本发明专利技术涉及一种利用血清氧化巯基的性质诊断肝病的方法和试剂盒。血清可氧化巯基，这种性质由血清中静息巯基氧化酶和其它大分子或小分子共同贡献。血清中静息巯基氧化酶专一活力可通过以Amplex超红、辣根过氧化物酶、二硫苏糖醇、吐温为主要试剂的荧光法检测。血清氧化巯基总活力可通过以二硫苏糖醇、二硫代二硝基苯甲酸、盐酸胍为主要试剂的比色法检测。本发明专利技术显示，血清中静息巯基氧化酶专一活力和血清氧化巯基总活力可用于诊断肝病，其中血清氧化巯基总活力的诊断效果更好。还涉及一种用于诊断肝病的试剂盒，包括磷酸盐缓冲液、Amplex超红、辣根过氧化物酶、二硫苏糖醇和吐温；或者包括盐酸胍、二硫代二硝基苯甲酸和二硫苏糖醇等主要试剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及一种诊断肝病的方法，所述方法是利用血清氧化琉基的性质进行的； 具体设及采用血清静息琉基氧化酶专一活力或血清氧化琉基总活力作为生物指标诊断肝 病；本专利技术还设及一种诊断肝病的试剂盒。
技术介绍
常见的肝病有肝炎、肝硬化、原发性肝癌等。用于诊断肝病的血清指标很多，谷丙 转氨酶、谷草转氨酶、甲胎蛋白、白蛋白与球蛋白比值是常用诊断指标。该些指标的敏感性 与特异性均存在局限性，需要新的血清指标提高诊断效果。 静息琉基氧化酶可催化蛋白质中半脱氨酸残基上琉基形成二硫键，在此过程 中，氧气形成过氧化氨。目前检测静息琉基氧化酶专一活力采用WAmplex超红（Amplex 叫traRed，AUR)、辣根过氧化物酶、二硫苏糖醇、吐温为主要试剂的巧光法。利用该方法已在 人和鼠血清检测到静息琉基氧化酶活力，但尚无用此检测方法诊断疾病的报道。血清可氧 化琉基，除了静息琉基氧化酶的贡献，可能还存在其它大分子与小分子促进琉基氧化，可通 过W二硫苏糖醇、二硫代二硝基苯甲酸、盐酸脈为主要试剂的比色法检测血清氧化琉基总 活力，但尚无用此检测方法诊断疾病的报道。
技术实现思路
本专利技术设及一种诊断肝病的方法，其特征在于，W血清氧化琉基的性质诊断肝病。 使用本专利技术的方法诊断肝病能够有效提高诊断肝病的准确率；能够有效区分肝病与非肝疾 病。 所述的肝病是指包括但不限于肝癌、己型肝炎和肝硬化等肝病。所述的非肝疾病 包括但不限于高血压、糖尿病、动脉粥样硬化、胃癌、结肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和前列腺 癌等疾病。 所述的血清氧化琉基的性质可W通过检测血清静息琉基氧化酶专一活力来实现， 使用巧光定量方法（也称巧光法）来测定；或者通过检测血清氧化琉基总活力来实现，使用 比色定量方法（也称为比色法）来测定。 所述的巧光定量方法包括W下关键试剂；Amplex超红（Amplex UltraRed，AUR)、 辣根过氧化物酶、二硫苏糖醇、吐温。[000引所述的比色定量方法包括W下关键试剂；二硫苏糖醇、二硫代二硝基苯甲酸、盐酸 脈。 本专利技术中，无论血清静息琉基氧化酶专一活力还是血清氧化琉基总活力都能够作 为生物指标诊断肝病，并且氧化琉基总活力更好，血清氧化琉基总活力能够进一步提高诊 断肝病的准确率。而且，在其他非肝疾病中氧化琉基总活力基本不变化，能够与肝病区分开 来。 本专利技术还设及一种诊断肝病的试剂盒，其特征在于，包括检测血清氧化琉基的程 度的试剂。 优选地，所述试剂是选自用于检测血清静息琉基氧化酶专一活力和血清氧化琉基 总活力的试剂。 优选地，所述的肝病包括但不限于肝癌、己型肝炎和肝硬化。 所述的试剂盒，其特征在于，包括用于检测静息琉基氧化酶专一活力的巧光定量 法使用的Amplex超红（Amplex叫traRed，AUR)、辣根过氧化物酶、二硫苏糖醇和吐温；或 者包括检测氧化琉基总活力的比色定量法使用的盐酸脈、二硫代二硝基苯甲酸和二硫苏糖 醇。优选地，所述的试剂包括50mM磯酸盐缓冲液（pH7.5，含lmM邸TA)、25yMAmplex超红 (Amplex叫traRed，AUR)、0. 125UM辣根过氧化物酶、50yM二硫苏糖醇和1. 25%吐温；或 者包括6. 6M盐酸脈溶液、lOmM二硫代二硝基苯甲酸和ImM二硫苏糖醇。 更优选地，其中测定血清静息琉基氧化酶专一活力的反应体系为50mM磯酸盐缓 冲液（pH7. W包含ImM邸TA、10 y M Amplex超红、0. 05 y M辣根过氧化物酶、50 y M二硫苏 糖醇和0. 5%吐温；或者测定血清氧化琉基总活力的反应体系包括反应液为200mM肥PES 缓冲液（pH7. 5)包含ImM二硫苏糖醇、反应终止液为6. 6M盐酸脈溶液（P服.0)包含200mM S哲甲基氨基甲烧盐酸盐、显色液为lOmM二硫代二硝基苯甲酸。 本专利技术还设及所述试剂盒的应用，用于检测血清指标，所述指标为血清静息琉基 氧化酶专一活力和血清氧化琉基总活力。【附图说明】 图1A-1F肝病患者血清指标。与健康对照比较，*冲<0.01，**冲<0.001。其中图 1A为白蛋白/球蛋白；图1B为谷丙转氨酶；图1C为谷草转氨酶；图1D为甲胎蛋白；图1E 为静息琉基氧化酶专一活力；图1F为氧化琉基总活力。 图2血清静息琉基氧化酶专一活力与血清氧化琉基总活力的相关性。 图3A-3D利用R0C曲线分析血清指标诊断肝病的效果。其中图3A表示诊断肝癌； 图3B表示诊断己型肝炎；图3C表示诊断肝硬化；图3D表示诊断肝病（由肝癌、己型肝炎、 肝硬化病例合并）。 图4A肝病与非肝疾病患者血清氧化琉基总活力比较；图4B为血清氧化琉基总活 力的R0C曲线分析。【具体实施方式】 下面结合附图，通过实施例对本专利技术作进一步地描述。 本专利技术的实施例包括使用巧光定量法测定血清静息琉基氧化酶专一活力、使用比 色定量法测定血清氧化琉基总活力W及使用商业试剂盒测定血清中白蛋白、球蛋白、谷丙 转氨酶、谷草转氨酶和甲胎蛋白；并且利用受试者工作特征曲线（R0C曲线）分析方法检验 血清指标诊断肝病的效果。 本实施例中所测试血清的人群包含269例慢性肝病患者（其中包括123例肝癌 患者、100例己型肝炎患者和53例肝硬化患者）、548例癌症患者（其中包括101例肺癌患 者、91例胃癌患者、86例结肠癌患者、105例乳腺癌患者、66例卵巢癌患者和99例前列腺患 者）、91例高血压患者、103例糖尿病患者、100例动脉粥样硬化患者和100名健康对照参与 者。所测试血清的人群信息详见表1。 表1所测试血清的人群信息【主权项】1. 一种诊断肝病的方法，所述方法是利用血清氧化巯基的性质进行的。2. 根据权利要求1所述的方法，所述的肝病包括但不限于肝癌、乙型肝炎、肝硬化。3. 根据权利要求1所述的方法，该方法包括检测血清静息巯基氧化酶专一活力或者检 测血清氧化巯基总活力。4. 根据权利要求3所述的方法，检测血清静息巯基氧化酶专一活力采用荧光定量方法 完成，该焚光定量方法包括使用以下关键试剂：Amplex超红（Amplex UltraRed，AUR)、辣根 过氧化物酶、二硫苏糖醇、吐温；检测血清氧化巯基总活力采用比色定量方法完成，该比色 定量方法包括使用以下关键试剂：二硫苏糖醇、二硫代二硝基苯甲酸、盐酸胍。5. -种利用血清氧化巯基性质诊断肝病的试剂盒，其特征在于，包括检测血清氧化巯 基的试剂。6. 根据权利要求5所述的试剂盒，所述的肝病包括但不限于肝癌、乙型肝炎和肝硬化。7. 根据权利要求5所述的试剂盒，所述试剂选自用于检测静息巯基氧化酶专一活力和 血清氧化巯基总活力的试剂。8. 根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括磷酸盐缓冲液、Amplex超 红（Amplex UltraRed，AUR)、辣根过氧化物酶、二硫苏糖醇和吐温；或者包括盐酸胍、二硫代 二硝基苯甲酸和二硫苏糖醇。9. 权利要求8所述的试剂盒，其中所述的试剂包括50mM磷酸盐缓冲液（pH7. 5,含ImM EDTA)、25yM Amplex 超红（Amplex UltraRed，AUR)、0. 125 yM辣根过氧化物酶、125 yM 二 硫苏糖醇和1. 25% (重量）吐温；或者包括6本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种诊断肝病的方法，所述方法是利用血清氧化巯基的性质进行的。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张劲松，孙康，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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