一种茶树花中多糖含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种茶树花中多糖含量的检测方法，具体为：茶树花样品的预处理；茶树花中多糖提取与精制，得到精制的茶树花多糖制品；采用分光光度法测定精制的茶树花多糖制品中多糖含量，得到茶树花样品中多糖检测浓度和多糖含量；采用离子色谱法检测茶树花粗多糖水解液中茶树花粗多糖中多糖含量；根据利用分光光度法得到的茶树花粗多糖中多糖含量和利用离子色谱法测出的单糖组分含量，确定两者的换算因子；分光光度法所测的多糖检测浓度乘以换算因子得到最终茶树花多糖含量。本发明专利技术的方法可以获得准确的测定茶树花中的多糖含量，准确性与色谱法测定无显著差异，但是，本发明专利技术的方法简单，容易，成本低，而且容易推广。

【技术实现步骤摘要】
一种茶树花中多糖含量的检测方法
本专利技术属于检测
，具体涉及一种茶树花中多糖含量的检测方法。
技术介绍
茶树花含有丰富的内含物质，其主要化学成分与茶叶大体相同。但是其活性成分的比例却与茶叶相差甚远，其中茶树花含有总糖(≥35％)要高于茶叶，尤其是其中的多糖要高于茶叶，而咖啡因(≤1％)却低于茶叶。但是近年来关于茶树原料多糖的检测方法一直没有达到统一。茶树原料多糖大多沿用其他多糖的检测方法，有少量科学工作者在茶叶中多糖的检测方法研究上做了一定工作，如利用色谱方法(HPLC、GC)直接分析多糖中单糖组分，用间接方法(苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法)分析多糖含量；前者由于前处理工作过于复杂(如HPLC需要样品衍生化、GC需预先转化成易挥发性、热稳定的衍生物)，尤其是分析得到的仅是单糖组分或还原糖情况等，不利于被广泛应用。后者虽然比较简单，但是由于难于找到一种合适的对照品，加上准确度很难保证，无法成为茶树原料多糖的有效检测方法，尤其是对于茶树花中的多糖检测方法研究的没有大的突破。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种茶树花中多糖含量的检测方法，本专利技术基于茶源多糖检测的现有技术，比较离子色谱法和分光光度法对茶源多糖含量的分析，结果表明，无论采用哪种单糖(如阿拉伯糖、核糖、木糖、甘露糖、岩藻糖、葡萄糖、半乳糖)作为分光光度法检测的对照品，与离子色谱分析的结果都存在较大差异。本专利技术将两种检测技术结合，探索一种改良换算因子蒽酮-硫酸分光光度检测茶树花多糖的新方法，利用分光光度法检测的便捷、简单、设备成本低的优点，又避免离子色谱法检测的前期处理复杂、设备成本高、不利推广的缺点，该方法同样适用于茶树其他组织中多糖的分析，以及其他途径天然产物源中多糖含量检测分析。本专利技术所采用的技术方案是，一种茶树花中多糖含量的检测方法，具体按照以下步骤实施：步骤1、茶树花样品的预处理；步骤2、茶树花中多糖提取与精制，得到精制的茶树花多糖制品；步骤3、采用分光光度法测定精制的茶树花多糖制品中多糖含量，得到茶树花样品中多糖检测浓度c(mg/ml)和多糖含量c1(％)；步骤4、采用离子色谱法检测茶树花粗多糖水解液中茶树花粗多糖中多糖含量c2(％)；步骤5、根据利用分光光度法得到的茶树花粗多糖中多糖含量c1(％)和利用离子色谱法测出的茶树花粗多糖中多糖含量c2(％)，确定两者的换算因子f；步骤6、分光光度法所测的多糖检测浓度乘以换算因子f得到最终茶树花多糖含量(％)。本专利技术的特点还在于，步骤1中茶树花样品的预处理具体按照以下步骤实施：步骤1.1、将茶树花样品，置于80℃环境下的电热鼓风烘箱中，干燥3h后用高速粉碎机进行粉碎，过20目筛后，备用；步骤1.2、称取过20目筛后的干燥茶树花粉末，使用80％乙醇，90℃-100℃条件下水浴回流提取0.5h-1.5h，趁热抽滤，其中，干燥茶树花粉末与乙醇的质量体积比(g/ml)为1﹕30-1:50；滤渣中加入80％热乙醇，超声振荡1min，其中，滤渣与乙醇的质量体积比(g/ml)为1﹕30-1:50，抽滤，重复一次，滤渣45℃低温干燥备用。步骤2中茶树花中多糖提取与精制具体按照以下步骤实施：称取经80％乙醇预处理后干燥茶树花，加入蒸馏水，在60℃下，超声辅助提取30min，其中，经80％乙醇预处理后干燥茶树花与蒸馏水的质量体积比(g/ml)为1:40-1:60；将提取液用布氏漏斗减压抽滤后，滤液减压浓缩至100mL，用300mL95％乙醇沉淀，边加边搅拌，放于4℃低温条件下醇沉24h，10000r/min，冷冻离心，沉淀用无水乙醇洗涤3次，于冷冻干燥器中干燥至恒重，即得精制的茶树花多糖制品，称重，备用。步骤3中采用分光光度法测定茶树花粗多糖中多糖含量具体按照以下步骤实施：步骤3.1、配制蒽酮-硫酸溶液，称取0.20g蒽酮，加入100mL75％浓硫酸，溶解混匀，备用；步骤3.2、葡萄糖标准曲线制备，称取200mg烘至恒重的葡萄糖，蒸馏水定容至100mL为母液，吸取10mL母液定容至100mL为工作液，摇匀；准确吸取工作液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于10mL具塞试管，用水定容至1mL，再加入蒽酮-硫酸溶液4mL，摇匀，冰浴冷却后，沸水浴煮沸10min后，再冰浴冷却10min，在620nm波长下检测吸光度；葡萄糖标准样品浓度及对应吸光度绘制标准曲线的线性关系为y＝9.5686x-0.0058，相关性r＝0.9995，线性范围：0mg/mL～0.2mg/mL；步骤3.3、半乳糖标准曲线制备，称取200mg烘至恒重的半乳糖，蒸馏水定容至100mL为母液，吸取20mL母液定容至100mL为工作液，摇匀；按葡萄糖标准曲线制作法制做半乳糖标准曲线，半乳糖标准样品浓度及对应吸光度绘制标准曲线的线性关系为y＝5.0521x+0.0046，相关性r＝0.9981，线性范围：0mg/mL～0.2mg/mL，x为检测浓度(mg/mL)，y为吸光度A；步骤3.4、多糖含量测定，精密称取精制茶树花多糖0.0500g，用蒸馏水溶解，于50mL容量瓶中定容，按标准曲线制作方法，取1mL样液于10mL具塞试管中，加入蒽酮标准液4mL，摇匀，冰浴冷却后，沸水浴煮沸10min，再冰浴冷却10min，在620nm波长下检测吸光度，将其分别代入葡萄糖对照品标准曲线和半乳糖对照品标准曲线，分别计算出以葡萄糖和半乳糖为对照的茶树花多糖的检测浓度c(mg/ml)，并计算出精制茶树花多糖含量c1(％)。步骤4中采用离子色谱法检测茶树花粗多糖水解液中茶树花粗多糖中多糖含量具体按照以下步骤实施：步骤4.1、分别称取岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸11种对照品，将其配制成各个对照品浓度为10ug/mL的混合对照品，用离子色谱进行检测；步骤4.2、茶树花多糖水解：称取应步骤2处理得到的精制的茶树花多糖制品51.9mg，加入4mL，2mol/L的三氟乙酸进行溶解后充入氮气封口，120℃水解6h，水解结束后，离心，取上清液，在40℃下，用氮吹仪吹干，用甲醇溶解吹赶残留的三氟乙酸，重复3次，最后定容至50mL，过0.45um微孔膜，进行离子色谱分析；步骤4.3、离子色谱分析的条件为流速：1.0mL/min，进样量10uL，柱温30℃，安培积分检测，金电极，Dionex公司CarboPacPA10250mm×3mm，流动相：A：water；B：100mMNaOH；C：100mMNaOH/0.5MNaAc；梯度洗脱：0～20min：70％A，30％B；21～25min：90％B→80％B，10％C→20％C；25～35min：80％B→50％B，20％C→50％C；36～46min：70％A，30％B；根据茶树花多糖水解后单糖溶液离子色谱图的保留时间和峰面积，计算出上述11个单糖的总质量占精制的茶树花多糖制品的质量的百分比，即为茶树花多糖含量c2(％)。步骤5中根据利用分光光度法得到的茶树花粗多糖中多糖含量和利用离子色谱法测出的茶树花多糖含量，确定两者的换算因子f具体为：依次按照分光光度法和离子色谱法检测其多糖含量，得到换算因子其中c1是分光光度法检测精制茶多糖中多糖含量，c2离子色谱法检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茶树花中多糖含量的检测方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1、茶树花样品的预处理；步骤2、茶树花中多糖提取与精制，得到精制的茶树花多糖制品；步骤3、采用分光光度法测定精制的茶树花多糖制品中多糖含量，得到茶树花样品中多糖检测浓度c(mg/ml)和多糖含量c1(％)；步骤4、采用离子色谱法检测茶树花粗多糖水解液中茶树花粗多糖中多糖含量c2(％)；步骤5、根据利用分光光度法得到的茶树花粗多糖中多糖含量c1(％)和利用离子色谱法测出的茶树花粗多糖中多糖含量c2(％)，确定两者的换算因子f；步骤6、分光光度法检测精制茶多糖的检测浓度乘以换算因子f得到最终茶树花多糖含量(％)。

【技术特征摘要】
1.一种茶树花中多糖含量的检测方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：步骤1、茶树花样品的预处理；步骤2、茶树花中多糖提取与精制，得到精制茶树花多糖制品；步骤3、采用分光光度法测定精制茶树花多糖制品中多糖含量，得到茶树花样品中多糖检测浓度c(mg/ml)和多糖含量c1(％)；步骤4、采用离子色谱法检测精制茶树花多糖制品中多糖含量c2(％)；步骤5、根据利用分光光度法得到的精制茶树花多糖制品中多糖含量c1(％)和利用离子色谱法测出的精制茶树花多糖制品中多糖含量c2(％)，确定两者的换算因子f；步骤6、分光光度法检测精制茶树花多糖制品的检测浓度乘以换算因子f得到最终茶树花多糖含量(％)。2.根据权利要求1所述的茶树花中多糖含量的检测方法，其特征在于，所述步骤1中茶树花样品的预处理具体按照以下步骤实施：步骤1.1、将茶树花样品，置于80℃环境下的电热鼓风烘箱中，干燥3h后用高速粉碎机进行粉碎，过20目筛后，备用；步骤1.2、称取过20目筛后的干燥茶树花粉末，使用80％乙醇，90℃-100℃条件下水浴回流提取0.5h-1.5h，趁热抽滤，其中，干燥茶树花粉末与乙醇的质量体积比(g/ml)为1﹕30-1:50；滤渣中加入80％热乙醇，超声振荡1min，其中，滤渣与乙醇的质量体积比(g/ml)为1﹕30-1:50，抽滤，重复一次，滤渣45℃低温干燥备用。3.根据权利要求2所述的茶树花中多糖含量的检测方法，其特征在于，所述步骤2中茶树花中多糖提取与精制具体按照以下步骤实施：称取经80％乙醇预处理后干燥茶树花，加入蒸馏水，在60℃下，超声辅助提取30min，其中，经80％乙醇预处理后干燥茶树花与蒸馏水的质量体积比(g/ml)为1:40-1:60；将提取液用布氏漏斗减压抽滤后，滤液减压浓缩至100mL，用300mL95％乙醇沉淀，边加边搅拌，放于4℃低温条件下醇沉24h，10000r/min，冷冻离心，沉淀用无水乙醇洗涤3次，于冷冻干燥器中干燥至恒重，即得精制茶树花多糖制品，称重，备用。4.根据权利要求3所述的茶树花中多糖含量的检测方法，其特征在于，所述步骤3中采用分光光度法测定精制茶树花多糖制品中多糖含量具体按照以下步骤实施：步骤3.1、配制蒽酮-硫酸溶液，称取0.20g蒽酮，加入100mL75％浓硫酸，溶解混匀，备用；步骤3.2、葡萄糖标准曲线制备，称取200mg烘至恒重的葡萄糖，蒸馏水定容至100mL为母液，吸取10mL母液定容至100mL为工作液，摇匀；准确吸取工作液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于10mL具塞试管，用水定容至1mL，再加入蒽酮-硫酸溶液4mL，摇匀，冰浴冷却后，沸水浴煮沸10min后，再冰浴冷却10min，在620nm波长下检测吸光度；葡萄糖标准样品浓度及对应吸光度绘制标准曲线的线性关系为y＝9.5686x-0.0058，相关性r＝0.9995，线性范围：0mg/mL～0.2mg/mL；步骤3.3、半乳糖标准曲线制备，称取200mg烘至恒重的半乳糖，蒸馏水定容至100mL为母液，吸取20mL母液定容至100mL为工作液，摇匀；按葡萄糖标准曲线制作法制做半乳糖标准曲线，半乳糖标...

【专利技术属性】
技术研发人员：张星海，许金伟，虞培力，周晓红，
申请(专利权)人：浙江经贸职业技术学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33