本发明专利技术提供了一种从发酵液中使用大孔吸附树脂分离纯化2，4-二乙酰基间苯三酚(也称2，4-DAPG)的方法。本发明专利技术还提供了从发酵液中分离提取代谢产物2，4-DAPG的工艺流程。本发明专利技术整个操作流程中，能够较快的得到浓缩产物，而且大孔吸附树脂的可再生的特性使得树脂能够反复使用，节约成本。
【技术实现步骤摘要】
本申请涉及生物
，尤其是生物活性物质分离纯化领域。具体而言，本申请涉及发酵液中2，4- 二乙酰基间苯三酚的分离纯化方法。
技术介绍
2，4-DAPG作为一种广谱生物活性产物,对小麦全蚀病、番茄黑根病、小麦根腐病和甜菜猝倒病等植物病害有防治效果，是一种已被证实的对于农作物生长和生产有着重要作用的生物活性产物。目前对于2，4-DAPG的研究主要集中在实验室，还没有工业化生产的相关研究。主要研究集中证2，4-DAPG能够防治多种植物病害，通过分子生物学手段对2，4-DAPG的代谢途径进行了相关研究；而针对发酵液中的2，4-DAPG的分离研究主要是用HPLC的定性分离鉴定，缺乏2，4-DAPG工业化生产的分离、制备的技术和工艺，无法实现发酵产物规模化的分离纯化制备。通过分子生物学的改造手段，虽然可以提高发酵产生2，4-DAPG的产量，但是如果没有良好的制备工艺，仍然无法将此生物活性产物投入到规模化生产以及实际应用中去。因此，本领域中迫切需要开发从发酵产物中分离并且进行进一步纯化2，4-DAPG的方法，再将其投入实际应用，使生物活性产物2，4-DAPG在防治植物病害中发挥关键作用。
技术实现思路
本专利技术提供了一种从发酵液中分离纯化2，4-二乙酰基间苯三酚(也称2，4-DAPG)的方法。该方法具有工艺简单、品质稳定、产品收率高等优点。本专利技术的技术方案如下:(I)发酵液预处理:将含有2，4- 二乙酰基间苯三酚的发酵液，离心取上清液，备用；(2)上清液处理:将步骤(I)中处理后的上清液微孔滤膜过滤，再用超滤膜超滤，获得滤液，用稀HCl调节滤液pH至2-4 ；(3)大孔树脂吸附:将步骤⑵的滤液上大孔树脂柱至饱和，控制柱温和上样流速；(4)将步骤(3)中上样好的大孔树脂柱，用两倍柱床体积的纯水进行洗脱，控制柱温和流速；(5)大孔树脂解吸附:将步骤(4)中纯水洗脱过的树脂柱，用50% -70%乙醇水溶液3倍柱床体积进行洗脱，控制柱温和洗脱流速，收集洗脱液；(6)将步骤(5)中收集到的洗脱液，减压干燥，回收溶剂，获得粗结晶；(7)将步骤(6)中获得的粗结晶，用90%乙醇水溶液重结晶，获得高纯度的2，4-DAPG ；优选步骤(I)中离心采用连续流离心，4000-5000rmp转速；优选步骤(2)中所述的微孔滤膜孔径为0.22-0.6um，材质为聚四氟乙烯、聚醚砜或混合纤维素酯；所述的超滤膜的截留分子量为2000-5000，材质为聚醚砜、聚酰胺或聚碳酸酯；优选步骤(3)、(4)、(5)中的柱温为25-35 °C，流速为3_5BV/h ；优选步骤(3)、(4)、(5)中的大孔树脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、DlOl、DKl 10、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818中的一种或几种混合树脂，优先选用HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818 ；优选步骤(6)中减压干燥的温度在50_70°C ；优选步骤(6)中重结晶的温度在50_70°C。【附图说明】没有。【具体实施方式】以下结合实例来进一步解释本专利技术，但实施案例并不对本专利技术做任何形式的限定。实施例1(I)发酵液预处理:将含有2，4- 二乙酰基间苯三酚的发酵液，碟片式离心机连续流离心，离心转速为4000rmp，取上清液，备用；(2)上清液处理:将步骤(I)中处理后的上清液先经过0.22um聚醚砜材质的微孔滤膜过滤，再用截留分子量为2000的聚醚砜材质的超滤膜超滤，获得滤液，用5M HCl调节pH 至 2-4，；(3)大孔树脂吸附:将步骤(2)的滤液上大孔树脂柱至饱和，树脂装柱高度为150cm、直径20cm、柱温28 °C，上样流速为5BV/h ；(4)将步骤(3)中上样好的大孔树脂柱，用两倍柱床体积的纯水进行洗脱，柱温28°C，流速为 5BV/h ；(5)大孔树脂解吸附:将步骤⑷中纯水洗脱过的树脂柱，用65%乙醇水溶液3倍柱床体积进行洗脱，柱温28 °C，上样流速为5BV/h，收集洗脱液；(6)将步骤(5)中收集到的洗脱液，55 °C真空干燥，获得2，4-DAPG的粗结晶；(7)将步骤(6)中获得的粗结晶，用90%乙醇水溶液重结晶，获得高纯度的2，4-DAPG。实施例2(I)发酵液预处理:将含有2，4-二乙酰基间苯三酚的发酵液，碟片式离心机5000rmp连续流离心，取上清液，备用；(2)上清液处理:将步骤(I)中处理后的上清液先经过0.45um聚醚砜材质的微孔滤膜过滤，再用截留分子量为5000的聚醚砜材质的超滤膜超滤，获得滤液，用5M HCl调节pH 至 2 ;(3)大孔树脂吸附:将步骤(2)的滤液上大孔树脂柱至饱和，树脂装柱高度为200cm、直径20cm、柱温25 °C，上样流速为4BV/h ；(4)将步骤(3)中上样好的大孔树脂柱，用两倍柱床体积的纯水进行洗脱，柱温25°C，流速为 4BV/h ；(5)大孔树脂解吸附:将步骤⑷中纯水洗脱过的树脂柱，用60%乙醇水溶液3倍柱床体积进行洗脱，柱温25 °C，上样流速为4BV/h，收集洗脱液；(6)将步骤(5)中收集到的洗脱液，60°C真空干燥，获得2，4-DAPG粗结晶；(7)将步骤(6)中获得的粗结晶，用90%乙醇水溶液重结晶，获得高纯度的2，4-DAPG。【主权项】1.一种从发酵液中分离纯化2，4-二乙酰基间苯三酚(也称2，4-DAPG)的方法，其特征在于它，该方法包括以下步骤， (1)发酵液预处理:将含有2，4-二乙酰基间苯三酚的发酵液，离心取上清液，备用； (2)上清液处理:将步骤(I)中处理后的上清液微孔滤膜过滤，再用超滤膜超滤，获得滤液，用稀HCl调节滤液pH至2-4 ； (3)大孔树脂吸附:将步骤(2)的滤液上大孔树脂柱至饱和，控制柱温和上样流速； (4)将步骤(3)中上样好的大孔树脂柱，用两倍柱床体积的纯水进行洗脱，控制柱温和流速； (5)大孔树脂解吸附:将步骤(4)中纯水洗脱过的树脂柱，用50%-70%乙醇水溶液3倍柱床体积进行洗脱，控制柱温和洗脱流速，收集洗脱液； (6)将步骤(5)中收集到的洗脱液，减压干燥，回收溶剂，获得粗结晶； (7)将步骤(6)中获得的粗结晶，用90%乙醇水溶液重结晶，获得高纯度的2，4-DAPG。2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于:在步骤(I)中离心采用连续流离心，4000-5000rmp 转速。3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于:在步骤(2)中所述的微孔滤膜孔径为0.22-0.6um，材质为聚四氟乙烯、聚醚砜或混合纤维素酯；所述的超滤膜的截留分子量为2000-5000，材质为聚醚砜、聚酰胺或聚碳酸酯。4.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于:树脂柱的高径比为7-16，在步骤(3)、(4)、(5)中的柱温为25-35 °C，流速为3-6BV/h。5.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于:大孔树脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、D101、DK110、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818 中的一种或几种混合树脂，优先选用 HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818。6.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于:在步骤￠本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从发酵液中分离纯化2,4‑二乙酰基间苯三酚(也称2,4‑DAPG)的方法，其特征在于它，该方法包括以下步骤， (1)发酵液预处理：将含有2,4‑二乙酰基间苯三酚的发酵液，离心取上清液，备用； (2)上清液处理：将步骤(1)中处理后的上清液微孔滤膜过滤，再用超滤膜超滤，获得滤液，用稀HCl调节滤液pH至2‑4； (3)大孔树脂吸附：将步骤(2)的滤液上大孔树脂柱至饱和，控制柱温和上样流速； (4)将步骤(3)中上样好的大孔树脂柱，用两倍柱床体积的纯水进行洗脱，控制柱温和流速； (5)大孔树脂解吸附：将步骤(4)中纯水洗脱过的树脂柱，用50％‑70％乙醇水溶液3倍柱床体积进行洗脱，控制柱温和洗脱流速，收集洗脱液； (6)将步骤(5)中收集到的洗脱液，减压干燥，回收溶剂，获得粗结晶； (7)将步骤(6)中获得的粗结晶，用90％乙醇水溶液重结晶，获得高纯度的2,4‑DAPG。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郭少华，
申请(专利权)人：上海塞恩泰恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。