鉴定或评估有益活性物质的方法以及包含其的组合物技术

本发明专利技术公开了一种鉴定或评估改善皮肤细胞的代谢的护肤活性物质的方法。所述方法包括使细胞与紧张性刺激和受试试剂接触，并基于与糖酵解和/或氧化磷酸化相关联的代谢指标的变化，测定所述细胞对所述紧张性刺激和受试试剂的响应。当氧化磷酸化和/或糖酵解响应对应于细胞代谢的改善时，所述受试试剂可被鉴定为护肤活性物质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术一般来讲涉及鉴定或评估用于个人护理组合物中的有益活性成分的方法。更具体地，本专利技术涉及鉴定或评估抵抗氧化应激反应对皮肤细胞的效应的活性物质的方法。
技术介绍
生命的根本性基础是生物体产生能量的需求和能力。在人类中，食物被摄入并转化为化合物诸如三磷酸腺苷(“ATP”)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(“NAD”)，它们存储被身体的细胞用于进行维持生命的生物学过程的能量。将食物的有用组分(例如，碳水化合物、脂肪和蛋白质)转化为可用的能量的细胞代谢途径是复杂的，并且可以尚未被全面地理解的方式被多种因素影响。哺乳动物的皮肤细胞也不例外。皮肤细胞已知包括以动态的、复杂的关系共同起作用，以维持皮肤的健康状态的多种不同类型的细胞。例如，角质细胞增殖和分化，以提供皮肤的连续代谢周转。已知黑素细胞提供用于皮肤色素沉积的黑素合成。而成纤维细胞已知合成细胞外基质和胶原，其帮助维持皮肤的厚度和弹性。相似地，存在于皮肤或其他身体器官内或周围的其他细胞，诸如肌细胞、干细胞、皮脂腺细胞、神经细胞、和脂肪细胞，均需要来源于能够被多种不同因素不利地影响的复杂代谢途径的能量。各种紧张性刺激对细胞的生物能量学的影响和对细胞老化、以及其他疾病(例如，癌症、神经退行性疾病、糖尿病、和心血管疾病)的影响的了解越来越多。代谢的改变在疾病状态中的一些这些效应背后的一种理论是老化的自由基理论。即，哺乳动物细胞暴露于反应性氧物质(“ROS”)导致细胞结构和细胞器(诸如线粒体)的损伤。ROS是包含氧的高度反应性的分子(例如，氧离子和过氧化物)。ROS作为氧的正常代谢的天然副产物在细胞内形成，并在细胞信号转导和体内平衡中发挥作用。然而，当细胞暴露于紧张性刺激(诸如热或紫外线辐射)时，ROS水平能够升高，并且在一些情况下显著地升高。由于ROS导致的损伤随着时间积累，其在细胞水平导致越来越多的氧化应激反应，这最终可导致组织的损伤和/或器官功能障碍。氧化应激反应对细胞的一种效应是细胞的生物能量学能力的减弱，这能够导致降低的ATP和/或NAD水平。这对于人类皮肤而言可能是尤其成问题的，因为在人类皮肤细胞上的氧化应激反应可显示为老化的可见信号。另外，诸如紫外线辐射(“UV”)和污染物(例如，香烟烟雾、汽车尾气、臭氧)的环境紧张性刺激能够导致ROS产生水平的升高。随时间推移，这可导致皮肤的结构和形态的显著变化(例如，“光损伤”)，并且在更加极端的程度，导致皮肤癌。人类皮肤细胞通过利用诸如谷胱甘肽和NAD的氧化还原调节剂以及能够中和ROS的各种酶来抵御ROS。然而，这些防御能够被紧张性刺激诱导的ROS的高峰击败，导致能量稳态和代谢效率的急性的以及慢性的改变，总体上导致细胞的功能障碍。使情况复杂的是，与人类皮肤相关联的细胞类型的多样性和这些细胞的代谢途径的复杂性，使得难以鉴定适合的化合物来帮助抵抗与暴露于特定的氧化紧张性刺激或紧张性刺激的组合相关联的抗衰老效应。某些氧化紧张性刺激不同地影响不同类型的细胞和/或代谢途径。这使得难以选择抵抗特定的一种或多种紧张性刺激的不期望效应的合适的护肤活性物质或活性物质的组合(其效应也可根据细胞或代谢途径的类型而变化)。由于至少一些消费者希望得到抵抗与氧化应激反应相关联的不期望的老化效应的护肤组合物，因此存在对鉴定合适的护肤化合物的方法的需求，所述护肤化合物能够被用于制备护肤组合物，以帮助减少、防止和/或逆转与各种紧张性刺激(尤其是通常的环境紧张性刺激)相关联的不期望的氧化应激反应。作为发现抵抗氧化应激反应的代谢效应的合适的护肤活性物质的初始步骤，必须找到能够检测由紧张性刺激和活性物质导致的细胞代谢变化的方法。用于评估细胞的产能过程的多种方法是已知的。例如，Clark型电极探针用于测量氧气消耗是已知的。Clark电极提供动力学信息(即，响应的速率)，但其连续的氧气消耗引入了伪迹(即，影响测试结果的一些不期望的和/或外部的因子)，呈现了测量腔室中对细胞或分离的线粒体的氧气压力的降低。尽管氧气消耗可提供线粒体功能的指示，其仅测量了细胞的生物能学的一部分，并且没有提供对有助于生物能学平衡的其他代谢途径(即糖酵解)的评估。用于评估细胞的产能的另一个常规方法是通过测量细胞中ATP的量。用于对总的能量代谢定量的发光ATP检测试剂盒是可商购获得的。ATP测定已知是相对灵敏的，但它们可能不是线粒体功能的理想度量，因为细胞尽力维持特定的ATP预算并将相应地调整代谢。因此，ATP水平的改变通常仅在病理生理改变期间可检测。此外，ATP测定是破坏性的(即，为了测量ATP的量，细胞被破坏)并且它们缺少动力学信息。另外，来自垂死或死亡细胞中存在的残余ATP的伪迹已被报道。并且类似Clark电极测定，ATP不能确定不同的代谢途径对总的ATP产量的相对贡献。另一种用于评估细胞能量学的常规方法是使用可商购获得的MTT/XTT或alamarBlueTM试剂盒。虽然这些试剂盒可提供评估细胞健康状态的相对简单的方式，但它们不像ATP测定那样灵敏。此外，它们还被报道通过细胞毒性引入误差，而这正好是它们预期要测量的参数。另外，两种测定均为破坏性的，并且不提供动力学信息。因此，希望提供鉴定和/或评估减少、防止和/或逆转在特定类型的皮肤细胞上与特定紧张性刺激相关联的不期望的氧化应激反应的活性物质的方法。也希望提供包括通过上述方法鉴定的护肤活性物质的护肤组合物。还希望提供处理被来自特定紧张性刺激的在特定类型的皮肤细胞上的氧化应激反应损伤的皮肤的方法。附图说明图1A、1B和1C示出了角质细胞的氧气消耗速率。图2示出了角质细胞的氧气消耗速率。图3A、3B和3C示出了角质细胞的细胞外酸化速率。图4示出了角质细胞的细胞外酸化速率。图5A、5B、5C、5D和5E示出了成纤维细胞的氧气消耗速率。图6示出了成纤维细胞的氧气消耗速率。图7A、7B、7C、7D和7E示出了成纤维细胞的细胞外酸化速率。图8示出了成纤维细胞的细胞外酸化速率。图9示出了成纤维细胞的细胞外酸化速率。图10示出了成纤维细胞的细胞外酸化速率。图11示出了成纤维细胞的氧气消耗速率。
技术实现思路
为了提供对前述问题的解决方法，本文公开了鉴定或评估改善皮肤细胞(诸如角质细胞和成纤维细胞)的代谢的护肤活性物质的方法。所述方法涉及使皮肤细胞暴露于紧张性刺激和受试试剂，并基于与糖酵解和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种将受试试剂鉴定为改善角质细胞的代谢的护肤活性物质的方法，所述方法包括：a.提供多个角质细胞；b.使所述角质细胞暴露于紧张性刺激；c.非致死地检测与糖酵解和氧化磷酸化各自相关联的代谢指标，以提供所述每一个对所述紧张性刺激的响应；d.使所述多个角质细胞暴露于受试试剂；e.非致死地检测与糖酵解和氧化磷酸化各自相关联的代谢指标，以提供所述每一个对所述受试试剂的响应；以及f.当(e)的响应中的至少一个指示相对于(c)的对应响应的角质细胞代谢的改善时，将所述受试试剂鉴定为护肤活性物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.10.09 US 61/711,5001.一种将受试试剂鉴定为改善角质细胞的代谢的护肤活性物质的方法，
所述方法包括：
a.提供多个角质细胞；
b.使所述角质细胞暴露于紧张性刺激；
c.非致死地检测与糖酵解和氧化磷酸化各自相关联的代谢指标，以提
供所述每一个对所述紧张性刺激的响应；
d.使所述多个角质细胞暴露于受试试剂；
e.非致死地检测与糖酵解和氧化磷酸化各自相关联的代谢指标，以提
供所述每一个对所述受试试剂的响应；以及
f.当(e)的响应中的至少一个指示相对于(c)的对应响应的角质细胞代谢
的改善时，将所述受试试剂鉴定为护肤活性物质。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述紧张性刺激选自紫外线辐射、香
烟烟雾、臭氧、发动机尾气、柴油机尾气、烟雾、表面活性剂、和来
自计算机监视器或电视机的辐射。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述紧张性刺激是具有约315nm至
约280nm的波长的紫外线辐射。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括提供与糖酵
解和氧化磷酸化相关联的代谢指标各自的基础值，以及比较(c)的响应
与对应的基础值，以确定是否某一代谢途径表现出比其他更大的代谢
的降低。
5.根据权利要求4所述的方法，其中当(e)中的响应之一对应于表现出更
大的代谢的降低的代谢途径的改善时，将所述受试试剂鉴定为护肤活
性物质。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述基础值是通过测量尚未暴露于所
述紧张性刺激的角质细胞中的所述代谢指标来提供的。
7.根据前述权利要求中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·E·欧布龙，H·A·罗维托，
申请(专利权)人：宝洁公司，
类型：发明
国别省市：美国;US