本发明专利技术公开了一种黄曲霉毒素B1生物降解剂及其制备方法。该方法以工业生产食用菌黑木耳所产生的菌糠为原料，提取对黄曲霉毒素B1有较好降解作用的胞外酶系，经浸提、透析、预冻及真空冷冻干燥等工艺制得具有高效降解黄曲霉毒素B1的生物降解剂。成本低廉，工艺简单，降解高效，同时实现了菌糠的废物利用，绿色环保。该方法对工业化大规模生产黄曲霉毒素B1降解剂奠定了基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于降解剂制备
，涉及一种，具体涉及一种黄曲霉毒素B1。
技术介绍
黄曲毒素(af Iatoxin)，也称作黄曲霉素，是一种有强烈生物毒性的化合物，常由黄曲霉及另外几种霉菌在霉变的谷物中产生，如大米、豆类、花生等，是目前为止最强的致癌物质。加热至280°C以上才开始分解，所以一般的加热不易破坏其结构。黄曲毒素主要有81、82、61与624种，又以&的含量最多、毒性最强。粮油类作物储存不当，极容易发霉变黄，产生黄曲毒素B1，将造成大量的粮食浪费。黄曲霉毒素B1对人体及动物的损伤主要有致畸、致癌及肝脏损伤这三方面，还会引起组织失血、厌食等症状，对人类健康造成极大威胁。因此，迫切需要一种高效又安全的方法降解该毒素。目前对黄曲霉毒素B1降解方法研宄主要有物理方法，化学方法，及酸碱处理，氧化还原处理等，即吸附、萃取射线处理等，如申请号200910078708.8的专利即是利用γ射线处理。生物方法大多利用土壤中分离的细菌真菌或保藏的菌种提取胞外酶来降解，如申请号为201210133701.3就用黑曲霉提供的一种降解剂。
技术实现思路
为了克服上述现有技术存在的缺陷，本专利技术提供了一种黄曲霉毒素B1，该方法操作简单，降解高效安全，并且实现了废弃菌糠的再利用，制备过程不添加化学物质，安全环保，成本低廉；经该方法制得的生物降解剂的降解率达到88.16%以上。本专利技术是通过以下技术方案来实现:一种黄曲霉毒素B1生物降解剂的制备方法，包括以下步骤:I)将黑木耳菌糠置入PBS缓冲液中浸泡4?6h，得到粗提取液；2)将粗提取液过滤，弃去固形粗杂质，然后离心取上清液，得到粗酶液；3)将粗酶液倒入清洗过的超滤系统中，进行三级膜过滤处理，弃去滤液，收集滤出物，得到浓缩酶泥；4)将浓缩酶泥在-20°C下预冻10?15h，然后进行真空冷冻干燥，制得黄曲霉毒素B1生物降解剂。步骤I)是按照1:2的固液比，将黑木耳菌糠浸泡于PBS缓冲液中，且浸泡过程中每隔30min搅拌一次。步骤I)所述的 PBS 缓冲液是将 8.0Og NaCl,0.20g KCl，1.14g NaHPO4及 0.24gKH2PO4W蒸馏水溶解并定容至100mL后制得。步骤2)所述的过滤是将粗提取液用8层纱布进行过滤；离心是在6000?8000rpm条件下，离心10?20min。步骤3)所用超滤系统使用前的清洗程序为使用前先用0.1mol/LNaOH洗30min，再用清水洗30min (洗完后pH为中性)，清洗后调节超滤系统压力表至上压力表〈0.25MPa，下压力表〈1.5MPa。步骤3)所述的三级膜过滤处理具体为:先用截流分子量为300KDa的膜过滤，收集滤液，清洗超滤系统，再将滤液用截流分子量为10KDa的膜过滤，收集滤液，清洗超滤系统，最后用截流分子量为1KDa的膜过滤，弃去滤液，收集滤出物。步骤4)所述的真空冷冻干燥是在-50°C、真空度为1.0?1Pa下干燥8?15h。由本专利技术方法制得的生物降解剂降解黄曲霉素降解率>80%。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点:本专利技术公开的黄曲霉毒素B1的，利用食用菌黑木耳产生的胞外酶系对黄曲霉毒素B1降解效果较好这一原理，以工业生产食用菌黑木耳的废弃物菌糠为原料，经提取、透析、低温冷冻干燥制得能够降解黄曲霉毒素B1生物降解剂。该方法所用原料价格低廉，实现了工业生产黑木耳产生废物的进一步利用，绿色环保，该生物降解剂制剂过程简单，得到的粉剂生物活性高，降解率达到88.16%以上。本专利技术为工业化大规模生产黄曲霉毒素降解剂奠定了基础，具有很高的应用价值和市场潜力。【附图说明】图1为本专利技术制得的生物降解剂降解黄曲霉素降解曲线图。【具体实施方式】下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。本专利技术实施例所用的黑木耳菌糠来自黑木耳工业生产厂。实施例1一种黄曲霉毒素B1生物降解剂的制备方法，包括以下步骤:I)配制 PBS 缓冲液，过程如下:称取标准 NaCl 8.00g, KCl 0.20g，NaHPO4 1.14g，KH2PO4 0.24g，加蒸馏水溶解并定容至lOOOmL，得到PBS缓冲液。2)按照1:2的固液比，将黑木耳菌糠浸泡于PBS缓冲液中浸泡4h，浸泡过程中每隔30min搅拌一次，得到粗提取液。3)将粗提取液用8层纱布过滤，弃去固形粗杂质；在8000rpm条件下离心15min，取上清液，即得到混合酶的粗酶液。4)将超滤系统先用0.1mol/LNaOH洗30min，再用清水洗30min，洗完后pH为中性。5)将粗酶液倒入清洗过的超滤系统中，调节压力表至上压力表〈0.25MPa，下压力表〈1.5MPa，先用截流分子量为300KDa的膜过滤，收集滤液，清洗超滤系统，再将滤液用截流分子量为10KDa的膜过滤，收集滤液，清洗超滤系统，最后用截流分子量为1KDa的膜过滤，弃去滤液，收集滤出物，即为浓缩酶泥。6)将20mL浓缩酶泥放入培养皿中，在_20°C下预冻12h，然后进行真空冷冻干燥，在_50°C、真空度为1.0?1Pa下干燥12h，制得降解粉剂。实施例2一种黄曲霉毒素81生物降解剂的制备方法，包括以下步骤:I)配制 PBS 缓冲液，过程如下:称取标准 NaCl 8.00g, KCl 0.20g，NaHPO4 1.14g，KH2PO4 0.24g，加蒸馏水溶解并定容至lOOOmL，得到PBS缓冲液。2)按照1:2的固液比，将黑木耳菌糠浸泡于PBS缓冲液中浸泡6h，浸泡过程中每隔30min搅拌一次，得到粗提取液。3)将粗提取液用8层纱布过滤，弃去固形粗杂质；在6000rpm条件下离心15min，取上清液，即得到混合酶粗酶液。4)将超滤系统先用0.1mol/LNaOH洗30min，再用清水洗30min，洗完后pH为中性。5)将粗酶液倒入清洗过的超滤系统中，调节压力表至上压力表〈0.25MPa，下压力表〈1.5MPa，先用截流分子量为300KDa的膜过滤，收集滤液，清洗超滤系统，再将滤液用截流分子量为10KDa的膜过滤，收集滤液，清洗超滤系统，最后用截流分子量为1KDa的膜过滤，弃去滤液，收集滤出物，即为浓缩酶泥。6)将15mL浓缩酶泥放入培养皿中，在当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种黄曲霉毒素B1生物降解剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将黑木耳菌糠置入PBS缓冲液中浸泡4～6h，得到粗提取液；2)将粗提取液过滤，弃去固形粗杂质，然后离心取上清液，得到粗酶液；3)将粗酶液倒入清洗过的超滤系统中，进行三级膜过滤处理，弃去滤液，收集滤出物，得到浓缩酶泥；4)将浓缩酶泥在‑20℃下预冻10～15h，然后进行真空冷冻干燥，制得黄曲霉毒素B1生物降解剂。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：宋宏新，雷娇，周丹，徐丹，程妮，黄萌，郭林新，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西;61
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