本发明专利技术属于生物技术领域，涉及疾病的治疗，具体涉及一种sDR5-Fc融合蛋白及其用途，该sDR5-Fc融合蛋白包括：sDR5功能性序列的部分和免疫球蛋白Fc区，所述sDR5功能性序列的部分和免疫球蛋白Fc区之间直接连接和/或通过连接片段连接。本发明专利技术采用天然性蛋白DR5与抗体Fc段融合，在具有功能性蛋白的生物学活性的基础上延长了体内半衰期，无需频繁给药，降低了病人的痛苦和治疗成本。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】sDR5-Fc融合蛋白及其用途
本专利技术属于生物
，涉及疾病的治疗，具体涉及一种SDR5-FC融合蛋白及 其用途。 【
技术介绍
】 肝炎是严重危害人民生命健康且死亡率较高的一种疾病，病因主要包括病毒感 染、过度酒精摄入和服入化学毒物等造成肝脏实质细胞的破坏，其致病机制复杂，其致病因 素包括病毒、细菌、寄生虫、化学毒物、药物和毒物、酒精等。肝炎通常可以分为多种不同的 类型：根据病因来分，可以分为病毒性肝炎、药物性肝炎、酒精性肝炎、中毒性肝炎等；根据 病程长短来分，可以分为急性肝炎、慢性肝炎等；根据病情轻重程度，慢性肝炎又可以分为 轻度、中度、重度等。 临床上对肝炎的诊断，通常是结合了上述多种方法分类的，早期肝炎一般用五味 子的养肝片可以恢复缓解。但这仅仅适用于肝炎发病初期，且炎症较轻没有组织坏死的情 况，且作用非常有限，疗效极慢，不显著。近年来诊断肝炎的诊治有一些小分子化学药物涌 现，如阿德福韦酯胶囊，但该类小分子药物对肝炎的作用仅仅是暂时缓解，治标不治本，且 毒副作用较大。已知肿瘤坏死因子（TNF)家族配体是最多效的细胞因子之一，它们诱导许多细胞 应答，包括细胞毒性、抗病毒活性、免疫调节活性和对几种基因的转录调节。对TNF家族的 配体的细胞应答不仅包括正常生理应答，还包括与细胞凋亡增加或细胞凋亡抑制相关联的 疾病。细胞凋亡一程序化细胞凋亡是一种参与清除免疫系统外周T淋巴细胞的生理机制， 其调节障碍导致许多不要的发病过程。与细胞存活增加或细胞凋亡抑制相关的疾病包括癌 症、自身免疫失调、病毒感染、炎症、移植体对抗宿主疾病、急性移植体排斥和慢性移植体排 斥。与细胞凋亡增加相关的疾病包括AIDS、神经性性疾病、骨髓发育不良综合症、局部缺血 性损伤、毒素诱导的肝脏疾病、败血症性休克、恶病质和厌食。 因此，TNF家族的配体在治疗和预防肝炎中具有潜在应用价值。死亡受体5(death receptor5,DR5)是目前所发现的结构和功能比较清楚的死亡受体之一，属于TNFR(tumor necrosisfactorreceptor)超家族。DR5 是与DR4(deathreceptor4)具有高度同源性 的分子，属于I型膜蛋白，在正常组织细胞表面中广泛低量表达，在炎症、缺血或癌变的组 织细胞内高表达。DR5基因的编码框全长约1. 4kb，编码411个氨基酸，由4个部分组成： 1-55氨基酸是信号肽，84-179氨基酸残基为含有2个富含半胱氨酸的重复功能区的胞外 区，184-206氨基酸为跨膜区，胞内区含有67个氨基酸的死亡结构域。DR5的mRNA有两种 不同序列长度的亚型，长和短两种mRNA仅有87bp的差别。研究发现两种mRNA普遍存在于 各种组织细胞中，长的片段表达占多数，而两个片段的比例变化取决于组织类型。DR5能特 异性结合肿瘤坏死因子相关诱导配体从而诱导细胞凋亡。研究表明，在人体细胞最适培养 温度37°C时，DR5相对于DR4、DcRl、DcR2等TRAIL的其他受体以最强的亲和力与TRAIL结 合，在细胞凋亡中发挥重要的作用。目前，关于DR5介导的细胞凋亡信号通路已经研究比较 清楚。DR5与配体相结合后引起DR5寡聚化而被激活，被激活的死亡受体募集FADD分子。FADD通过DED募集Caspase-8的前体（Pr〇-caspase_8)，形成一个死亡信号复合体DISC (death-inducingsignalingcomplex)〇Pr〇-caspase-8|j^^]^^j^Caspase-8,Caspase-8 通过非线粒体依赖途径和线粒体依赖途径引发细胞凋亡。 因此，如何将DR5应用于肝炎治疗成为亟待解决的问题。现有技术中，重组蛋白 DR5在体内半衰期短，往往还未达到最佳治疗浓度和效果已被清除，必须频繁给药，增加了 病人的痛苦和治疗成本。 【
技术实现思路
】 本专利技术的目的在于克服上述不足之处，提供一种sDR5-Fc融合蛋白，解决现有技 术中DR5蛋白体内半衰期短、需频繁给药的技术问题。 本专利技术为解决上述技术问题所采用的方案如下： 一种SDR5-FC融合蛋白，包括：sDR5功能性序列的部分和免疫球蛋白Fc区，所述 sDR5功能性序列的部分和免疫球蛋白Fc区之间直接连接和/或通过连接片段连接。 优选地，所述SDR5功能性序列具有：SEQIDN0 :1的氨基酸序列，或者与SEQIDN0 :1的氨基酸序列有至少80%同一 性的氨基酸序列；或者 SEQIDN0 :2的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或者与SEQIDN0 :2的核苷酸 序列有至少80%同一性的核苷酸序列所编码的氨基酸序列。 优选地，所述免疫球蛋白Fc区是人IgG的Fc区。 优选地，所述免疫球蛋白Fc区是人IgGl的Fc区。 优选地，所述免疫球蛋白Fc区为：SEQIDN0 :3的氨基酸序列，或者与SEQIDN0 :3的氨基酸序列有至少80%同一 性的氨基酸序列；或者SEQIDN0 :4的核苷酸序列所编码的氨基酸序列，或者与SEQIDN0 :4的核苷酸 序列有至少80%同一性的核苷酸序列所编码的氨基酸序列。 优选地，所述融合蛋白为：SEQIDN0 :5的氨基酸序列；或者 SEQIDN0 :6的核苷酸序列所编码的氨基酸序列。 本专利技术还提供了一种编码SDR5-FC融合蛋白的重组载体，为以真核表达载体 pcDNA3.1 ( + )为载体，融合了sDR5-FcDNA片段，所述sDR5-FcDNA片段用NheI和KpnI 双酶切后插入真核表达载体pcDNA3. 1 ( + )的NheI/KpnI之间，所述sDR5-FcDNA片段的 核苷酸序列为SEQIDN0 :6所示。 优选地，所述重组载体具有SEQIDN0 :7的核苷酸序列。 本专利技术还提供了用上述重组载体转染的细胞，其中，所述细胞为293T细胞或CH0 细胞。 本专利技术另外提供了一种制备sDR5-Fc融合蛋白的方法，通过在原核细胞或真核细 胞中表达权利要求1至6中任一项所述的融合蛋白来进行。 本专利技术还提供了一种药物组合物，包括上述的融合蛋白、核苷酸序列为SEQID NO:6所示的核酸分子、上述的重组载体或上述的细胞，以及可药用载体。 本专利技术还提供了上述的融合蛋白、上述的重组载体、上述的细胞或上述的药物组 合物在制备用于治疗或预防肝炎的药物中的用途。 与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于，本专利技术采用天然性蛋白DR5与抗体Fc 段融合，在具有功能性蛋白的生物学活性的基础上延长了体内半衰期，无需频繁给药，降低 了病人的痛苦和治疗成本。 【【附图说明】】 图1是本专利技术实施例1的RT-PCR结果电泳图； 图2是本专利技术实施例2的重组载体pcDNA3.l-sDR5_Fc的结构图； 图3是本专利技术实施例2的重组载体转染细胞后的westernblotting结果图； 图4是本专利技术实施例2的重组蛋白的测序结果图。 【【具体实施方式】】 为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图和具体实施 例对本专利技术作进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术， 并不用于限定本专利技术。 除非另有定义，本专利技术使用的所有科技术语具有本领域普通技术人员所理解的相 同含义。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种sDR5‑Fc融合蛋白，其特征在于，包括：sDR5功能性序列的部分和免疫球蛋白Fc区，所述sDR5功能性序列的部分和免疫球蛋白Fc区之间直接连接和/或通过连接片段连接。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，田永帅，赵琦，王蒲，阮庆国，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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