分子伴侣/引领蛋白融合蛋白制造技术

本发明专利技术提供了包含至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体的分子伴侣/引领蛋白家族聚合物，其中所述至少一种分子伴侣/引领蛋白家族单体含有外源生物活性序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含具有外源生物活性序列之重组蛋白质单体的蛋白质聚合物。更特 别地，本专利技术涉及包含至少一种分子伴侣/引领蛋白（chaperone/usher)家族多肽单体的 分子伴侣/引领蛋白家族聚合物，其中所述至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体包 含外源生物活性序列。
技术介绍
体内蛋白质和其他胞外基质（ECM)组分形成了互连的网孔（mesh)，细胞在其中整 合并且相互作用。一种模拟这种天然构造的方式是通过交联人工聚合物来产生三维细胞培 养系统。 细胞培养和组织工程领域取得了很好的进展，并且已经开发了多种ECM等同物。 这些等同物中用于骨架的材料不同，因此能够在其中繁殖的细胞类型也不同。 纤连蛋白（FN)是一种介导细胞附着和生长的主要的ECM蛋白质。FN含有多种配 体，包括介导细胞粘附的三肽R⑶和肽PHSRN。天然来源的蛋白质（例如纤连蛋白）可用作 体内细胞附着的骨架。但是，利用任何动物来源蛋白质的一个潜在问题是有可能传播疾病。 因此，已经提出了一系列再造天然三维组织的工程三维骨架。目前的三维骨架并 不理想（7)。例如，难以产生特定细胞系或组织类型特异性的骨架；这些骨架之间还具有高 的批与批可变性；在不影响这些骨架其他性质的情况下改变其单一的性质是复杂的。例如， 如果希望改变特定骨架的粘度，可能最终同时改变粘附配体的密度和骨架的呈现方式或者 孔隙率，这可能影响营养物通过骨架扩散的特性（11)。 因此，仍然需要提供改进的细胞培养环境。 专利技术概述 在一个方面，本专利技术提供了包含至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体的分 子伴侣/引领蛋白家族聚合物，其中所述至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体包含 外源生物活性序列。 优选地,所述生物活性序列基本上无免疫原性。 优选地，所述单体基本上不含天然存在的粘附基序。 优选地，所述单体是FG环长家族（FG loop long family)多肽单体，例如，选自 CafUSafl和Afa/Dr的FG环长家族多肽单体。更优选地，所述单体是Cafl多肽。更优选 地，所述单体与SEQ ID NO : 5的多肽具有至少70%同一性。 或者，所述单体是FG环短家族（FG loop short family)多肽单体，例如选自Fim 和Pap的FG环短家族多肽单体。 优选地，所述生物活性序列选自细胞粘附识别基序、生长因子序列基序和蛋白酶 位点。更优选地，所述生物活性序列是细胞粘附识别基序。更优选地，所述细胞粘附识别基 序是胞外基质细胞粘附识别基序。更优选地，所述细胞粘附识别基序选自胶原蛋白、弹性 蛋白、纤连蛋白、层粘连蛋白或生腱蛋白。优选地，所述细胞粘附识别基序包含氨基酸序列 R⑶。替代地或附加地，所述细胞粘附识别基序包含氨基酸序列PHSRN。 优选地,所述生物活性序列包含在所述单体内这样的位点处,所述位点包含在所 述多肽折叠后的环结构内。 优选地，所述聚合物是级分1抗原聚合物（fraction I antigen polymer)，并且所 述至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体是CAFl多肽单体。 优选地，所述聚合物包含至少一种另外的分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体，其 中所述另外的分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体与所述包含外源生物活性序列的所述至 少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体至少有一个氨基酸不同。更优选地，所述另外的 分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体是不具有所述外源生物活性序列的本文所述分子伴侣/ 引领蛋白家族多肽单体。 优选地，所述另外的分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体是天然存在的CAFl多肽 单体。更优选地，所述至少一种天然存在的CAFl多肽单体是鼠疫耶尔森氏菌（Yersinia pestis) CAFl多肽。仍更优选地，所述鼠疫耶尔森氏菌CAFl多肽具有SEQ ID NO :5的多肽 序列。 优选地，所述另外的分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体包含这样的外源生物活性 序列，其不同于所述至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体的所述外源生物活性序 列。更优选地，所述至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体的所述外源生物活性序列 是包含氨基酸序列RGD的细胞粘附识别基序，并且其中所述至少一种另外的分子伴侣/引 领蛋白家族多肽单体的所述外源生物活性序列是包含氨基酸序列PHSRN的细胞粘附识别 基序。 在另一个方面，本专利技术提供了包含根据本专利技术的分子伴侣/引领蛋白家族聚合物 的水凝胶。 优选地，所述水凝胶还包含交联剂。更优选地，所述交联剂是生物可降解的交联 剂。或者，所述交联剂是不可降解的交联剂。 优选地，所述交联剂包含聚乙二醇。 在另一个方面，本专利技术提供了根据本专利技术的水凝胶作为细胞支持骨架的用途。 优选地，所述骨架是2D细胞支持骨架。或者，所述骨架是3D细胞支持骨架。 在另一个方面，本专利技术提供了包含根据本专利技术的水凝胶的伤口敷料。 在另一个方面，本专利技术提供了根据本专利技术的水凝胶，其用于治疗伤口。 优选地，所述伤口是慢性伤口，或者其中所述伤口是急性伤口。 在另一个方面，本专利技术提供了包含根据本专利技术的水凝胶的眼植入物（ocular implant)〇 在另一个方面，本专利技术提供了根据本专利技术的水凝胶，其用于治疗眼损伤。 在另一个方面，本专利技术提供了用于制备包含至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多 肽单体的分子伴侣/引领蛋白家族聚合物的方法，所述至少一种分子伴侣/引领蛋白家族 多肽单体包含外源源生物活性序列，所述方法包括： i)将编码包含外源生物活性序列之分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体的核酸分 子并入用于在宿主细胞中表达的表达载体中；以及 ii)用所述表达载体转染宿主细胞； 其中向所述宿主细胞提供编码分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体特异性之周质 分子伴侣的核酸分子和编码分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体特异性之外膜引领蛋白的 核酸分子，并且其中得到的经转染宿主细胞产生分子伴侣/引领蛋白家族聚合物。 优选地，所述生物活性序列基本上无免疫原性。 优选地，所述单体基本上不含天然存在的粘附基序。 优选地，所述分子伴侣/引领蛋白家族聚合物是级分1抗原聚合物，并且包含外源 生物活性序列的所述至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体是CAFl多肽单体。更优 选地，编码包含外源生物活性序列之CAFl多肽单体的所述核酸分子与SEQ ID NO: 1的核苷 酸序列具有至少70%同一性。 优选地，编码分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体特异性之周质分子伴侣的所述核 酸分子编码CAFl特异性的周质分子伴侣，并且其中编码分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体 特异性之外膜引领蛋白的所述核酸分子编码CAFl特异性的外膜引领蛋白。更优选地，编码 CAFl特异性之周质分子伴侣的所述核酸分子与SEQ ID NO :2的核苷酸序列具有至少70% 同一I"生。 优选地，编码CAFl特异性之外膜引领蛋白的所述核酸分子与SEQ ID NO :3的核苷 酸序列具有至少70%同一性。 优选地，如下向所述宿主细胞提供编码CAFl特异性之周质分子伴侣的核酸分子： i)将编码CAFl特异性之周质分子伴侣的核酸分子并入用于在宿主细胞中表达的 表达载体中；以及 ii)用所述表达载体转染宿主细胞。 优选地，所述表达载体还包含编码含有细胞粘附识别基序之CA本文档来自技高网...

【技术保护点】
分子伴侣/引领蛋白家族聚合物，其包含至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体，其中所述至少一种分子伴侣/引领蛋白家族多肽单体含有外源生物活性序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰里米·莱基，
申请(专利权)人：泰恩河上的纽卡斯尔大学，
类型：发明
国别省市：英国;GB