利用海洋交替单胞菌制备生物絮凝剂的方法技术

利用海洋交替单胞菌制备生物絮凝剂的方法，涉及一种生物絮凝剂。所述交替单胞菌(Alteromonas sp.)H-6，保藏编号CGMCC No.10612。将甘油管中保藏的菌种接入种子培养基中培养，然后接入斜面培养基中继续培养；将新鲜斜面上的菌落接于种子培养基中培养，取种子液接入发酵培养基培养，得生物絮凝剂；将生物絮凝剂发酵液第一次离心，除去沉淀，收集上清液，在上清液中加入无水乙醇，于4℃冰箱静置过夜后进行第二次离心，除去上清液，将沉淀物溶于水中，用透析袋透析，向透析后的溶液中加入无水乙醇，静置后进行第三次离心，收集最终沉淀物，干燥后即得到生物絮凝剂纯品。无毒无害、无二次污染。

【技术实现步骤摘要】
利用海洋交替单胞菌制备生物絮凝剂的方法
本专利技术涉及一种生物絮凝剂，尤其是涉及一种利用海洋交替单胞菌制备生物絮凝剂的方法。
技术介绍
生物絮凝剂是一类由微生物产生的具有絮凝活性的天然生物高分子聚合物，其主要成分包括多糖、蛋白、多肽、核酸以及脂类等(YimJH,KimSJ,AhnSH,etal.Characterizationofanovelbioflocculant,p-KG03,fromamarinedinoflagellate,GyrodiniumimpudicumKG03[J].BioresourceTechnology,2007,98(2):361-367.)。与传统化学絮凝剂相比，生物絮凝剂具有无毒、无二次污染、生物可降解等优点，因此可以被广泛应用于污水处理、发酵工艺、食品加工等领域(SalehizadehH,VossoughiM,AlemzadehI.Someinvestigationsonbioflocculantproducingbacteria[J].Biochemicalengineeringjournal,2000,5(1):39-44.)。自然界中，能够合成生物絮凝剂的微生物涵盖了藻类、细菌、放线菌和真菌(ZhaoG,MaF,WeiL,etal.Usingricestrawfermentationliquortoproducebioflocculantsduringananaerobicdryfermentationprocess[J].Bioresourcetechnology,2012,113:83-88.)。然而，目前阻碍生物絮凝剂发展的主要原因包括：产量低、絮凝活性不及化学絮凝剂、生产成本高(HeN,LiY,ChenJ.ProductionofanovelpolygalacturonicacidbioflocculantREA-11byCorynebacteriumglutamicum.[J].BioresourceTechnology,2004,94(1):99-105.)。因此，继续筛选高产生物絮凝剂的菌株、优化发酵工艺提升絮凝活性、降低生产成本是解决当前生物絮凝剂应用局限性的重要思路。海洋占地球表面积的71％，在辽阔的海洋中蕴藏着丰富的微生物资源。海洋微生物生活在海洋高盐、高压、低温、低营养或无光照等特殊环境之中，这就使海洋微生物能产生陆栖微生物所不能产生的结构新颖、作用独特的生物活性物质(王磊，宿红艳，杨润亚等.海洋交替单胞菌YTW-10抗植物病原真菌活性物质的发酵条件研究[J].鲁东大学学报，2011，35(7)：14-19)。Alteromonas属在海洋中分布广泛，最近的一项研究以Alteromonas属的菌株为实验菌株，发现单一菌株也可以对表层海水的碳循环做出与整个自然菌群相当的贡献，说明Alteromonas属的菌株在自然环境中扮演着重要的角色(PedlerBE,AluwihareLI,AzamF.Singlebacterialstraincapableofsignificantcontributiontocarboncyclinginthesurfaceocean[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,2014,111(20):7202-7207.)。作为多种环境中的优势菌株，Alteromonas属已经应用于不少领域。王磊等人的研究表明海洋交替单胞菌YTW-10能够对小麦赤霉病菌、西瓜枯萎病菌和玉米弯胞病菌有明显的抑制效果(王磊，宿红艳，杨润亚等.海洋交替单胞菌YTW-10抗植物病原真菌活性物质的发酵条件研究[J].鲁东大学学报，2011，35(7)：14-19)；鲜海军分离出的腐败交替单胞菌(Alteromonasputrefaciens)能够对对21种在印染工业中常用的分属偶氮染料类、三苯甲烷染料类和蒽醌类染料均具有较强的脱色能力(鲜海军.对两株具有多种染料脱色能力的腐败交替单胞菌(Alteromonasputrefaciens)的研究[J].应用与环境生物学报，2002，8(3)：294-297)；侯士昌等人筛选出的交替单胞菌属可以高效降解褐藻酸(侯士昌，温少红，唐志红等.一株高效褐藻酸降解菌的筛选、鉴定及其发酵条件的优化[J].研究报告，2014,38(7)：20-26)。目前，已有文献报道Alteromonas属的菌株可产多糖。ZilianZhang等人研究了D-氨基酸对AlteromonasmacleodiiStrainJL2069所产胞外多糖的影响(ZhangZ,LiZ,JiaoN.Effectsofd-AminoAcidsontheEPSProductionandCellAggregationofAlteromonasmacleodiiStrainJL2069[J].CurrentMicrobiology,2014,68(6):751-755.)；AnanyaMehta等人研究了Alteromonasmacleodii合成的多糖在纳米银生物质矿化方面的应用(MehtaA,SidhuC,PinnakaAK,etal.ExtracellularpolysaccharideproductionbyanovelosmotolerantmarinestrainofAlteromonasmacleodiianditsapplicationtowardsbiomineralizationofsilver[J].PloSone,2014,9(6):e98798.)；而LeT等人重点研究了Alteromonasmacleodii所产多糖的结构数据(LeT,CérantolaS,RopartzD,etal.Structuraldataonabacterialexopolysaccharideproducedbyadeep-seaAlteromonasmacleodiistrain.[J].CarbohydratePolymers,2012,90(1):49–59.)。然而，目前尚未有Alteromonas属的菌株与生物絮凝剂的合成相关的研究。目前，生物絮凝剂的研发和应用方兴未艾，其极有可能在未来取代或部分取代传统的无机高分子和合成有机高分子絮凝剂，以高效、绿色、环保的特性和优势在水处理等领域独当一面。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对目前生物絮凝剂生产所存在的原料成本高、絮凝剂产量低、絮凝效果差等问题，提供交替单胞菌(Alteromonassp.)H-6。本专利技术的另一目的在于提供利用海洋交替单胞菌制备生物絮凝剂的方法。所述交替单胞菌(Alteromonassp.)H-6，已于2015年03月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101，保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.10612。该菌的样品来源于南海SEATS站表层海水(北纬18°，东经116°)。以下给出交替单胞菌(Alteromonassp.)H-6的筛选及鉴定方法：初筛方法：取南海表层海水样品加入液体筛选培养基于30℃、150rpm条件下富集本文档来自技高网...

【技术保护点】
交替单胞菌(Alteromonas sp.)H‑6，已于2015年03月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号：CGMCC No.10612。

【技术特征摘要】
1.交替单胞菌(Alteromonassp.)H-6，已于2015年03月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号：CGMCCNo.10612。2.利用如权利要求1所述交替单胞菌制备生物絮凝剂的方法，其特征在于包括以下步骤：1)将甘油管中保藏的菌种接入种子培养基中培养，然后接入斜面培养基中继续培养；2)将新鲜斜面上的菌落接于种子培养基中培养，取种子液接入发酵培养基培养，得生物絮凝剂；3)将生物絮凝剂发酵液第一次离心，除去沉淀，收集上清液，在上清液中加入无水乙醇，于4℃冰箱静置过夜后进行第二次离心，除去上清液，将沉淀物溶于水中，用透析袋透析，向透析后的溶液中加入无水乙醇，静置后进行第三次离心，收集最终沉淀物，干燥后即得到生物絮凝剂纯品。3.如权利要求2所述方法，其特征在于在步骤1)和2)中，所述种子培养基的组成为：蛋白胨2～7g/L、酵母膏0.5～2g/L、柠檬酸铁0.05～0.2g/L，海盐20～40g/L，pH7.0～8.0。4.如权利要求2所述方法，其特征在于在步骤1)和2)中，所述种子培养基中培养的条件为20～35℃下150rpm培养12～24h。5.如权利要求2所述方法，其特征在于在步骤1)中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：何宁，刘昱，陈震，王远鹏，沈亮，张文，张堂铎，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35