一种分心木酸性多糖及其制备和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种分心木酸性多糖及其制备和应用。所述的分心木酸性多糖，由重量百分含量为99％以上的多糖组成；所述的多糖的组成为半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其中，半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖的物质的量之比为66.30-72.50:13.50-18.60:6.20-11.40:2.80-4.40。所述的分心木酸性多糖的制备方法，包括：水提醇沉提取分心木粉末粗多糖，经酶-Sevage结合法去蛋白、透析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析纯化，真空冷冻干燥分离纯化组分即为分心木酸性多糖。本发明专利技术对纯化后多糖进行组分分析、结构鉴定及免疫功能研究，发现本发明专利技术分心木酸性多糖有较强的抗氧化活性，可以作为抗氧化剂或者用于制备抗氧化剂，可广泛用于化妆品、食品保健品、动物饲料添加剂、医药等方面。

【技术实现步骤摘要】
一种分心木酸性多糖及其制备和应用
本专利技术涉及天然植物多糖领域，具体涉及一种分心木酸性多糖及其制备和应用，属于高分子和分子生物学领域。
技术介绍
分心木来源于胡桃科植物胡桃(JuglansregiaL.)果核的干燥木质隔膜，又称胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔等，味苦、涩，性平，入脾、肾经，固肾涩精，临床主治遗精、淋病、血尿、带下、泻痢等。近年来，人们从分心木中分离得到黄酮类、多糖类、皂苷类、醌类、酚酸类等多种化合物，并对其中的黄酮、鞣质及糖类等成分进行了含量测定。药理活性研究表明分心木除具有抑菌、抗氧化等作用外，对治疗肾虚遗精、滑精遗尿等症具有显著效果。近年来，有不少报道关于分心木用药的文献。中国专利技术专利ZL200310119376.6公开了一种补肾生精益元的药物及其制备方法，该药物中含有炒焦分心木的重量比为30份。中国专利技术专利ZL201210389282.X公开了一种治疗儿童感冒的中药，含有分心木1-3份。中国专利技术专利ZL201310307132.4公开了一种治疗神经性呕吐的中药，其中分心木的重量份数为3-9份。中国专利技术专利ZL201210053971.3公开了一种治疗骨肿瘤的中药制剂，分心木的重量份数为7-9份。中国专利技术专利ZL201310046000.0公开了一种疏导和强化人体气机的保健食品，选用重量比为15-20的分心木，再与桑寄生、乌梅一起炮制，加入普洱茶、茉莉花、浮小麦混合粉碎制成粉剂、片剂或胶囊。王艳等报道了维吾尔药核桃分心木不同提取物对肾阳虚模型小鼠的实验研究，指出分心木水提物对肾阳虚小鼠有不同程度的减轻。多糖作为一种生物免疫应答剂，具有抗肿瘤、降血脂、抗氧化等生物活性(谢明勇，聂少平，天然产物活性多糖结构与功能研究进展，中国食品学报，2010,10(2)：1-11)。然而到目前为止，鲜有深入研究分心木多糖的制备及其应用。高莉等从新疆核桃隔膜中提取分离得到的多糖PDJL-A3具有一定的清除超氧和羟基自由基能力，但活性不明显(高莉，新疆核桃隔膜多糖提取、分离纯化及抗氧化活性的研究，新疆大学硕士学位论文，2010)。上述报道大多是关于分心木水提物的制备方法及生物活性研究，大多停留在水提物水平重复和小规模试验阶段，创新性技术很少，未能真正使分心木多糖在工业化生产中得以大规模的应用，且未见分心木多糖类产品。更未涉及分心木多糖的高级结构分析，比如对其单糖组成、糖苷键连接方式等未见报道；而且越来越多的研究表明多糖重要功能的发挥是由其结构特征决定的，其高级结构(二级及三级结构)更为密切，多糖的生物活性与其分子量、分子链构象(Conformation)紧密相关，了解该糖分子的构象更有助于阐明其生物活性作用机制。所以发现新的多糖组分及活性，对研究开发新功能保健品具有非常重要的科学意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种分心木酸性多糖，该多糖具有生物活性，能作为(如针剂等)药用及保健品原料。本专利技术的另一目的是提供所述分心木酸性多糖的制备方法，该方法不影响分心木多糖天然结构及分离效果，具有操作简单、易于控制的优点。本专利技术还提供了所述分心木酸性多糖的应用，其具有较强的氧自由基清除作用，可以作为抗氧化剂使用或者用于制备抗氧化剂。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种分心木酸性多糖，由重量百分含量为99％以上的多糖组成；所述的多糖的组成为半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其中，半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖的物质的量之比为66.30-72.50:13.50-18.60:6.20-11.40:2.80-4.40。所述的葡萄糖为β-葡萄糖，优选为β-D-葡萄糖；所述的半乳糖为α-半乳糖，优选为α-D-半乳糖；所述的半乳糖醛酸为α-半乳糖醛酸，优选为α-D-半乳糖醛酸；所述的阿拉伯糖为α-阿拉伯糖，优选为α-L-阿拉伯糖。所述的分心木酸性多糖是以半乳糖醛酸和葡萄糖为主链，并含有少量分支的多糖。所述的分心木酸性多糖的结构单元中优选主链结构为(1→4)连接的α-D-半乳糖醛酸(α-D-GalpA)残基和(1→2)连接的β-D-葡萄糖(β-D-Glcp)残基，支链为(1→4)连接的α-D-半乳糖(α-D-Galp)残基和端基α-L-阿拉伯糖(α-L-Araf)，支链连接在β-D-葡萄糖残基的O-4位。所述的分心木酸性多糖的侧链有多种不同的变化组合，如可具有如式Ⅰ所示的结构单元：式Ⅰ式Ⅰ中，GalpA为吡喃型聚半乳糖醛酸，Araf为呋喃型聚阿拉伯糖，Galp为吡喃型聚半乳糖，Glcp为吡喃型聚葡萄糖。所述的分心木酸性多糖的重均分子量为2.5KDa-4.5KDa，进一步优选为2.8KDa-4.2KDa，最优选为3.2KDa-3.6KDa，KDa为千道尔顿。所述的分心木酸性多糖优选为云南产分心木酸性多糖。所述的分心木酸性多糖由分心木粉碎、提取分离得到。具体技术方案如下：一种分心木酸性多糖的制备方法，包括步骤：(1)水提：将分心木粉碎得到分心木粉末，每克分心木粉末加入20mL-40mL水，90℃-100℃浸提2小时-4小时后离心，取上清液；离心所得沉淀可按所述水提方法重复1-2次，合并上清液得到分心木多糖水提液；(2)醇沉：向步骤(1)中的分心木多糖水提液中加入乙醇水溶液，搅拌混匀，于2℃-5℃沉淀过夜，离心，取离心所得沉淀得到一次分心木粗多糖；(3)去蛋白：将步骤(2)所得的一次分心木粗多糖的水溶液用蛋白酶酶解，灭酶并离心除去变性蛋白和酶，离心所得上清液再用有机溶剂离心除去下层有机相和中间的蛋白层，重复用有机溶剂离心的步骤直至无白色沉淀产生，得到提取液；(4)透析：将步骤(3)所得的提取液用孔径为800Da-1500Da的透析袋在自来水中透析40h-50h，再用去离子水透析40h-50h，收集透析后的提取液，真空冷冻干燥得二次分心木粗多糖；(5)纯化：将步骤(4)得到的二次分心木粗多糖用去离子水溶解得到二次分心木粗多糖水溶液，经二乙氨基乙基纤维素-52(DEAE纤维素-52)离子交换层析柱层析，收集的洗脱液用苯酚-硫酸法检测多糖，收集第一洗脱峰的洗脱液经凝胶过滤层析，凝胶过滤层析所收集的洗脱液用苯酚-硫酸法检测多糖峰，收集含多糖的洗脱液，经浓缩、透析和冻干得到白色疏松絮状分心木酸性多糖，命名为SJP1。所述的分心木采用市售产品，可选用云南产分心木。为了达到更好的专利技术效果，优选：步骤(1)中，离心的速度选为3000转/分钟-4000转/分钟(rpm)，时间选为15min-30min。优选每克分心木粉末加入30mL蒸馏水，95℃浸提3小时，离心的速度为3000rpm，离心的时间为15min。步骤(2)中，向步骤(1)中的分心木多糖水提液中加入占分心木多糖水提液体积4倍-5倍量的乙醇水溶液。优选向步骤(1)中的分心木多糖水提液中加入4倍分心木多糖水提液体积的乙醇水溶液，搅拌混匀，于4℃沉淀过夜，再于3000rpm-4000rpm离心15min-30min，取离心所得沉淀得到一次分心木粗多糖。所述的乙醇水溶液的体积百分浓度优选为90％-96％，进一步优选为95％。步骤(3)中，所述的蛋白酶选用木瓜蛋白酶。所述的蛋白酶的重量为一次分心木粗多糖重量的1％-2％。所述的用蛋白酶酶解的条件优选为：40℃-55℃水浴2h-2.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分心木酸性多糖，其特征在于，由重量百分含量为99％以上的多糖组成；所述的多糖的组成为半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其中，半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖的物质的量之比为66.30‑72.50:13.50‑18.60:6.20‑11.40:2.80‑4.40。

【技术特征摘要】
1.一种分心木酸性多糖，其特征在于，由重量百分含量为99％以上的多糖组成；所述的多糖的组成为半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，其中，半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖的物质的量之比为66.30-72.50:13.50-18.60:6.20-11.40:2.80-4.40；所述的葡萄糖为β-D-葡萄糖；所述的半乳糖为α-D-半乳糖；所述的半乳糖醛酸为α-D-半乳糖醛酸；所述的阿拉伯糖为α-L-阿拉伯糖；所述的分心木酸性多糖的结构单元中主链结构为(1→4)连接的α-D-半乳糖醛酸残基和(1→2)连接的β-D-葡萄糖残基，支链为(1→4)连接的α-D-半乳糖残基和端基α-L-阿拉伯糖，支链连接在β-D-葡萄糖残基的O-4位；所述的分心木酸性多糖的重均分子量为2.5KDa-4.5KDa。2.根据权利要求1所述的分心木酸性多糖，其特征在于，所述的分心木酸性多糖的重均分子量为2.8KDa-4.2KDa。3.根据权利要求1-2任一项所述的分心木酸性多糖的制备方法，其特征在于，包括步骤：(1)水提：将分心木粉碎得到分心木粉末，每克分心木粉末加入20mL-40mL水，90℃-100℃浸提2小时-4小时后离心，取上清液；离心所得沉淀按所述水提方法重复1-2次，合并上清液得到分心木多糖水提液；(2)醇沉：向步骤(1)中的分心木多糖水提液中加入乙醇水溶液，搅拌混匀，于...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺亮，李杰君，李文魁，李晓君，
申请(专利权)人：凤庆县裕泽谷核桃专业合作社，
类型：发明
国别省市：云南;53