一种复方土霉素注射液含量的测定方法技术

本发明专利技术公开一种复方土霉素注射液含量的测定方法，应用于含量测定技术领域。包括液相色谱条件的选定及系统适用性试验，对照品溶液的制备，供试品溶液的制备和测定四个步骤。本发明专利技术用同一个液相色谱条件即可同时测定土霉素与酮洛芬两种主成分的含量，原来的方法需进行四次液相色谱测试和配制四种溶液，现在只需进行两次液相色谱测试和配制两种溶液即可，缩短了液相色谱测试的时间和配制溶液的时间，提高了检测效率。在流动相B中加入0.1％三乙胺，有效改善液相色谱图中土霉素峰的拖尾现象，使液相色谱图得到的土霉素的峰面积更加准确。

【技术实现步骤摘要】
一种复方土霉素注射液含量的测定方法
本专利技术涉及一种注射液含量的测定方法，具体涉及一种复方土霉素注射液含量的测定方法。
技术介绍
复方土霉素注射液为我公司研发的兽用复方制剂抗菌药，主要成分含土霉素和酮洛芬，其余成分为添加剂，例如有机溶媒、抗氧剂、络合剂、止痛剂，pH调节剂，复方土霉素临床具有动物解热、抗炎及镇痛作用。由于该品种在中国兽药典、国家其他法定标准以及国外药典中均无收载，生产企业在对复方土霉素注射液进行质量控制时，对土霉素进行控制时一般参照中国兽药典2010版土霉素的含量测定方法或者参照文献里土霉素含量的测定方法进行测定，对酮洛芬进行控制时参照中国药典2010版酮洛芬肠溶胶囊的含量测定方法，然而中国兽药典2010版土霉素的含量测定方法中流动相复杂繁琐，而且对复方土霉素注射液进行含量测定时，需要在两种不同的色谱条件下分别对土霉素与酮洛芬进行测定，共需要两次对色谱柱进行梯度洗脱，而且还要设定两次色谱检测条件，分别配置两次对照品溶液和两次供试品溶液，这种分别检测两种主要成分含量的方法存在检验时间长、步骤繁琐效率低的问题。
技术实现思路
本专利技术是提供一种复方土霉素注射液含量的测定方法，使复方土霉素注射液含量的测定更加准确、高效。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案是：一种复方土霉素注射液含量的测定方法，包括以下步骤：(A)液相色谱条件的选定及系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；以乙腈为流动相A，以体积比为85:15的0.01％盐酸-乙腈溶液为流动相B，检测波长为254nm；理论板数按土霉素峰计算不低于3000，与相邻的峰分离度大于1.5；(B)对照品溶液的制备取土霉素对照品和酮洛芬对照品，用体积比为90:10的0.01％盐酸-甲醇溶液溶解，配制成同时包含土霉素和酮洛芬的对照品溶液；每毫升对照品溶液中包含0.2mg土霉素、0.03mg酮洛芬；(C)供试品溶液的制备取待测的复方土霉素注射液，用体积比为90:10的0.01％盐酸-甲醇溶液溶解，配制成供试品溶液；每100ml供试品溶液中含10ml复方土霉素注射液；(D)测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪进行梯度洗脱；按外标法以峰面积计算供试品溶液的浓度。本专利技术的进一步改进在于：流动相B中还含有三乙胺，所述三乙胺的加入体积为流动相B体积的0.08％～0.12％。本专利技术的进一步改进在于：所述三乙胺的加入体积为流动相B体积的0.10％。本专利技术的进一步改进在于：所述步骤C的具体制备过程为：取待测的复方土霉素注射液摇匀，量取复方土霉素注射液置于量瓶中，加体积比为90:10的0.01％盐酸-甲醇溶液，超声处理15分钟使溶解，放冷；然后再用体积比为90:10的0.01％盐酸-甲醇溶液定溶至量瓶刻度，即配制得供试品溶液。本专利技术的进一步改进在于：所述步骤D中，梯度洗脱的具体过程为：0～15分钟用100％的流动相B洗脱，15～45分钟用流动相A、流动相B组成的混合流动相进行洗脱，45～50分钟用100％的流动相B进行洗脱；所述混合流动相中包含体积比40％的流动相A和60％的流动相B。本专利技术的进一步改进在于：所述梯度洗脱的具体过程为：前15分钟用100％的流动相B洗脱；15～20分钟用0→40％的流动相A和100→60％流动相B进行洗脱，即从15分钟开始逐渐增加流动相A的比例、减少流动相B的比例，形成混合流动相，到第20分钟，混合流动相的比例固定为40％流动相A、60％流动相B；20～40分钟用40％的流动相A和60％流动相B进行洗脱，即20～40分钟用40％流动相A、60％流动相B组成的混合流动相进行洗脱；40～45分钟用40→0％流动相A和60→100％流动相B进行洗脱，即从40分钟开始逐渐减少流动相A的比例、增加流动相B的比例，到第45分钟，洗脱剂转换为100％流动相B；45～50分钟用100％的流动相B进行洗脱。由于采用了上述技术方案，本专利技术所取得的技术进步在于：本专利技术用同一个液相色谱条件即可同时测定土霉素与酮洛芬两种主成分的含量，原来的方法需进行四次液相色谱测试和配制四种溶液，现在只需进行两次液相色谱测试和配制两种溶液即可，缩短了液相色谱测试的时间和配制溶液的时间，节省了时间和操作步骤，提高了检测效率。本专利技术方法具有良好的专属性，为复方土霉素注射液含量测定的专属方法，且测定方法准确度高，重现性好，已在生产实际中已得到验证，成为判定产品是否合格的重要技术性文件和依据，适于在质量控制标准中采用，有利于大面积推广使用。本专利技术在85:15的0.01％盐酸-乙腈溶液流动相B中加入0.1％三乙胺，三乙胺的加入可以有效改善液相色谱图中土霉素峰的拖尾现象，使液相色谱图得到的土霉素的峰面积更加准确，更有利于对土霉素含量的精确测定。本专利技术所述方法土霉素和酮洛芬的浓度含量与峰面积之间存在良好的线型关系，因此本专利技术方法中土霉素和酮洛芬的计算方法可以通过简单的外标法计算得到，计算方法简单。由于复方土霉素溶液具有良好的稳定性，因此本专利技术方法适用于连续多个样品的含量测定，待测溶液不用现用现配，待测溶液放置一段时间之后仍然可以用本方法进行测量，不需要再重新配置，节省了实验人员的劳动强度。(一)关于土霉素峰的拖尾现象图1为两种不同流动相条件下土霉素液相色谱图对比。图1a为以乙腈为流动相A，以85:15的0.1％磷酸：乙腈溶液为流动相B(流动相B中加入了0.1％三乙胺)测定的复方土霉素液相色谱图，图1a中的第一个峰为土霉素峰，第二个峰为酮洛芬峰；图1b为以乙腈为流动相A，以85:15的0.1％磷酸：乙腈溶液为流动相B测定的复方土霉素液相色谱图，图1b中的第一个峰为土霉素峰，第二个峰为酮洛芬峰。从图中可以很直观地看出，图1a中的土霉素峰的拖尾要比图1b中的土霉素峰的拖尾小很多，三乙胺的加入有效改善了液相色谱图中土霉素峰的拖尾现象。(二)关于本专利技术方法的专属性(1)土霉素对照品溶液的配置：取土霉素对照品适量，精密称定，加0.01％盐酸-甲醇溶液(90:10)定量制成每1ml含0.2mg土霉素的溶液，精密吸取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图2a；(2)酮洛芬对照品溶液的配置：取酮洛芬对照品适量，精密称定，加0.01％盐酸-甲醇溶液(90:10)定量制成每毫升含0.03mg酮洛芬的溶液，精密吸取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图2b；(3)供试品溶液的配置：取复方土霉素注射液摇匀，精密量取适量置于100ml量瓶中，加0.01％盐酸-甲醇溶液(90:10)约70ml，超声处理15分钟，使溶解，放冷，用0.01％盐酸-甲醇溶液(90:10)定溶至刻度，定量制成每1ml含0.2mg土霉素和0.03mg酮洛芬的溶液，精密吸取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图见图2c。色谱检测结果见表1。表1对照品溶液与供试品溶液的专属性对比由表1可知，对照品溶液的色谱图中与供试品溶液色谱图中主峰的保留时间一致，供试品溶液中两主峰与相邻峰的分离度符合要求，该方法的专属性良好。(三)关于本专利技术方法的准确性和重现性对华药股份有限公司制剂分厂生产的141002批次复方土霉素注射液分别采用本专利技术方法和已公开方法(徐春明，简单流动相测定土霉素的含量，《工程科学》)和药典本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种复方土霉素注射液含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：(A)液相色谱条件的选定及系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；以乙腈为流动相A，以体积比为85:15的0.01％盐酸‑乙腈溶液为流动相B，检测波长为254nm；理论板数按土霉素峰计算不低于3000，与相邻的峰分离度大于1.5；(B)对照品溶液的制备取土霉素对照品和酮洛芬对照品，用体积比为90:10的0.01％盐酸‑甲醇溶液溶解，配制成同时包含土霉素和酮洛芬的对照品溶液；每毫升对照品溶液中包含0.2mg土霉素、0.03mg酮洛芬；(C)供试品溶液的制备取待测的复方土霉素注射液，用体积比为90:10的0.01％盐酸‑甲醇溶液溶解，配制成供试品溶液；每100ml供试品溶液中含10ml复方土霉素注射液；(D)测定分别吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪进行梯度洗脱；按外标法以峰面积计算供试品溶液的浓度。

【技术特征摘要】
1.一种复方土霉素注射液含量的测定方法，其特征在于包括以下步骤：(A)液相色谱条件的选定及系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填充剂；以乙腈为流动相A，以体积比为85:15的0.01％盐酸-乙腈溶液为流动相B，检测波长为254nm；理论板数按土霉素峰计算不低于3000，与相邻的峰分离度大于1.5；(B)对照品溶液的制备取土霉素对照品和酮洛芬对照品，用体积比为90:10的0.01％盐酸-甲醇溶液溶解，配制成同时包含土霉素和酮洛芬的对照品溶液；每毫升对照品溶液中包含0.2mg土霉素、0.03mg酮洛芬；(C)供试品溶液的制备取待测的复方土霉素注射液，用体积比为90:10的0.01％盐酸-甲醇溶液溶解，配制成供试品溶液；每100ml供试品溶液中含10ml复方土霉素注射液；(D)测定分别吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪进行梯度洗脱；按外标法以峰面积计算供试品溶液的浓度；所述步骤D中，梯度洗脱的具体过程为：0～15分钟用100％的流动相B洗脱，15～45分钟用流动相A、流动相B组成的混合流动相进行洗脱，45～50分钟用100％的流动相B进行洗脱；所述混合流动相中包含体积比40％的流动相A和60％的流动相B。2.根据权利要求1所述的一种复方...

【专利技术属性】
技术研发人员：王卓，王秀英，黄娜，贾智，王欣昕，肖利红，王词，范永刚，段瑞亭，
申请(专利权)人：华北制药河北华诺有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13