产热的miRNA调节剂制造技术

本发明专利技术提供了用于调节产热的新方法和组合物。这样的方法是特别有利的，因为它们能够减少对象的身体脂肪，而无需所述对象通过节食调节其热量摄取、改变身体活动或进行肥胖治疗手术。因此，本发明专利技术的方法对治疗或预防肥胖特别有用。本发明专利技术还提供了筛选调节产热调节子活性的新试剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】目录相关申请的交叉引用.......................................................3
技术介绍
.................................................................3
技术实现思路
.................................................................3附图说明................................................................15具体实施方式............................................................18  I.  定义..............................................................18  II.产热和肥胖.........................................................22  III.miRNA试剂.........................................................24  IV.治疗方法...........................................................33  V.筛选方法............................................................38  VI.药物组合物.........................................................39  VII.例证..............................................................43    实施例1.产热调节子的计算机分析......................................44    实施例2.相关miRNA靶标的计算机选择...................................48      A)一种微小RNA-多种mRNA通路特异性的范例............................52        A1.一种微小RNA-多种mRNA通路特异性的范例的第一个实例.............53A2.一种微小RNA-多种mRNA通路特异性的范例的另一些实例.............55      B)多种microRNA-一种mRNA范例.......................................58        B1.包括UCP1的一个示例性的多种miRNA-一种mRNA范例.................58        B2.包括UCP2的另一个示例性的多种miRNA-一种mRNA范例...............77      C)多种微小RNA-多种mRNA范例........................................83      D)共调控的mRNA靶标中的一种微小RNA种子序列基序的过呈现范例.........83      E)内含子miRNA-多种mRNA通路特异性的范例............................88    实施例3.高内涵细胞表型筛选..........................................88      A.人前脂肪细胞分化成脂肪细胞......................................89        1.分化方案......................................................89        2.前脂肪细胞的转染..............................................90        3.在人前脂肪细胞分化成脂肪细胞过程中的表型变化..................90        4.在人前脂肪细胞分化成脂肪细胞过程中的基因型变化................90      B.人白色脂肪细胞分化成褐色脂肪细胞................................94        1.分化方案......................................................94        2.脂肪细胞的转染................................................95    3.人脂肪细胞在培养30天的维持过程中表型的变化................................95    4.人成熟脂肪细胞转染的优化..................................................96    5.在miRNA类似物或已知的脂肪生成和/或产热之活化剂的存在下培养两周的人成熟脂肪细胞    的表型变化..................................................................96实施例4.通过荧光素酶活性和qRT-PCR进行的高通量miRNA靶标筛选......................97实施例5.蛋白质组学分析.........................................................103实施例6.特异性靶向人脂肪细胞的克隆DNA适配体的开发和表征........................104实施例7.表型、基因型和蛋白质组学数据集的统一...................................104实施例8.肥胖的动物模型.........................................................105实施例9.人UCP1和UCP2基因的核酸序列和转录物.....................................105                                     表表1..............................................................................6表2.............本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种调节细胞中的呼吸链解偶联的方法，所述方法包括使所述细胞与调节至少一种线粒体解偶联剂之活性的miRNA试剂接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.20 US 61/636,059;2012.08.10 US 61/681,750;1.一种调节细胞中的呼吸链解偶联的方法，所述方法包括使所述细
胞与调节至少一种线粒体解偶联剂之活性的miRNA试剂接触。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞是前脂肪细胞、脂肪
细胞、脂肪组织来源的间充质干细胞、肝细胞、肌细胞或其前体。
3.一种调节组织中的产热的方法，所述方法包括使所述组织与调节
至少一种线粒体解偶联剂之活性的miRNA试剂接触。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述组织是褐色脂肪、白色脂
肪、皮下脂肪组织、肝或肌肉。
5.根据权利要求4所述的方法，其中使所述组织与所述miRNA试剂
离体接触。
6.一种治疗有此治疗需要的人对象之肥胖的方法，所述方法包括向
所述人对象施用有效量的调节至少一种线粒体解偶联剂之活性或表达的
miRNA试剂。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所选进行治疗的所述人对象具
有肥胖的遗传素质或表观遗传素质。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述线粒体解偶联
剂是UCP1或UCP2。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂是
选自以下的miRNA：hsa-miR-1-1、hsa-miR-1-2、miR-19a-b、hsa-miR-105、
hsa-miR-1283、hsa-mir-129、hsa-miR-133a-1、hsa-miR-133a-2、
hsa-miR-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、hsa-mir-199a、
hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、hsa-miR-206、
hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、hsa-mir-218-2、
hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、hsa-mir-22-3p、
hsa-mir-22-5p、hsa-mir-24-2、hsa-miR-30a-e、hsa-miR-3177-5p、
hsa-mir-325、hsa-mir-331、hsa-mir-331-5p、hsa-miR-3613-3p、
hsa-mir-362、hsa-mir-362-5p、hsa-miR-3658、hsa-mir-367、hsa-mir-371、
hsa-mir-371-5p、hsa-mir-377、hsa-mir-378、hsa-mir-378a-5p、hsa-mir-382、
hsa-mir-383、hsa-mir-422a、hsa-mir-425、hsa-miR-455-3p、
hsa-miR-455-5p、hsa-miR-491、hsa-mir-508、hsa-mir-508-5p、

\thsa-mir-512-1、hsa-mir-512-2、hsa-miR-515-3p、hsa-mir-519e、
hsa-miR-520a、hsa-mir-543、hsa-mir-545、hsa-mir-549、hsa-mir-556和
hsa-miR-568、hsa-mir-620、hsa-mir-643、hsa-mir-654-3p、hsa-miR-7a-g、
hsa-mir-765、hsa-mir-871、hsa-mir-888、hsa-mir-888-3p、hsa-mir-92b、
hsa-mir-93、hsa-mir-96和hsa-mir-99a。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂
是选自表1、11、13和14中记载的miRNA中的miRNA。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂
是选自以下的miRNA的agomir或antagomir：hsa-miR-1-1、hsa-miR-1-2、
miR-19a-b、hsa-miR-105、hsa-miR-1283、hsa-mir-129、hsa-miR-133a-1、
hsa-miR-133a-2、hsa-miR-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、
hsa-mir-199a、hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、
hsa-miR-206、hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、
hsa-mir-218-2、hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、
hsa-mir-22-3p、hsa-mir-22-5p、hsa-mir-24-2、hsa-miR-30a-e、
hsa-miR-3177-5p、hsa-mir-325、hsa-mir-331、hsa-mir-331-5p、
hsa-miR-3613-3p、hsa-mir-362、hsa-mir-362-5p、hsa-miR-3658、
hsa-mir-367、hsa-mir-371、hsa-mir-371-5p、hsa-mir-377、hsa-mir-378、
hsa-mir-378a-5p、hsa-mir-382、hsa-mir-383、hsa-mir-422a、hsa-mir-425、
hsa-miR-455-3p、hsa-miR-455-5p、hsa-miR-491、hsa-mir-508、
hsa-mir-508-5p、hsa-mir-512-1、hsa-mir-512-2、hsa-miR-515-3p、
hsa-mir-519e、hsa-miR-520a、hsa-mir-543、hsa-mir-545、hsa-mir-549、
hsa-mir-556、和hsa-miR-568、hsa-mir-620、hsa-mir-643、hsa-mir-654-3p、
hsa-miR-7a-g、hsa-mir-765、hsa-mir-871、hsa-mir-888、hsa-mir-888-3p、
hsa-mir-92b、hsa-mir-93、hsa-mir-96以及hsa-mir-99a。
12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂
是选自表1、11、13和14中记载的miRNA的agomir或antagomir。
13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂
是选自以下的miRNA的antagomir：hsa-miR-19b-2-5p、hsa-miR-21-5p、
hsa-miR-130b-5p、hsa-miR-211、hsa-miR-325、hsa-miR-382-3p/5p、
hsa-miR-543、hsa-miR-515-3p和hsa-miR-545。
14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂
是选自以下的miRNA的antagomir：hsa-miR-331-5p、hsa-miR-552、

\thsa-miR-620和hsa-miR-1179。
15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂
与靶向部分连接。
16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述靶向部分是适
配体。
17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述靶向部分将所
述miRNA试剂递送至特定细胞类型或组织。
18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂
直接与至少一种线粒体解偶联剂的mRNA或启动子区结合。
19.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂
直接与至少一种线粒体解偶联剂之mRNA的5’UTR或编码序列结合。
20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述miRNA试剂
调节线粒体解偶联蛋白的激活蛋白或阻抑蛋白的活性。
21.根据权利要求18所述的方法，其中所述激活蛋白或阻抑蛋白选
自表2中记载的激活蛋白或阻抑蛋白。
22.根据权利要求20或21所述的方法，其中所述miRNA试剂直接
与所述激活蛋白或阻抑蛋白的mRNA或启动子区结合。
23.根据权利要求20或21所述的方法，其中所述miRNA试剂直接
与所述激活蛋白或阻抑蛋白之mRNA的5’UTR或编码序列结合。
24.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中上调所述线粒体解
偶联蛋白的mRNA或蛋白质表达。
25.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中上调所述线粒体解
偶联蛋白的线粒体解偶联活性。
26.一种筛选调节产热的miRNA试剂的方法，所述方法包括：
a)提供包含人基因组的指示细胞；
b)使所述指示细胞与受试miRNA试剂接触；以及
c)在存在和不存在所述miRNA试剂的情况下，测定所述指示细胞中
的至少一种产热调节子的细胞活性，其中，在存在所述受试miRNA试剂
的情况下所述产热调节子活性的改变将所述受试miRNA试剂鉴定为调节
产热的miRNA试剂。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述细胞是脂肪细胞、脂肪
组织来源的间充质干细胞、肝细胞、肌细胞或其前体。
28.根据权利要求26所述的方法，其中在步骤(c)中测定的所述产热
调节子的细胞活性是所述产热调节子的mRNA表达水平、蛋白质表达水
平或线粒体解偶联活性。
29.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述产热调节子是
UCP1。
30.一种调节细胞中至少一种产热调节子之活性的agomir或
antagomir。
31.根据权利要求30所述的agomir或antagomir，其为选自表1、
11、13和14中记载的miRNA中的miRNA的agomir或antagomir。
32.根据权利要求30所述的agomir或antagomir，其为选自以下的
miRNA的agomir或antagomir：hsa-miR-1-1、hsa-miR-1-2、miR-19a-b、
hsa-miR-105、hsa-miR-1283、hsa-mir-129、hsa-miR-133a-1、
hsa-miR-133a-2、hsa-miR-143、hsa-mir-143-5p、hsa-mir-147、hsa-mir-149、
hsa-mir-199a、hsa-mir-199b、hsa-mir-200c、hsa-mir-204、hsa-mir-205、
hsa-miR-206、hsa-mir-21、hsa-mir-211、hsa-mir-218、hsa-mir-218-1、
hsa-mir-218-2、hsa-mir-219-2、hsa-mir-219-2-3p、hsa-mir-22、
hsa-mir-22-...

【专利技术属性】
技术研发人员：马克·蒂博尼耶，
申请(专利权)人：艾珀特玛治疗公司，
类型：发明
国别省市：美国;US