培养基中，37°C培养有氧培养 至菌体浓度为1〇9个/ml数量级。 2、采用传统微生物发酵生产方法进行高效固氮芽孢杆菌的培养 培养基：淀粉l〇〇g/L，豆饼粉100g/L，磷酸氢二钾2g/L，硫酸铵lg/L，硫酸镁0. 5g/L， 氯化 〇.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种含新的高效固氮芽孢杆菌[J‑25(1)]微生物肥料的制备方法，其特征在于该微生物肥料中含有一株新的高效固氮芽孢杆菌[J‑25(1)]和特定矿质材料组分制成的颗粒载体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王开运，姜莉莉，武玉国，王红艳，王开元，
申请(专利权)人：王开运，
类型：发明
国别省市：山东;37
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