本发明专利技术公开了一种茶树组织培养再生体系构建方法，涉及茶（Camellia sinensis L.）通过无性快繁技术获得株性稳定茶树种苗的技术方法。本发明专利技术以茶树未成熟胚为外植体，经过种子消毒、胚愈伤组织诱导、分化培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤构建了茶树组织培养再生体系，既解决茶树优质种苗缺乏的问题，又可为今后开展茶树遗传转化工作奠定基础。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及。
技术介绍
茶{Camellia sinensis L.)为山茶科山茶属多年生常绿乔木或灌木,具有悠久的栽培历史，是我国重要的经济作物之一。茶树喜光怕晒，喜温怕寒，对土壤含水量有一定的要求。我国山茶属植物资源丰富，是华南地区绿化荒山，保持水土的经济作物。常规茶树育种技术具有局限性，如远缘杂交困难、有益突变频率低、选育优良品种耗时长、花期不遇等，制约了茶树优质资源的利用，使得茶树品种选育工作难以取得突破性的进展。而植物组织培养技术具有加速育种进程、缩短繁殖时间、改良植物品质、节省空间、减少劳动、可终年生产、不受自然条件限制等特点，可有效解决茶树品种选育耗时长的问题。近年来茶树组织培养研究方面取得了一定的进展，但依然存在一些问题，如外植体褐化现象严重、出梢率低、生根困难、移栽大田成活率低等，使组织培养技术在茶树中的应用受到很大的限制。因此，非常有必要建立系统的茶树离体快繁体系，为今后对茶树进行品质遗传改良奠定基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供出，本专利技术以茶树未成熟胚为外植体，经过种子消毒、胚愈伤组织诱导、分化培养、生根培养、炼苗及移栽等步骤构建了茶树组织培养再生体系，从而实现了本专利技术的目的。本专利技术的，包括以下的步骤: (O种子消毒:选择8月份底未成熟茶果，去叶后于洗衣粉水浸泡10?30min，刷净后自来水冲洗I?2h，取出尚未成熟的乳白或略带棕色的种子，在超净工作台中，剥开外种皮，先用75%乙醇消毒5?30s后用无菌水洗3?5次，再用0.1%升汞溶液消毒10?25min，用无菌水冲洗4?6次后备用。(2)胚愈伤组织诱导:将经步骤(I)处理后未成熟种胚切成0.5cmX0.5cmX0.5cm接种到诱导培养基上，先在25?28°C条件下全暗培养30?45天，然后置于每天光照10?12小时，光照强度为1500?30001x，直至诱导形成胚性愈伤组织。(3)分化培养:将步骤(2)培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织转入分化培养基上进行分化培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养7?14天，然后置于每天光照12?16小时，光照强度为3000?50001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养直至形成丛生芽。(4)生根培养:将步骤(3)过程获得的高度约为2.5?3.5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养7?14天，然后置于每天光照14?16小时，光照强度为2000?30001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根。(5)炼苗移栽:将步骤(4)获得的高约6?8cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。上述步骤(2)所述的诱导培养基为:ER+6-BAl.0?3mg/L+NAA0.1?0.5mg/L+GAS3 ?5 mg/L+ 鹿糖 15 ?30g/L+ 琼脂 3.5 ?6.0g/L, pH 为 5.4 ?5.8。上述步骤(3)所述的分化培养基为:ER+6-BAl.0?5.0mg/L+IBA0.1?0.5mg/L+鹿糖 15 ?30g/L+ 琼脂 3.5 ?6.0g/L, pH 为 5.4 ?5.8。上述步骤(4)所述的生根培养基为:1/2MS+IBA0.2?1.0mg/L+GGRl.0?2.0mg/L+KT1.0 ?3.0mg/L+ 蔗糖 15 ?30g/L+ 琼脂 3.5 ?6.0g/L, pH 为 5.4 ?5.8。与现有技术相比本专利技术的优点是:目前国内关于茶树组培快繁技术尚未成熟，而本专利技术具有简单、易行、经济的特点。通过本专利技术育成的茶树试管苗移栽成活率达到89%以上，可以有效解决茶树种苗缺乏的问题。【具体实施方式】以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。实施例1: (I)种子消毒:选择8月份底未成熟茶果，去叶后于洗衣粉水浸泡lOmin，刷净后自来水冲洗lh，取出尚未成熟的乳白或略带棕色的种子，在超净工作台中，剥开外种皮，先用75%乙醇消毒5s后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，用无菌水冲洗4次后备用，接种一周后统计污染率可低至3%。(2)胚愈伤组织诱导:将经步骤(I)处理后未成熟种胚切成0.5cmX0.5cmX0.5cm接种到诱导培养基上，先在28°C条件下全暗培养30天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1500x，直至诱导形成胚性愈伤组织，愈伤组织诱导率为67%。所述的诱导培养基为ER+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+GA35 mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 琼脂 3.5g/L, pH 为 5.8。(3)分化培养:将步骤(2)培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织转入分化培养基上进行分化培养，接种后先在28°C条件下全暗培养7天，然后置于每天光照12小时，光照强度为30001x，置于培养温度为28°C的条件下培养直至形成丛生芽。所述的分化培养基为ER+6-BA1.0mg/L+IBA0.lmg/L+ 蔗糖 15g/L+ 琼脂 3.5g/L, pH 为 5.8。(4)生根培养:将步骤(3)过程获得的高度约为2.5?3.5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28°C条件下全暗培养7天，然后置于每天光照14小时，光照强度为20001x，培养温度为28°C的条件下培养至生根，生根率为88.3%。所述的生根培养基为 1/2MS+IBA0.2mg/L+GGRl.0mg/L+KTl.0mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 琼脂 3.5g/L，pH 为5.8ο(5)炼苗移栽:将步骤(4)获得的高约6?8cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率可达91.7%。实施例2: (I)种子消毒:选择8月份底未成熟茶果，去叶后于洗衣粉水浸泡15min，刷净后自来水冲洗2h，取出尚未成熟的乳白或略带棕色的种子，在超净工作台中，剥开外种皮，先用75%乙醇消毒8s后用无菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒12min，用无菌水冲洗4次后备用，接种一周后统计污染率可低至5%。(2)胚愈伤组织诱导:将经步骤(I)处理后未成熟种胚切成0.5cmX0.5cmX0.5cm接种到诱导培养基上，先在28°C条件下全暗培养30天，然后置于每天光照12小时，光照强度为1500x，直至诱导形成胚性愈伤组织，愈伤组织诱导率为63%。所述的诱导培养基为ER+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA33 mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 琼脂 3.5g/L, pH 为 5.8。(3)分化培养:将步骤(2)培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织转入分化培养基上进行分化培养，接种后先在28°C条件下全暗培养7天，然后置于每天光照12小时，光照强度为30001x，置于培养温度为28°C的条件下培养直至形成丛生芽。所述的分化培养基为ER+6-BA1.2mg/L+IBA0.5mg/L+ 蔗糖 15g/L+ 琼脂 3.5g/L, pH 为 5.8。(4)生根培养:将步本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种茶树组织培养再生体系构建方法，其特征在于包括以下步骤： （1）种子消毒：选择8月份底未成熟茶果，去叶后于洗衣粉水浸泡10～30min，刷净后自来水冲洗1～2h，取出尚未成熟的乳白或略带棕色的种子，在超净工作台中，剥开外种皮，先用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒10～25min，用无菌水冲洗4～6次后备用； （2）胚愈伤组织诱导：将经步骤（1）处理后未成熟种胚切成0.5cm×0.5cm×0.5cm接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养30～45天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成胚性愈伤组织； （3）分化培养：将步骤（2）培养获得的呈绿色的子叶愈伤组织转入分化培养基上进行分化培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照12～16小时，光照强度为3000～5000lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成丛生芽； （4）生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为2.5～3.5cm的丛生芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养7～14天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为2000～3000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根； （5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约6～8cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘木娇，
申请(专利权)人：刘木娇，
类型：发明
国别省市：广西;45
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