牛奶中磺胺类抗生素残留的检测方法技术

本发明专利技术涉及食品安全检测技术领域，具体来说是一种牛奶中磺胺类抗生素残留的检测方法，步骤为：将无抗生素牛奶作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积比为1:2混合，然后进行分离离心；离心后用1-10％的稀硫酸调节离心上清液pH值为3-5，加入浓度为0.5-1.5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟；色谱测定，计算分离出的残留磺胺类抗生素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算，得出残留的含量；本发明专利技术所需样品量及各种试剂的用量少，对环境危害小，检测过程速度，准确率高，操作简单、耗时短。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品安全检测
，具体来说是一种牛奶中磺胺类抗生素残留的 检测方法。
技术介绍
牛奶含有丰富的矿物质、钙、磷、铁、锌、铜、锰、钼。最难得的是，牛奶是人体钙的最 佳来源，而且钙磷比例非常适当，利于钙的吸收。种类复杂，至少有100多种，主要成份有 水、脂肪、磷脂、蛋白质、乳糖、无机盐等。 牛奶是老少皆宜的营养品，牛奶中若含有抗生素，对长期饮用者来说无疑是等于 长期服用小剂量的抗生素，对抗生素有过敏体质的人服用残留抗生素的乳后会发生过敏反 应。即使是正常饮用者，体内的某些条件性致病菌易产生耐药性，一旦患病再用同种抗生素 治疗很难奏效。抗生素是奶牛场治疗乳房炎的常规药物，由于长期大量使用，使耐药菌株增 加，一些乳房炎病例变得难以用常规方法治愈。这种情况又促使临诊兽医在治疗过程中加 大抗生素的用量。此外，牛奶中抗生素残留会影响奶制品品质，如果用含抗生素的奶做酸奶 或乳酪等，则残留在其中的抗生素会抑制细菌的发酵，使产量和质量降低。因此市场不允许 出售抗生素残留过量的牛奶，同时也造成牛奶生产者的经济损失。 磺胺类抗生素具有对氨基苯磺酰胺结构，是一种人工合成的广谱抗菌药，通过阻 止细菌利用对氨基苯甲酸合成叶酸而抑制细菌的生长繁殖，对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性 菌均有较好的抗菌活性，多用于对细菌感染性疾病的预防和治疗，在畜禽养殖业中扮演着 非常重要的角色。磺胺类抗生素的广泛应用，保障了动物的健康，提高了畜禽生产力，促进 了畜禽养殖业的发展。但药物在动物性食品中残留，对人类健康和公共卫生产生威胁；畜禽 粪便中残留的兽药抗生素进入农田土壤后，不仅造成了土壤的污染，还对整个农业生态环 境造成了危害。建立环境介质中磺胺类抗生素的检测分析方法是研宄其环境行为和生态环 境风险的基础。 食品中存在的磺胺类抗生素属于痕量物质，发达国家多采用高效液相色谱仪-质 谱联用技术进行研宄，但该方法成本相对较高，目前对残留兽用磺胺类抗生素的检测研宄 多在动物性食品领域，在我国的推广使用有一定局限性。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的磺胺类抗生素检测方法成本高、步骤繁琐且多停留在动 物性食品检测领域的缺点与不足，本专利技术的目的在于提供一种牛奶中磺胺类抗生素的检测 方法。 为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种牛奶中磺胺类抗生素残留的检 测方法，步骤包括： (1)将无抗生素牛奶作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积 比为1:2混合，然后进行离心分离；离心后用1-10%的稀硫酸调节离心上清液使其pH值为 3-5,加入浓度为0. 5-1. 5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟；(2)色谱测定，测定的色谱条件为：色谱柱规格为Shim-packVP-ODS， 150X4. 6_，5ym;SPD-20A紫外检测器，检测波长270nm，柱温40°C，流动相：0. 5v/v%乙酸 溶液：乙腈：甲醇=75:20 :5(￥:￥)，流速1.2111171^11，进样量2〇1^; (3)计算分离出的残留磺胺类抗生素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算， 得出残留的含量。 进一步的，所述磺胺类抗生素指磺胺甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶和 磺胺喹恶啉中的至少一种。 进一步的，步骤（1)中，所述离心条件是1000_2500r/min，离心条件为5-10min。 进一步的，步骤（1)中，所述金属盐溶液为硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、硫酸锰溶液、 硫酸镉溶液和醋酸铅溶液中的任意一种。 本专利技术的有益技术效果是：本专利技术利用磺胺类药物在高效液相色谱仪紫外检测器 270nm波长下、焚光检测器激发波长405nm，发射波长495nm下检测效果最佳，通过对流动相 及各组分配比、流速、温度等条件的优化组合，确定目标药物的最佳检测条件。本专利技术所需 样品量及各种试剂的用量少，对环境危害小，检测过程速度，准确率高，操作简单、耗时短。【具体实施方式】 下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本专利技术保护的范围。 实施例 一种，步骤包括： (1)将无抗生素牛奶作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积 比为1:2混合，然后进行离心分离；离心后用1-10%的稀硫酸调节离心上清液使其pH值为 3-5,加入浓度为0. 5-1. 5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟； (2)所用仪器为日本岛津LC-20AT高效液相色谱仪，色谱柱规格为Shim-pack VP-ODS(150X4. 6mm，5ym)，STO-20A紫外检测器，检测波长270nm(采用了磺胺类药物的最 大吸收波长来测定，以提高灵敏度），柱温40°C，流动相：0. 5v/v%乙酸溶液：乙腈：甲醇= 75:20:5(V:V)，流速I. 2mL/min，进样量 20yL，LCSolution工作站。 (3)标准曲线的测定：精确称取4种药物，用甲醇溶解配制4种药物浓度均为 100yg/mL的磺胺混合标准储备液，用流动相稀释，配制4种药物浓度均为0. 05、0. 10、 0. 50、I. 00、2.OOyg/mL的混合标准溶液，采用步骤（2)的条件进行测试，得到工作曲线。4 种药物的线性关系、相关系数及检出限见表1。 表1紫外检测器下4种磺胺类药物线性关系、相关系数及检出限【主权项】1. ，其特征在于，步骤包括： (1) 将无抗生素牛奶作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积比为 1:2混合，然后进行离心分离；离心后用1-10%的稀硫酸调节离心上清液使其pH值为3-5， 加入浓度为〇. 5-1. 5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟； (2) 色谱测定，测定的色谱条件为：色谱柱规格为Shim-packVP-ODS，150X4. 6mm， 5ym;Sro-20A紫外检测器，检测波长270nm，柱温40°C，流动相：0. 5v/v%乙酸溶液：乙腈： 甲醇=75:20:5(V:V)，流速 1.2mL/min，进样量 20yL; (3) 计算分离出的残留磺胺类抗生素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算，得出 残留的含量。2. 根据权利要求1所述，其特征在于：所述磺胺 类抗生素指磺胺甲基嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺喹恶啉中的至少一种。3. 根据权利要求1所述，其特征在于，步骤（1) 中，所述离心条件是l〇〇〇_2500r/min，离心条件为5-10min。4. 根据权利要求1所述，其特征在于，步骤（1) 中，所述金属盐溶液为硫酸铜溶液、硫酸锌溶液、硫酸锰溶液、硫酸镉溶液和醋酸铅溶液中 的任意一种。【专利摘要】本专利技术涉及食品安全检测
，具体来说是一种，步骤为：将无抗生素牛奶作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积比为1:2混合，然后进行分离离心；离心后用1-10％的稀硫酸调节离心上清液pH值为3-5，加入浓度为0.5-1.5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟；色谱测定本文档来自技高网...

【技术保护点】
牛奶中磺胺类抗生素残留的检测方法，其特征在于，步骤包括：(1)将无抗生素牛奶作为空白样品和待测样品分别加入离心试剂酸化乙腈按体积比为1:2混合，然后进行离心分离；离心后用1‑10％的稀硫酸调节离心上清液使其pH值为3‑5，加入浓度为0.5‑1.5g/L的金属盐溶液与离心上清液均匀混合后静置反应10分钟；(2)色谱测定，测定的色谱条件为：色谱柱规格为Shim‑pack VP‑ODS，150×4.6mm，5μm；SPD‑20A紫外检测器，检测波长270nm，柱温40℃，流动相：0.5v/v％乙酸溶液：乙腈：甲醇＝75:20:5(V:V)，流速1.2mL/min，进样量20μL；(3)计算分离出的残留磺胺类抗生素对应的峰面积，根据标准曲线进行定量计算，得出残留的含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙毅，孙靖函，蒋文清，
申请(专利权)人：云南方源科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53