本发明专利技术涉及用于改善验证在人或动物粪便中生物标记物的方法的性能的检验试剂盒，其可以作为病理学的，特别是发生在胃肠道（食管、胃、小肠、胆管、胰腺和大肠）中的恶性事件的指示。本发明专利技术教导并描述了方法，以及组合快速检验的用途和实施方案，其对于现有技术是新的并且更有效率。用于实施检验试剂盒和它的最优匹配试剂的组合快速检验盒含有2个侧流检验条，其对于现有技术是新的并且更有效率，用于同时——在技术意义上——验证M2-PK生物标记物和血红蛋白生物标记物。所述检验作为对诊断先证者的“双重过滤器”作为肠癌筛选程序的一部分（肠癌早期检测检查）。M2-PK和/或血红蛋白生物标记物的阳性诊断提示了由医生进行的以进一步诊断为目的的结肠镜检查。所述检验是非常有成本效益的并且通过在早期检测肠癌和其结果削减了医疗系统中的成本。所述检验结果优选地以多种颜色、字母、数字和/或几何图形的形式显示。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】同时验证在粪便中的生物标记物用于检测在胃肠道内，特别是肠内病理变化的检验试剂盒（组合快速检验）专利
本专利技术涉及商业上可应用的、成本降低的、新型检验试剂盒（组合的快速检验盒）、体外医疗设备、侧流盒（lateralflowcassetee）、现场即时检验（pointofcaretest）、组合的快速检验、生物测定、快速侧流测试条、平台，用于实施用于在人和/或动物的粪便中检测生物标记物的方法。所述检验试剂盒通过检测可以提供生理变化指示的生物标记物、特别是在胃肠道中恶性事件（食管、胃、小肠、胆管、胰腺和结肠）、特别是肠的肿瘤和肿瘤前体（息肉、腺瘤）的生物标记物，用于健康分析、早期检测和“结肠癌预防”。本专利技术更特别地涉及用于同时执行免疫层析检测方法的组合的快速检验和组合的快速检验盒和其组分以及需要的试剂。同时的（Synchronous）在语言学含义上是指“同步的”（“simultaneous”），但是同时的在技术含义上还指用于在快速检验盒中检测两种生物标记物肿瘤M2-PK和血红蛋白的活性配对（层析条件、膜、试剂、分配速率等，见描述）的共同的最优协调组合。本专利技术进一步涉及评估检验和结果展示（使用交通灯颜色的“风险影响方案”）的更简单的方法。将组合的快速检验用于在结肠癌筛选程序中的“预过滤”先证者（“pre-filtering”probands）。因为在先证者中实施非侵入性的组合的快速检验比执行侵入性的结肠镜检查导致显著地有更少的焦虑，该检验导致增加的结肠镜检查的参与。专利技术背景癌症，特别地结肠癌是在德国最常见的癌症（65,000例新病例，27,000例死亡）。在欧洲，每年有200,000人死于这种危险的疾病。由于结肠癌的起源方式，结肠癌疾病的结果可以通过成功的筛选，即前体（息肉/腺瘤）的检测和其移除，显著地最小化。在德国每20分钟有一人死于结肠癌。结肠癌几乎总是从肠壁（intestinallining）（黏膜）最初的良性生长发展。癌症缓慢地生长并且罹患的人长时间不会注意到它。通常地，症状只会在当肿瘤变大或已经转移时出现。如果未治疗，结肠癌随后通常在12个月内导致死亡。因为它的起源方式，结肠癌的结果可以通过无症状的先证者的成功筛选几乎完全地预防。前体（息肉/腺瘤）可以通过筛选措施在早期检测到。结肠镜检查被视为结肠癌早期检测最好的方法（黄金标准）。结肠镜检查是只能由特别训练的医生（例如，胃肠病学家）执行的侵入式方法。该过程涉及风险（例如，穿孔、麻醉的风险）。预防性的结肠镜检查由医疗保险对年龄55岁和以上的人群覆盖。然而参与率只有2-3%，并且尽管进行了相当大的教育努力和市场推广，“美丽世界行动”（“glamourworldactions”），参与率如今甚至在下降！除了其它之外，这一问题存在的理由是很多人发现检查的过程令人不愉快（心理抑制阈值）。本专利技术的目的：1.降低心理抑制阈值。2.增加筛选结肠镜检查的参与率。3.校准（去除质量差异）。4.标准化。5.增加诊断准确性。方案：提供简单的、强劲的、廉价的、适合日常的侧流检验，其同样适合通过同时检测两种特异性生物标记物（M2-PK和血红蛋白），用于检测不正常的胃肠疾病，特别是结肠癌和它的前体。组合的快速检验是简单的并且可以容易地执行，适合用于减少鉴于筛选结肠镜检查的心理抑制阈值。只有一种生物标记物M2-PK和/或血红蛋白的阳性诊断会导致医生实施结肠镜检查用于进一步的诊断。会导致通过结肠镜检查的结肠癌和它的前体的更高的检测率，因为使用先前的组合的快速检验获得了先证者的预选。因为所述组合的快速检验同时测定结肠癌的两种重要生物标记物，该检验作为结肠镜检查前的双过滤器。具有其前体的结肠癌（息肉-癌症序列）在肠（黏膜）内开始并且随后扩散至组织的其它区域（黏膜下层、肌层、浆膜）。越过黏膜边界的肿瘤生长称为早期或晚期的结肠癌。因为粪便与肠黏膜直接接触，生物标记物可以在胃肠道中作为病理变化的指示物比在血液中更早并且更特异地分析检测。因此，粪便样本比血液样本优选。只有当肿瘤到达黏膜下层时，早期生物标记物在血液中是可检测的。当这些标记物在血液中可检测时，它们是结肠癌和它的前体的“晚期”形式（“late”forms）。通常地，粪便中生物标记物的测定相比在血液中生物标记物的测定是有利地。越早检测到癌症和它的前体，越能更好的预后。初始的治疗（例如，治疗性结肠镜检查、“小的内脏”手术）导致早期结肠癌几乎100%的治愈。结肠镜检查被视为在肠中检测恶性的、特别是肿瘤过程的“黄金标准”。只允许特定有资格的医生实施结肠镜检查。结肠镜检查进一步的缺点是它不是标准化的。进一步地，“错误的”先证者进行了结肠镜检查。在肠检查（结肠镜检查）期间（所述检查是早期检测的关键组分），约70%的诊断在正常范围内。在只有约四分之一的病例中，诊断出前体，并且在1%的病例中，诊断出癌。因此筛选结肠镜检查是非常低效并且还是昂贵的筛选方法，因为过多的健康先证者进行了结肠镜检查（要减少医疗成本！）。因此，期望在结肠镜检查前执行非侵入性的、廉价的并且敏感的、可靠的检验，其同时测量多个生物标记物，以便使具有阳性检验结果的先证者以针对性的方式进行结肠镜检查（减少死亡数）。通过根据本专利技术的非侵入性的组合的快速检验方法，在用于检测结肠癌和它的前体的筛选程序中的参与率可以极大地增加，并且因此可以获得在患有结肠癌和它的前体的患者（与先证者不同！）生存率的显著增加。如果及时检测到结肠癌和它的前体，这导致患者几乎100%的康复机会。诊断：增加的M2-PK水平和/或血红蛋白水平（在既往病例等的帮助下）导致测量“包”（a“package”ofmeasures）的开始，并且进一步的步骤导致结肠癌的诊断。所述诊断转而导致医生指示，例如手术治疗措施，并且这转而导致结肠癌的治愈，例如，通过手术的治疗可以减少死亡率。同样，在体外检验中，与全部诊断方法一样，所谓的敏感性和所谓的特异性是决定性的质量特点。敏感性是识别像这样的患病个体的可能性。该质量测量在医学领域非常重要，因为在早期检测测量中，当然要尽可以少的忽视患者。特异性是识别像这样的健康个人的可能性。该测量同样在早期检测中是重要的，因为应当避免将健康的人误诊为患病，使之得到不需要的治疗。现有技术水平愈创木脂检验（Guaiactest）（gFOBT）（样本材料：粪便）该化学的粪便检验是基于愈创树脂。通过化学氧化还原反应，将患者粪便样品中隐藏的（潜隐的）血量检测到。因为该化学检验是基于氧化还原电位，并且氧化剂和还原剂对该氧化还原电位干扰，这将是该检验的干扰，并且会导致低敏感性和特异性。在食物中含有氧化剂和还原剂。因此，该检验具有低敏感性和特异性并且因此认为是过时的和淘汰的。此外，已知只有结肠癌和它的前体的严重的流血形式，而不是轻微的流血形式可以检测到。此外，已知存在癌症和它的前体的流血、不流血和间歇性流血形式。因此，取决于取样的时间，可以将结肠癌和它的前体忽视。免疫学粪便检验（iFOBT）（样本材料：粪便）免疫学体外检验也是寻找潜隐血（occultblood），发现其通过前体（息肉）和肿瘤早期阶段进入粪便中的方式。通过使用针对血红蛋白或针对血红蛋白/结合珠蛋白复合体的特异性抗体实现检测。超过10家生产商/经本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于在人粪便中检测生物标记物的检验试剂盒，其包括：第一样本管，含有第一粪便取样设备，第一缓冲溶液，含有缓冲液1= 10 ‑ 70 mM 磷酸盐缓冲液 (pH 6.7 至 7.6)或缓冲液 2 = 10 ‑ 70 mM HEPES 缓冲液 (pH 7.6 至 8.2)或缓冲液3 = 10 ‑ 70 mM 三羟乙基胺 (pH 7.3 至 7.7) 或缓冲液 4 = 10 ‑ 70 mM 醋酸盐缓冲液(pH 5.7)或其混合物，第二样本管，含有第二粪便取样设备，第二缓冲溶液，缓冲液1 = 10 ‑ 70 mM 磷酸盐缓冲液(pH 6.7 至7.6)或缓冲液 2 = 10 ‑ 70 mM HEPES 缓冲液(pH 7.6 至8.2)或缓冲液 3 = 10 ‑ 70 mM 三羟乙基胺 (pH 7.3 至7.7) 或缓冲液 4 = 10 ‑ 70 mM 醋酸盐缓冲液(pH 5.7)或其混合物，检验盒，含有具有硝酸纤维素膜作为固定相的侧流检验系统，所述硝酸纤维素膜进一步含有：单克隆肿瘤M2‑PK小鼠抗体（克隆PA‑TAM3AT, IgG1）和金偶联的单克隆小鼠抗体（克隆1 E3, IgG1），和血红蛋白抗体，优选地单克隆血红蛋白小鼠抗体（克隆M1202100, IgG1）和金偶联的单克隆小鼠抗体（克隆HB11‑2312），第一开口，用于应用来自所述第一样本管的粪便样本，第二开口，用于应用来自所述第二样本管的粪便样本，其中如果肿瘤M2‑PK的量大于4±1单位/ml粪便提取物，所述第一粪便样本的分析结果是阳性，并且如果血红蛋白的量超过每克粪便24μg血红蛋白，所述第二粪便样本的分析结果是阳性。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.07.09 DE 102012013888.1;2012.12.18 DE 20201201.用于在人粪便中检测生物标记物的检验试剂盒，其包括：第一样本管，含有第一粪便取样设备，第一缓冲溶液，含有缓冲液1=pH6.7至7.6的10-70mM磷酸盐缓冲液或缓冲液2=pH7.6至8.2的10-70mMHEPES缓冲液或缓冲液3=pH7.3至7.7的10-70mM三羟乙基胺或缓冲液4=pH5.7的10-70mM醋酸盐缓冲液或其混合物，第二样本管，含有第二粪便取样设备，第二缓冲溶液，含有缓冲液1=pH6.7至7.6的10-70mM磷酸盐缓冲液或缓冲液2=pH7.6至8.2的10-70mMHEPES缓冲液或缓冲液3=pH7.3至7.7的10-70mM三羟乙基胺或缓冲液4=pH5.7的10-70mM醋酸盐缓冲液或其混合物，检验盒，含有具有硝酸纤维素膜作为固定相的侧流检验系统，所述硝酸纤维素膜进一步含有：单克隆肿瘤M2-PK小鼠抗体即克隆PA-TAM3AT,IgG1和金偶联的单克隆小鼠抗体即克隆1E3,IgG1，和血红蛋白抗体和金偶联的单克隆小鼠抗体即克隆HB11-2312，第一开口，用于应用来自所述第一样本管的粪便样本，第二开口，用于应用来自所述第二样本管的粪便样本，其中如果肿瘤M2-PK的量大于4±1单位/ml粪便提取物，所述第一粪便样本的分析结果是阳性，并且如果血红蛋白的含量超过每克粪便24μg血红蛋白，所述第二粪便样本的分析结果是阳性。2.根据权利要求1的检验试剂盒，其中所述血红蛋白抗体为单克隆血红蛋白小鼠抗体即克隆M1202100,IgG1。3.根据权利要求1的检验试剂盒，其中肿瘤M2-PK和/或血红蛋白的检测通过特异性单克隆或多克隆抗体的方法实施，所述特异性单克隆或多克隆抗体...
【专利技术属性】
技术研发人员：H舍费尔斯，U舍费尔斯博尔歇尔，
申请(专利权)人：谢鲍生物科技股份公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE
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