一种牛奶蛋白的检测方法技术

本发明专利技术属于畜产品检测领域，具体涉及一种牛奶蛋白的检测方法。建立对比值(沉淀质量：牛奶体积)法检测牛奶蛋白含量的方法，发现影响牛奶蛋白含量的测定方法包括牛奶的静置时间、离心时间、离心转速、冰乙酸浓度等因素，获得了沉淀牛奶蛋白的最佳参数，即静置9min、离心7min、离心12000r/min、冰乙酸浓度为0.3mol/L。对牛奶蛋白含量与比值的相关性数据进行偏最小二乘法分析，获得牛奶蛋白含量X与比值Y的回归线性方程：Y＝0.0645X+0.0581，R2＝9896，在2.0-4.0g/100mL范围内时，牛奶蛋白含量X与比值Y之间存在较强的线性相关。本发明专利技术可用于辅助测定鉴别牛奶中是否存在掺假铵盐。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于畜产品质量检测
，具体涉及。
技术介绍
蛋白质是牛奶的主要成分之一，也是牛奶检测中最重要的质量指标之一。目前，国 内外关于牛奶蛋白检测方法的报道很多，主要有凯氏定氮法、双缩脲法、Folin酚法、考马斯 亮蓝法、毛细管电泳法、ELISA法、高效液相色谱法、近红外光谱法等方法 。其中，凯氏 定氮法是国家标准和国际标准中首推的蛋白质检测方法，但是该方法操作复杂，耗时长，并 且需要浓酸浓碱，操作危险并且会产生有害气体。此外，凯氏定氮法无法区别无机氮和有机 氮，一些不法分子利用这一缺陷往牛奶中添加铵盐类。其他一些方法虽然在某些方面具有 明显优势，但也或多或少存在不足之处，如双缩脲法检测速度快，但是灵敏度较差；考马斯 亮蓝法用于不同样品时容易出现偏差；毛细管法蛋白质容易黏附在毛细管上；HPLC法、近 红外光谱法的仪器和耗材昂贵，并且需要专门的技术人员操作。 牛奶的蛋白质含量大约为3. 0%左右，其乳清蛋白的含量为14%~24%，酪蛋白 的含量为76%~86%，对同一品种奶牛来说，其组分含量变化相对较小。因此，牛奶当中酪 蛋白含量的多与少，也代表牛奶中蛋白含量的多与少。近年来，关于酪蛋白的研宄报道已经 很多，在science direct上有89896篇关于casein的文献，在知网上也有13590篇关于酪 蛋白的文献。这些文献主要涉及酪蛋白的分离、鉴定、组成、结构、功能、改性及检测等方面 的研宄，并且也有学者通过测定牛奶酪蛋白含量来鉴别牛奶掺假 。但是，还未见有通 过建立牛奶蛋白与酪蛋白沉淀质量之间相关关系的回归数学模型，然后利用回归数学模型 来测定牛奶蛋白含量以及鉴别掺假的文献报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术存在的缺陷与不足，提供一种基于酪蛋白特性的牛 奶蛋白的检测方法，本专利技术是根据酪蛋白沉淀质量与酪蛋白含量密切相关、酪蛋白含量又 与牛奶蛋白含量密切相关，那么酪蛋白沉淀质量与牛奶蛋白含量也应该密切相关这一原理 来测定牛奶蛋白。本专利技术优化了酪蛋白的沉淀条件，分析了牛奶蛋白与酪蛋白沉淀之间的 相关关系、建立牛奶蛋白与酪蛋白沉淀的比值之间的回归数学模型，利用获得的回归模型 计算牛奶蛋白含量等，本专利技术能准确检测牛奶蛋白含量，并能协助鉴别牛奶铵盐掺假，与传 统方法相比，本专利技术的方法简单、快捷、经济、实用。 本专利技术通过以下技术方案实现： 一种牛奶蛋白的快速检测方法，包括以下步骤： 1)建立牛奶蛋白与酪蛋白沉淀的比值之间的回归数学模型； 2)向待测牛奶样品加冰乙酸溶液； 3)震荡并静置一段时间； 4)离心分离、倒掉上清液、甩干离心管并用滤纸擦拭离心管口； 5)准确称重、并计算酪蛋白沉淀的比值； 6)根据步骤1)的回归模型，计算牛奶样品中蛋白含量； 上述步骤2)中，取样牛奶体积与加冰乙酸溶液体积比为2 :1，沉淀酪蛋白的冰乙 酸浓度为〇· 3mol/L〇 上述步骤3)中，加冰乙酸后，静置时间为9min。 上述步骤4)中，离心速度为12000r/min ;离心时间为7min。 上述步骤1)中，所述的牛奶蛋白与酪蛋白沉淀的比值的回归数学模型的建立方 法如下： ①以蒸馏水、纯牛奶、全脂奶粉为原料，分别配制蛋白含量为2. 0g/100mL、 2. 2g/100mL、2. 4g/100mL、2. 6g/100mL、2. 8g/100mL、3. 0g/100mL、3. 2g/100mL、3. 4g/100mL、 3. 6g/100mL、3. 8g/100mL、4. Og/lOOmL的液态奶样品，同时采用凯氏定氮法测定每个样品蛋 白的真实含量，每个处理重复3次； ②按照上述步骤2)_4)，测定上述样品的酪蛋白沉淀的比值； ③采用Origin 8. 0进行偏最小二乘法（PLS)数据分析，获得了牛奶蛋白与酪蛋白 沉淀的比值的回归数学模型，其公式如下： Y = 0. 0645X+0. 0581，R2= 9896， 式中： Y :为酪蛋白沉淀的比值，即：酪蛋白沉淀质量：牛奶体积比，以g/ml计；X :为牛奶 蛋白含量，以g/l〇〇mL计。 本专利技术与现有技术相比具有以下优点： 1、本专利技术检测效率高，从准备样品，到获得检测结果不超过30分钟，而传统测定 方法大都在4、5个小时以上。 2、本专利技术成本低。较传统的牛奶蛋白检测方法（凯氏定氮法、双缩脲法、近红外光 光谱法、ELISA法等）相比，本专利技术方法使用试剂很少，仅需要使用少许冰乙酸。而传统方 法不仅需要昂贵的仪器设备和标准试剂，而且需要使用许多其他分析试剂。 3、本专利技术操作简单，本专利技术简单易学，使用的仪器仅有电子天平和离心机。 4、本专利技术操作安全、无有毒有害物质排放，由于试验中仅使用低浓度的冰乙酸，未 使用强酸强碱物质或其他化学试剂，因此测定过程较为安全，并且无有毒有害物质排放。 5、本专利技术的检测方法精确度和准确度较高，并且还具有辅助鉴别铵盐掺假的能 力。【附图说明】 图1 :是本专利技术实施例中静置时间对比值（沉淀质量：牛奶体积）的影响。 图2 :是本专利技术实施例中离心速度对比值（沉淀质量：牛奶体积）的影响。 图3 :是本专利技术实施例中离心时间对比值（沉淀质量：牛奶体积）的影响。 图4 :是本专利技术实施例中浓度的酸对比值（沉淀质量：牛奶体积）的影响。 图5 :是本专利技术实施例中牛奶蛋白含量与比值（沉淀质量：牛奶体积）的相关性。【具体实施方式】 实施例1 1.材料与方法 L 1试验材料 从新疆阿拉尔市市场上，购买市售牛奶样品12个，其中9个样品为乳品企业加工 后的液态纯牛奶，2个样品为市售原料鲜奶，1个为乳品企业加工后的全脂奶粉。 分析纯试剂：冰乙酸、浓硫酸、氢氧化钠、硼酸、盐酸、硫酸铜、硫酸钾、柠檬酸二铵、 醋酸铵、尿素、过硫酸铵等。 L 2仪器设备 试验用的仪器设备如下：TGL-16C离心机（上海安亭科学仪器厂）JA5003N电子 天平：（上海箐海仪器有限公司）；KDY-9830凯氏定氮仪：（北京市通润源机电技术有限责 任公司）；UL20AL乳成份快速分析仪（杭州浙大优创科技有限公司）。 L 3试验方法 为了验证本专利技术方法的正确性和有效性，本专利技术进行了下述平行检测方法的比较 测试。 1. 3. 1牛奶蛋白质测定方法 采用凯氏定氮法：参考食品安全国家标准食品中蛋白质的测定（标准号 GB5009. 5-2010)(下载网址 http://www. glzy8. com/show/529610. html) 〇 取7ml牛奶至于消化管中，然后加 0. 2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml浓硫酸，再在微 波消解仪上消化，消解完成后，用蒸馏水定容至100mL ;移取IOml消化液至蒸馏管，加40% 氢氧化钠溶液3s，2%硼酸收集，蒸馏5min，然后以0. 05mol/L的盐酸标准溶液滴定，蛋白系 数F按6. 38计算。 乳成分快速检测仪测定：参考仪器的使用说明书操作。 1. 3. 2比值（沉淀质量：牛奶体积）的测定方法 取干燥的5ml离心管，准确称取离心管质量Iii1，加入3ml牛奶和I. 5ml -定浓度 (如后所示）的冰乙酸，震荡、静置一段（如后所示）时间，然后在一定条件下离心（如后所 示），倒掉上清液，擦拭管口水珠后，称取离心管质量m 2，然后计算比值。 1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种牛奶蛋白的检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：1)以均质后的液态奶或复原液态奶为待测牛奶样品；2)建立牛奶蛋白与酪蛋白沉淀的比值之间的回归数学模型；3)向待测牛奶样品中加冰乙酸溶液；4)震荡并静置；5)离心分离，倒掉上清液，甩干离心管并用滤纸擦拭离心管口；6)准确称重、并计算酪蛋白沉淀的比值；7)将步骤6)的酪蛋白沉淀的比值代入步骤2)所示的回归模型，计算牛奶样品中的蛋白含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蒲云峰，孟庆艳，穆晓建，薛艳鹏，吴建红，张雅茹，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65