中华鳖Cathelicidin—Ps‑CATH4肽在制备抗炎症药物中的应用，属于生物医学技术领域。Ps‑CATH4是直链多肽，含有32个氨基酸残基。RT‑PCR显示该肽对细菌脂多糖诱导的关键致炎因子及诱导型NO合酶基因的表达均具有抑制作用。蛋白水平上，该肽对LPS诱导的致炎因子和NO释放具有负调控作用，而对抑炎因子的表达有升高作用，主要通过抑制TLR4受体的激活与下游MAPK信号通路来抑制炎症因子的释放。该肽结构简单，不含二硫键及环状结构，方便化学合成及基因工程制备，初级成药性评价显示它的细胞毒性和溶血活性低，对盐、血清、温度、时间的稳定性好，应用于制备抗炎症药物。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】中华鳖Cathe Iicidi η — Ps-CATH4肽在制备抗炎症药物中的应用
本专利技术提供一种来源于中华警XPelodiscussinensis)的 cathelicidin—PS-CATH4及其编码基因，氨基酸序列和在制备抗炎症药物中的应用，属于生物医学
技术介绍
Cathelicidin是一类由N端信号肽区域、中间保守cathelin结构域和C端高度特异的成熟肽区域构成的具有多功能的免疫调节肽家族，在几乎所有种类的动物体内(哺乳类、鸟类、两栖类和鱼类)都有发现，与防御素(defensin) —样，Cathelicidin是包括人类在内的大多数脊椎动物所特有的宿主防御肽，构成了脊椎动物自然免疫反应的关键组分，是连接自然免疫和特异性免疫的桥梁，在动物先天免疫系统中发挥极其重要的作用。Cathelicidin除了具有广谱的抗菌活性以外，还具有许多其他生物学活性，如对多种免疫细胞(中性粒细胞、单核细胞、肥大细胞和T细胞)具有趋化作用、诱导肥大细胞脱粒和组织胺释放、调节巨噬细胞转录、促进伤口愈合、诱导血管发生、诱导变异细胞系细胞凋亡和淋巴细胞活化等。由于cathelicidin具有如此众多的生物学功能，且对高等动物正常细胞几乎没有毒害能力，因此cathelicidin —直是我们研宄的热点。Cathelicidin在生物制药领域具有很广阔的应用前景。Cathelicidin可以对宿主的天然免疫系统进行调节，主要是通过对一些炎症因子和趋化因子以及免疫细胞进行调节，在不引起耐药性的情况下，发挥在消炎、抗感染的作用。此外，cathelicidin与某些疾病的发病密切相关。最近研宄表明，人源cathelicidin，LL-37在人类自身免疫性皮肤病-牛皮癣的发病过程中发挥了重要的作用。LL-37能够与人自身DNA结合形成DNA-LL-37复合物，该复合物不会被正常人的免疫系统所识别，但是却能够被牛皮癣患者免疫系统识别并诱导浆细胞样树突状细胞产生大量IFN-α，而IFN-a的产生加重了牛皮癣的症状。除此之外，类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮患者体内也检测到LL-37表达量异常升高，提示LL-37与这些疾病的发生也存在某种关系。随着cathelicidin与疾病发病机制相互关系的研宄的深入，我们将对许多疾病有全新的认识，从而为疾病的治疗提供全新的思路和方法。目前cathelicidin家族小肽在医学上的应用取得了一些令人满意的成果，已经有一些相关药物进入临床研宄。例如，MX-226 (CP1-226)是一个从牛体内克隆得到的cathelicidin一indolicidin的衍生物，已完成IIIb期临床试验，可用于局部阻止或降低中心静脉导管相关的血液感染，显示了良好的应用前景。来源与猪的Iseganan (IB-367)，是猪cathelicidin—protegrin-Ι的改造体，由17个氨基酸残基组成，分子内含有2对二硫键。化疗患者口腔黏膜炎，已进入临床III期。此外，一些用于伤口愈合，抑制内毒素感染，抑制肿瘤等的抗菌肽也进入临床试验阶段。中华瞥?'/7??/75.Υ5.)，又名水鱼、甲鱼、团鱼，是常见的养殖龟种。野生中华鳖在中国、日本、越南北部、韩国、俄罗斯东部都可见。水栖性，常栖息于沙泥底质的淡水水域。有上岸进行日光浴的习性。肉食性，以鱼、虾、软体动物等为主食，多夜间觅食。中华鳖属于龟鳖目鳖科鳖亚科中华鳖属，目前关于中华鳖cathelicidin宿主防御肽的研宄和应用还没有报道。
技术实现思路
本专利技术提供具有一种具有很好的免疫调节活性，可以降低感染时的炎症发生和引起的组织损伤的，来源于中华鳖的Cathelicidin —PS-CATH4小肽及其基因、氨基酸序列和应用。为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供了如下技术方案:Ps-CATH4是中华鳖Cathelicidin基因编码的一种直链多肽，含有32个氨基酸残基，分子量是3913.68Da，理论等电点(Pl)为12.9，一种碱性多肽。中华鳖抗菌肽PS-CATH4基因的克隆包括: 中华鳖肝脏总RNA提取，mRNA纯化，mRNA反转录及cDNA文库构建，设计引物，利用PCR方法筛选中华鳖抗菌肽PS-CATH4基因。获得阳性单克隆进行基因核苷酸序列测定。基因测序结果表明编码中华鳖抗菌肽PS-CATH4前体cathelicidin的基因由483个核苷酸组成，自5’端至3’端序列为:I atggagacct gcctgaaaat cctgctgctc gtcggggtgg tcacagcagc ccccacgtca61 cccgcatctt ctctgccatc ccacgaggat gcgattttag cagcagtaca ggtgtacaac121 caagagccag gcgtaacgct ggcctaccgg ctcctggaag cggagcctca gccagactgg181 gacgtgactt cgaaaactgt ccagccgctg aaatttacta ttaaagagac agtgtgcctg241 atctcggaga aacgcgacat caaccaatgc gatttcaaag aagacgggct gatcaaagac301 tgctctggat tcttctccac tgaacaggac cccccctctg ccatgatcaa atgcgaggat361 gcgtctgagg agcctgatat cgtcacccgg ggccgctggg ggagattcaa gaggagagcg421 ggtaggttta ttcgcagaaa tcgctggcaa atcatttcga ctggtctcaa gctgattggc481 tag 编码中华鳖cathelicidin成熟肽Ps_CATH4为第385到480位核苷酸，其编码氨基酸序列为:苏氨酸L精氨酸2_甘氨酸3_精氨酸4_色氨酸5_甘氨酸6_精氨酸7-苯丙氨酸8_赖氨酸9-精氨酸1(1_精氨酸H-丙氨酸12_甘氨酸13_精氨酸14_苯丙氨酸15_异亮氨酸16_精氨酸&精氨酸18_天冬酰胺19_精氨酸2°_色氨酸21_谷酰胺22_异亮氨酸23_异亮氨酸24_丝氨酸25_苏氨酸26_甘氨酸27-亮氨酸28_赖氨酸29_亮氨酸3°_异亮氨酸31_甘氨酸32。所述PS-CATH4肽应用于制备抗炎症的治疗药物。中华鳖抗菌肽PS-CATH4基因作为基因工程制备中华鳖抗菌肽Ps_CATH4的应用。本专利技术的有益效果在于:基因克隆得到编码中华鳖cathelicidin——Ps_CATH4的基因，通过化学合成方法得到成熟肽Ps-CATH4。RT-PCR显示Ps_CATH4对细菌脂多糖(LPS)诱导的关键致炎因子及诱导型NO合酶基因的表达均具有明显的抑制作用。蛋白水平上，PS-CATH4对LPS诱导的致炎因子和NO释放也具有显著的负调控作用，而对抑炎因子的表达却有升高作用，并且它主要通过抑制TLR4受体的激活与下游MAPK信号通路来抑制炎症因子的释放。另外，PS-CATH4结构简单，不含有二硫键及环状结构，方便化学合成及基因工程制备，初级成药性评价显示PS本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种中华鳖（Pelodiscus sinensis）的cathelicidin家族的Ps‑CATH4肽的应用，Ps‑CATH4肽是直链多肽，含有32个氨基酸残基，理论等电点（pI）为12.9，分子量是3913.68Da，其序列为：苏‑精‑甘‑精‑色‑甘‑精‑苯丙‑赖‑精‑精‑丙‑甘‑精‑苯丙‑异亮‑精‑精‑天冬酰胺‑精‑色‑谷氨酰胺‑异亮‑异亮‑丝‑苏‑甘‑亮‑赖‑亮‑异亮‑甘；其特征在于：所述Ps‑CATH4肽应用于制备抗炎症的药物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：于海宁，王义鹏，乔雪，鲁一灵，王晨，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21
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