本发明专利技术公开了地中海贫血Pesaro危险分级所对应的铁过载小鼠模型的建立方法，该方法包括以下步骤：给实验小鼠腹腔注射含铁制剂，剂量为每kg体重的小鼠1g铁，每周给铁1次，所述的铁包括Fe2+和Fe3+；小鼠给药1周后可建立Pesaro危险分级中的I级铁过载小鼠模型；给药2-4周可建立Pesaro危险分级中的II级铁过载小鼠模型；给药5-8周可建立Pesaro危险分级中的III级铁过载小鼠模型。本发明专利技术的给药间隔符合地贫患者反复输血逐渐引起的铁过载而诱发的肝肿大和肝纤维化的病理进程；同时可避免短时间大剂量给铁而引起的小鼠急性铁剂中毒死亡，或给铁间隔过长而使小鼠的造模时间过久。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及地中海贫血Pesaro危险分级所对应的铁过 载小鼠模型的建立方法。
技术介绍
地中海贫血（简称地贫，thalassemia)是一种珠蛋白肽链（a、|3链）合成障碍 性贫血，属于常染色体遗传病。因为早期的病例均来自于地中海地区，故称为地中海贫血或 海洋性贫血。以后逐渐发现这种疾病广泛分布于全球热带和亚热带地区，我国长江以南各 省区也是该病的高发区，特别是广东、广西、海南更为常见。据WHO估计，全世界约有3. 45 亿人是地中海贫血的携带者，其中包括8, 000~9, 000万的0-地贫携带者。我国南方地 贫高发区重症地贫患儿的出生率高于全球的平均出生率，重型0地贫和中间型0地贫总 的发生率约为0.2-1. 0%。。 重型0地贫是一种进展性疾病，骨髓移植被认为是目前治愈重型0地贫的唯一 方法，而预处理是骨髓移植的重要环节之一。大多数移植中心采用以白消安/环磷酰胺为 基础的移植预处理方案，其主要目的是：①根除异常的骨髓造血干细胞，最大限度减少复 发，同时为异基因造血干细胞的植入提供空间；②破坏患者免疫系统，为异基因造血干细胞 的植入提供条件，防止移植物被排斥。 预处理方案中所用白消安和环磷酰胺的剂量通常与地中海贫血患者的危险分级 相关。意大利的Pesar0通过对地贫骨髓移植预处理方案完全相同的年龄小于17岁的161 例地贫骨髓移植治疗效果进行多元回归分析，发现：肝肿大超过2cm、肝脏纤维化和不正规 使用去铁胺为三个危险因素，会显著地降低了移植后的生存率。正规使用去铁胺被定义为 开始输血后18个月内使用和皮下注射8-10小时、每周至少5次。这样，Pesaro将地贫患者 分成3个危险等级：1级，3个危险因素均没有；II级，有1-2个危险因素；III级，3个危险因 素均有。文献报道，Pesaro危险分级中，I级和II级患者使用14mg/kg的白消安及200mg/ kg的环磷酰胺处理，而III级患者使用低剂量的环磷酰胺（120-160mg/kg)。广东南方医院 儿科的李春富则根据患者危险级别的不同，同时调整白消安和环磷酰胺的剂量。 预处理方案中所用白消安和环磷酰胺的剂量若过大，会引起不良反应，导致病人 死亡；剂量若不足，则引起移植排斥或复发。为了提高e地贫骨髓移植的成功率，迫切需要 揭示地中海贫血患者的危险级别与预处理用药剂量之间的内在关系，为不同危险级别的患 者制定个性化的预处理方案。地贫Pesar0危险分级的肝肿大、肝纤维化和不正规使用去铁 胺的三个危险因素，主要是由于地贫患者反复输血导致的体内铁过载引起的，因此建立地 中海贫血Pesaro危险分级所对应的铁过载小鼠模型，就成为研宄地贫危险级别与预处理 用药剂量之间内在关系的首要基础任务。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供地中海贫血Pesaro危险分级所对应的铁过载小鼠模型的 建立方法。 本专利技术的目的通过下述技术方案实现： 地中海贫血Pesaro危险分级所对应的铁过载小鼠模型的建立方法，包括以下步 骤： 给实验小鼠腹腔注射含铁制剂，剂量为每kg体重的小鼠Ig铁，每周给铁1次，所 述的铁包括Fe2+和Fe3+; 小鼠注射1周后可建立地中海贫血Pesaro危险分级所对应的I级铁过载小鼠模 型； 小鼠注射2-4周可建立地中海贫血Pesaro危险分级所对应的II级铁过载小鼠模 型； 小鼠注射5-8周可建立地中海贫血Pesaro危险分级所对应的III级铁过载小鼠 丰旲型； 所述的含铁制剂优选右旋糖酐铁、枸橼酸铁铵、蔗糖铁或复合葡萄糖酸钠铁； 实验小鼠的饲养参照一般SPF级实验动物的饲养即可；具体为：饲养环境 20-26°C、相对湿度40-70%，设定光照/黑暗为12h/12h昼夜循环；常规饲料，自由进食、进 水，1周换2-3次垫料。 本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果： 1、本专利技术选用腹腔注射给药，和在饲料中添加铁剂饲喂比较，可防止饲料加工过 程中的铁剂变化，还可保证剂量准确；和灌胃比较，更符合国际动物伦理学的要求；同时可 以避免铁剂口服而导致的胃肠刺激性损伤。 2、本专利技术选用给铁剂量为lg/kg体重，和小剂量的多次给药相比，操作简单。 3、本专利技术的方法中，给药间隔为1次/周，符合地贫患者反复输血逐渐引起的铁过 载而诱发的肝肿大和肝纤维化的病理进程；同时可避免短时间大剂量给铁而引起的小鼠急 性铁剂中毒死亡，或给铁间隔过长而使小鼠的造模时间过久。【附图说明】 图1是铁过载模型小鼠肝脏横切masson三色染色（X200);其中，A:对照组小鼠 肝脏切片masson三色染色；B~I:分别为给铁一周至八周的小鼠肝脏切片masson三色染 色；图中黑色箭头指示的是纤维组织。【具体实施方式】 下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限 于此。 实施例1 地中海贫血Pesaro危险分级所对应的I级铁过载小鼠模型的建立，包括以下步 骤： 取健康C57BL/6小鼠，雄性，8周龄，体重19-23克。于23±2°C、相对湿度55±5% 环境下饲养，设定光照/黑暗为12h/12h昼夜循环。每日给予常规饲料，自由进食、进水，1 周换2-3次垫料。腹腔注射右旋糖酐铁（Fe含量100mg/ml)，Ig铁元素/kg体重，1次/周， 共1周。实验重复3次。 利用肝脏指数（肝脏重量与体重的比值）以及肝脏重量增加比率对小鼠的肝脏肿大程度进行定量分析。 表1结果显示，给右旋糖酐铁1周后小鼠肝脏重量增加18. 7%。根据临床经验：人肝肿大 2cm，一般对应总体积（重量）增加50%。可判断此时小鼠未达到Pes当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
地中海贫血Pesaro危险分级所对应的铁过载小鼠模型的建立方法，其特征在于包括以下步骤：给实验小鼠腹腔注射含铁制剂，剂量为每kg体重的小鼠1g铁，每周给铁1次，所述的铁包括Fe2+和Fe3+；小鼠注射1周后可建立地中海贫血Pesaro危险分级所对应的I级铁过载小鼠模型；小鼠注射2‑4周可建立地中海贫血Pesaro危险分级所对应的II级铁过载小鼠模型；小鼠注射5‑8周可建立地中海贫血Pesaro危险分级所对应的III级铁过载小鼠模型。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李续娥，石俊敏，陶宇晨，张琪玥，刘启发，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东;44
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