本发明专利技术公开了一种水蛭蛆虫蛋白质的制备方法及其在制备抗前列腺癌药品中的应用，所述制备方法如下：将水蛭蛆虫在常温膨化装置中膨化粉碎；然后加入到膨胀溶剂体系提取装置中提取出水蛭蛆虫蛋白质粗品；收集含有水蛭蛆虫蛋白质粗品的溶液并用微孔过滤器过滤去掉杂质；用超滤机超滤处理，收集水蛭蛆虫蛋白质超滤溶液；超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分；将洗脱成分溶解在溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯化；用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉，可用于制备抗前列腺癌药品。本发明专利技术制备的水蛭蛆虫蛋白质制剂质量稳定，结构清楚，药理明晰，疗效明显，含量可检可测，剂型多样，成本较低，适合工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种药物的制备方法及其新用途，尤其是水蛭蛆虫蛋白质的制备方法 及其在制备抗前列腺癌药品中的应用。
技术介绍
前列腺癌是指发生于前列腺体的恶性肿瘤。前列腺癌病理类型上包括腺癌、导管 腺癌、尿路上皮癌、鳞状细胞癌、腺鳞癌，其中前列腺癌占95%以上。 前列腺癌是一种全身性疾病，目前治疗以前列腺根治术、睾丸切除术、内分泌治疗 为主，辅以化疗、放疗等。 中医中药中的活血化瘀药物能有效降低血液黏度和周围血管阻力，有利于免疫系 统对癌细胞的作用。 CN1636017公开了含有蛋白酶激活系列的气单胞菌溶素原及其在前列腺癌治疗中 的使用方法，公开了修饰的气单胞菌溶素原肽，该蛋白包含一个前列腺特异性蛋白酶切割 位点及一个前列腺组织特异性结合结构域。 CN102946878A公开了前列腺癌的治疗方法，采用钌络合物盐作为治疗药物。 CN1222935公开了用于前列腺癌的免疫治疗和免疫诊断的化合物及方法，该专利技术 的化合物包括含有一种前列腺蛋白质的至少一部分的多肽及多肽的核苷酸序列。 CN103347540A公开了用于治疗前列腺癌的抗-a -Y-整联蛋白抗体，通过抗血管 生成抗体DI17E6及其结构性突变体治疗前列腺癌患者。 CN102813939A公开了前列腺癌特异性基因-病毒药物，本药物是将前列腺癌特意 的抗癌基因插入到前列腺癌特异性的溶瘤病毒中而制成。 CN101949565A公开了 T-2毒素在制备治疗前列腺癌的药物中的应用，通过瘤内注 射T-2毒素治疗实体瘤。 CN102421414A公开了用于治疗前列腺癌的组合物，主要用药为地加瑞克及其它药 用盐。 CN102268436A公开了前列腺癌靶向基因的寡核苷酸适配体、递释载体、递释系统 及其制备方法。递释载体由聚阳离子高分子材料、亲水性聚合物和寡核苷酸适配体为基础， 三者以共价方式链接构成，所述递释系统由递释载体与miRNA、SiRNA或质粒DNA形成的基 因递释系统。 CN101928696A公开了一种前列腺癌靶向腺病毒的制备方法及应用，本专利技术涉及一 种前列腺癌特异性免疫溶瘤双功能重组腺病毒载体系统的建立及其在前列腺癌细胞中的 目的基因的表达，病毒特异性复制及溶瘤功能的验证。 CN101816685A公开了预防和治疗前列腺癌的含羟基酸提取物及提取方法与应用， 该方法是将瘤枝藻干燥、粉碎、过筛、超声提取、提取液减压浓缩两次，得到雄性激素依赖型 或非雄性激素依赖型前列腺癌细胞增殖活性的预防和治疗的药品。 CN101442995公开了新型抗前列腺活性剂，该活性剂由含有番茄红素和染料木黄 酮等组成。 CN103860528A公开了一种芳基萘型木质素在制备抗前列腺癌药物中的应用，该发 明所述木质素为6-羟基-4 0 -(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3 a-羟甲基-7-甲氧基-3, 4-二 氢-2-萘醛，并提供了芳基萘型木质素类化合物的提取方法。 CN103813788A公开了治疗前列腺癌的方法，该专利技术公开了用于减少前列腺癌的方 法和组合物。治疗方法包括向受试者施用有效量的抑制前列腺基底上皮细胞增殖的试剂， 施用的试剂选用氟他米特、比卡鲁胺、尼鲁米特和ASC-J9。 CN103897050A公开了一种乌贼墨抗前列腺癌多肽及其制备方法，该方法所述乌贼 墨抗前列腺癌多肽的氨基酸序列为序列表中的SEQ ID No. 1，并提供了制备方法。 CN103204904A公开了一种抗前列腺癌赤魟软骨蛋白多肽及其制备方法和用途，该 抗前列腺癌多肽的氨基酸序列为Ilc-Gla-Pr 0-His (IEPH)，并提供了制备方法。 CN103897037A公开了特异性结合前列腺癌的短肽及其应用，该专利技术提供了一系列 利用噬菌体展示肽库技术筛选得到的具有靶向前列腺癌特性的多肽。 水蛭为医蛭科动物水蛭，蚂蝗的全体，味咸、苦，性平，有毒，归肝经，功能：破血逐 瘀，通经消瘀，但水蛭的副作用较大。 201210315709. 1公开了人工培育水蛭蛆虫的工艺，该专利技术以水蛭等为原料，通过 人工可控的方法定向生成生物活性较高的虫体。该专利技术首次提出一种水蛭基因重组的方 法，该方法可以批量工业化生产，生成的重组水蛭基因蛋白质对前列腺癌有特殊药理作用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种水蛭蛆虫蛋白质的制备方法及其在制备抗前列腺癌药 品中的应用，本专利技术工艺过程中采用适宜的方法提取分离水蛭蛆虫蛋白质，并根据水蛭蛆 虫蛋白质的特性辅以相应的材料至制备成不同剂型的药剂。 本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的： (1)将1000 g水蛭蛆虫在常温膨化装置（200520108339. X)中常温条件下膨化粉碎。 本步骤中，所述膨化压力为0? l~5MPa，时间为10~60min。 (2)膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076. 6)中，加入 膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出水蛭蛆虫蛋白质粗品。 本步骤中，所述膨胀溶剂由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及 100~300gNH 3 ? H2O组成或由l~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组 成。本步骤中，所述提取温度为10~20°C，时间为10~30min。 (3)收集含有水蛭蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质。 本步骤中，所述微孔过滤器的孔径为0. 5~50Mffl。 (4)用超滤机超滤处理，收集含有相应分子量的水蛭蛆虫蛋白质超滤溶液。 本步骤中，所述超滤机的孔径为50~100nm。(5)超滤液溶解在适宜的溶剂中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分。本步骤中，所述溶剂为乙腈。 (6)将洗脱成分溶解在合适的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱 (200920274485. 8)分离纯化。 本步骤中，所述溶剂体系由正丁醇-乙酸乙酯-水(体积比1. 25:3. 75:5)组成或 4. 5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500 (重量比）组成。 (7)纯化后的水蛭蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。 本步骤中，所述真空冷冻干燥温度为_30~50°C、时间为18~26h。 (8)赋予不同的药用辅助材料，分别制备成注射剂、口服剂、栓剂等，可用于制备抗 前列腺癌药品。 本专利技术的优点和有益效果如下：通过本专利技术分离纯化的水蛭蛆虫蛋白质 用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法及葡聚糖凝胶G-75凝胶过滤法测得相对分子量为 10. 7~12. 2KPa ;用等电聚焦法测定其等电点为pH8. 9~9. 6 ;常规化学法分析结果表明其不 含糖类和磷酸基团；紫外分光光度法分析在260nm和280nm测定纯化的水輕蛆虫蛋白质含 量为97. 7%;分子结构属非典型、非单一的昆虫蛋白质，链内与链间不含二硫键，其三级结 构构象单元以无规卷曲为主，a螺旋与e折叠的含量比例基本相当。本专利技术制备的水蛭 蛆虫蛋白质制剂质量稳定，结构清楚，药理明晰，疗效明显，含量可检可测，剂型多样，成本 较低，适合工业化生产。【具体实施方式】 下面结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步的说明，但并不局限如此，凡是对 本专利技术技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本专利技术技术方案的精神和范围，均应涵 盖在本专利技术的保本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种水蛭蛆虫蛋白质的制备方法，其特征在于所述制备方法步骤如下：（1）将1000g水蛭蛆虫在常温膨化装置中常温条件下膨化粉碎；（2）膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置中，加入由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH3·H2O组成或由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组成的膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出水蛭蛆虫蛋白质粗品；（3）收集含有水蛭蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质；（4）用超滤机超滤处理，收集水蛭蛆虫蛋白质超滤溶液；（5）超滤液溶解在乙腈中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分；（6）将洗脱成分溶解在由正丁醇‑乙酸乙酯‑水按体积比1.25:3.75:5组成或由聚乙二醇‑葡聚糖T500按重量比4.5:7组成的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱分离纯化；（7）纯化后的水蛭蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐华民，赵荣华，
申请(专利权)人：哈尔滨工业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
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