具有改变的糖基化和降低的效应物功能的包含FC的多肽制造技术

提供了结合多肽(例如，抗体)及其药物偶联物，其包含具有改变的糖基化概貌和降低的效应物功能的Fc结构域。在具体的实施方案中，所述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的天冬酰胺残基；和根据EU编号在氨基酸位点300的丝氨酸或苏氨酸残基。还提供了编码抗原结合多肽的核酸、用于制造这种抗原-结合多肽的重组表达载体和宿主细胞。还提供了使用本文公开的抗原-结合多肽来治疗疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求保护2012年9月12日提交的国际申请号为PCT/EP2012/003819，名称为“抗αβTCR抗体”的申请和2013年3月11日提交的美国临时申请61/776,715，名称为“具有改变的糖基化和降低的效应物功能的包含Fc的多肽”的申请的优先权。本申请还与2013年3月11日提交的名称为“通过糖基工程化的位点特异性抗体药物偶联”的美国临时申请61/776,724、2013年3月11日提交的名称为“高度糖基化的结合多肽”的美国临时申请61/776,710相关。前文提到的申请的内容在本文通过提述以其全文并入。专利技术背景具有降低或消除的Fc糖基化的抗体已被用于炎症和自身免疫性疾病或病症的治疗以降低与不需要的效应物功能相关的副作用或毒性(参见例如，Chan and Carter,Nat.Reviews Immunology,2010)。但是，抗体Fc结构域糖基化对于抗体结构、稳定性和功能至关重要且糖基化可导致抗体具有较差的生物物理特性。相应地，本领域对具有降低的效应物功能但仍保留理想的糖基化的Fc结构域特性的工程化的结合蛋白存在着需求。专利技术概述本公开通过提供包含具有改变的糖基化和降低的效应物功能的Fc结构域的结合多肽(例如，抗体或融合物)和任选的其药物偶联物改进了现有技术。在具体的实施方案中，所述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的天冬酰胺残基；和根据EU编号在氨基酸位点300的丝氨酸或苏氨酸残基。本公开还提供编码抗原-结合多肽的核酸、用于制造这种抗原-结合多肽的重组表达载体和宿主细胞。还提供使用本文公开的抗原-结合多肽来治疗疾病的方法。专利技术人还惊讶地发现本公开的结合多肽(例如，抗体)展示改变的糖基化概貌，其优势在于消除了结合多肽与Fcγ受体的结合，进而改变结合多肽的效应物功能，同时保留糖基化赋予的理想的生物物理特性。此外，在氨基酸位点298的工程化的N-连接糖基化位点也可用作用于效应物部分偶联的位点(如细胞毒性药物)。相应地，一方面本专利技术提供分离的结合多肽，其包含具有改变的糖基化的Fc结构域，其中所述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的天冬酰胺残基；以及根据EU编号在氨基酸位点300的丝氨酸或苏氨酸，且其中所述结合多肽由于所述改变的糖基化展示降低的效应物功能。在一个实施方案中，所述结合多肽在根据EU编号的氨基酸位点299进一步包含丙氨酸残基。在另一实施方案中，所述结合多肽在根据EU编号的氨基酸位点297进一步包含谷氨酰胺残基。在一个实施方案中，所述Fc结构域是IgG1 Fc结构域。在另一实施方案中，所述Fc结构域是人的。在一个实施方案中，所述天冬酰胺残基的侧链与聚糖通过β-糖基酰胺连接基连接。在另一实施方案中，所述聚糖是双触角聚糖。在另一实施方案中，所述具糖是天然存在的哺乳动物糖形。在另一实施方案中，所述结合多肽与具有天然Fc结构域的结合多肽相比具有对于Fcγ受体较低的亲和力。在一个实施方案中，所述Fcγ受体是FcγRI和/或FcγRIIIa。在另一实施方案中，所述结合多肽具有与具有天然Fc结构域的结合多肽对于FcRn受体相似的亲和力。在另一实施方案中，所述聚糖包含具有反应性的醛基。在另一实施方案中，所述聚糖包括包含具有反应性的醛基的氧化的糖类残基。在另一实施方案中，所述氧化的糖类残基是末端唾液酸或半乳糖。在另一实施方案中，所述聚糖与效应物部分连接。在另一实施方案中，所述效应物部分是细胞毒素。在另一实施方案中，所述细胞毒素选自列于表1的细胞毒素组。在另一实施方案中，所述效应物部分是检测剂。在另一实施方案中，所述效应物部分与聚糖的糖类残基通过肟或腙连接基连接。在另一实施方案中，所述糖类残基是聚糖的末端唾液酸或半乳糖残基。在另一实施方案中，所述效应物部分包括pH-敏感的接头、二硫化物接头、酶-敏感的接头或其它可裂解的接头部分。在另一实施方案中，所述效应物部分包括选自表2或14中描述的接头部分的组的接头部分。在一些实施方案中，所述结合多肽是抗体或免疫粘附素。另一方面，本专利技术提供了分离的结合多肽，其包含Fc结构域，其中所述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的游离的天冬酰胺残基；和根据EU编号在氨基酸位点300的游离的丝氨酸或苏氨酸残基。另一发面，本专利技术提供了分离的结合多肽，其包含Fc结构，其中所述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的修饰的天冬酰胺残基；和根据EU编号在氨基酸位点300的游离的丝氨酸或苏氨酸残基。在另一实施方案中，所述效应物部分与聚糖的糖类残基通过修饰的天冬酰胺残基的侧链连接。在一个实施方案中，所述糖类是聚糖的末端唾液酸或半乳糖残基。在一个实施方案中，所述效应物部分与聚糖的糖类残基通过肟或腙连接基连接。在一个实施方案中，所述糖类是聚糖的末端唾液酸或半乳糖残基。在另一实施方案中，所述修饰的天冬酰胺残基与药物效应物部分连接以形成抗体药物偶联物(ADC)。在另一实施方案中，组合物包含在先权利要求任一项的结合多肽和药学上可接受的载剂或赋形剂。在另一实施方案中，本专利技术提供治疗患者的方法，包括施用有效量的本专利技术的组合物。另一方面，本专利技术提供编码本专利技术的结合多肽的分离的多核苷酸。另一发面，本专利技术提供包含所述多核苷酸的载体或包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞。又另一方面，本专利技术提供了一种制造结合多肽的方法，其包括在细胞中表达所述多核苷酸或所述载体。附图简述图1是抗体药物偶联物合成的简要说明，其中毒素部分与抗体聚糖的氧化唾液酸残基使用肟连接基相连。图2是展示糖基化突变体的表达和纯化的考马斯蓝染色凝胶。图3描绘表面等离子体共振实验的结果，用以评估αβTCR HEBE1 IgG抗体突变体与重组人FcγRIIIa的结合(V158&F158)。图4描绘表面等离子体共振实验的结果，用以评估αβTCR HEBE1 IgG抗体突变体与重组人FcγRI的结合。图5描绘在突变抗αβTCR抗体存在下来自PBMC的关于TNFa、GM-CSF、IFNy和IL10的细胞因子释放概貌(第2天)。图6描绘在突变抗αβTCR抗体存在下来自PBMC的关于IL6、IL4和IL2的细胞因子释放概貌(第2天)。图7描绘在突变抗αβTCR抗体存在下来自PBMC的关于TNFa、GM-CSF、IFNy和IL10的细胞因子释放概貌(第4天)。图8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的结合多肽，其包含具有改变的糖基化的Fc结构域，其中所述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的天冬酰胺残基；和根据EU编号在氨基酸位点300的丝氨酸或苏氨酸，且其中所述结合多肽由于所述改变的糖基化展示降低的效应物功能。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.09.12 EP PCT/EP2012/003819;2013.03.11 US 61/71.一种分离的结合多肽，其包含具有改变的糖基化的Fc结构域，其中所
述Fc结构域包含：根据EU编号在氨基酸位点298的天冬酰胺残基；和根据EU
编号在氨基酸位点300的丝氨酸或苏氨酸，且其中所述结合多肽由于所述改变
的糖基化展示降低的效应物功能。
2.权利要求1的结合多肽，进一步包含根据EU编号在氨基酸位点299的丙
氨酸残基。
3.权利要求1的结合多肽，进一步包含根据EU编号在氨基酸位点297的谷
氨酰胺残基。
4.在先权利要求任一项的结合多肽，其中所述Fc结构域是IgG1Fc结构
域。
5.在先权利要求任一项的结合多肽，其中所述Fc结构域是人的。
6.在先权利要求任一项的结合多肽，其中所述天冬酰胺残基的侧链与聚
糖通过β-糖基酰胺连接基连接。
7.权利要求4的结合多肽，其中所述聚糖是双触角聚糖。
8.权利要求4或5的结合多肽，其中所述聚糖是天然存在的哺乳动物糖
形。
9.在先权利要求任一项的结合多肽，其与具有天然Fc结构域的结合多肽
相比具有较低的对于Fcγ受体的亲和力。
10.所述结合多肽，其中所述Fcγ受体是FcγRI和/或FcγRIIIa。
11.在先权利要求任一项的结合多肽，其具有与具有天然Fc结构域的结
合多肽相比具有相似的对于FcRn受体的亲和力。
12.权利要求6-11任一项的结合多肽，其中所述聚糖包含具有反应性的醛
基。
13.权利要求6-11任一项的结合多肽，其中所述聚糖包含氧化的糖类残
基，所述氧化的糖类残疾包含具有反应性的醛基。
14.权利要求13的结合多肽，其中所述氧化的糖类残基是末端唾液酸或
半乳糖。
15.权利要求6-11任一项的结合多肽，其中所述聚糖与效应物部分连接。
16.权利要求15的结合多肽，其中所述效应物部分是细胞毒素。
17.权利要求16的结合多肽，其中所述细胞毒素选自列于表1的细胞毒素
组。
18.权利要求17的结合多肽，其中所述效应物部...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·潘，H·邱，
申请(专利权)人：建新公司，
类型：发明
国别省市：美国;US