快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法。它包括以下步骤:1.无菌外植体获取，以无菌培养10-15天的盐生草幼苗采顶端分生组织为外植体；2.诱导愈伤培养，将获得的外植体转移至诱导愈伤培养基中培养10-15天至愈伤组织产生，诱导率100％；3.继代培养获得胚性愈伤组织，将获得的质地松脆，浅绿色愈伤组织切割成直径在0.3-0.5cm之间小块，转接到诱导培养基上继续培养增殖，每7-10天继代一次，每次将愈伤组织切割成小块，连续继代4-5次，即可获得质地松散，颗粒状，颜色嫩绿的胚性愈伤组织。该方法可在较短的时间内获得大量优良的盐生草胚性愈伤组织，建立了高效快速诱导盐生草胚性愈伤的体系。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物愈伤组织诱导及培养的方法，尤其是一种盐生草胚性愈伤组织快速诱导的方法。
技术介绍
盐生草(Halogeton glomeratus)是广泛分布于我国西北旱区与半干旱区的一种稀盐生植物，近年来因其优良的抗旱耐盐性能而受到重视。其本身蕴含的大量抗旱耐盐相关基因可为前作物抗旱耐盐育种提供宝贵基因资源。研究这些基因在盐生草抗旱耐盐中的作用就必须首先建立一个稳定、高效的植物组织再生体系。通过胚性愈伤组织来建立盐生草再生体系是最有效可行的方法之一，而胚性愈伤组织诱导是植物组织再生体系能否建立的关键所在。通过植物组织离体培养所产生的胚性愈伤组织，不仅可以进一步诱导器官再生或植株再生，同时所获的愈伤组织也是悬浮细胞培养及细胞原生质体分离的良好材料。当前并没有任何关于盐生草胚性愈伤组织诱导技术及盐生草再生体系构建的报道及可实施的操作方法。因此，提供一种简便、可操作的盐生草胚性愈伤组织诱导技术是具有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于避免现有技术的不足之处而提供一种快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，该方法简单易行，能够高效快速的获得大量盐生草胚性愈伤组织。以无菌培养获得的幼苗顶端分生组织为外植体，诱导愈伤组织发生，然后继代培养，获得胚性愈伤组织。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，其主要特点在于步骤为：(1)无菌外植体的获得：将常规灭菌后的盐生草种子置于无菌实生苗的培养基中培养，种子间距在0.8-1.0cm之间，培养10-15天后获得无菌实生苗作为诱导愈伤的外植体；(2)愈伤组织诱导：剪取步骤(1)获得的无菌实生苗顶端分生组织为诱导愈伤的材料，接种于诱导愈伤组织培养基上，材料间距在0.5-1.0cm之间，培养10-15天诱导愈伤的发生；(3)继代培养获得胚性愈伤组织：将步骤(2)获得的浅绿色至绿色，质地松脆的愈伤组织切割成直径在0.3-0.5cm小块，然后转接到诱导愈伤组织培养基，每7-10天继代一次，每次将愈伤组织切割成直径为0.3-0.5cm之间小块，连续继代4-5次，最终获得质地松散，颗粒状，颜色嫩绿的胚性愈伤组织。所述的快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，步骤(1)所述的无菌实生苗的培养基由1/2Hoagland-Hoagland完全营养液和6-8g/L的琼脂粉组成，PH＝5.7-5.8。所述的快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，步骤(2)、(3)中所述的诱导愈伤组织培养基由1/2MS-MS营养液，2.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)，5-7g/L琼脂，20-30g/L蔗糖组成，PH＝5.7-5.8。所述的快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，所述的步骤(1)、(2)、(3)实生苗培养、愈伤诱导和继代培养均在连续光照，光照强度在1000-2000lx之间，温度25℃的环境下进行。本专利技术的有益效果如下：1.以盐生草培养10-15天的无菌实生苗为取材对象，杜绝了由材料带菌或灭菌不彻底造成的组培污染。2.以幼嫩无菌苗的顶端分生组织为愈伤诱导材料，能够快速高效地诱导胚性愈伤组织生成。3.愈伤的诱导与继代培养所用培养基均以2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)为外源激素，实生苗培养、愈伤诱导和愈伤繁殖均在同一环境下进行，效果良好。实现了简单、易行、高效获得盐生草胚性愈伤组织的目标。附图说明：图1.本专利技术顶端分生组织培养10-15天后所得盐生草愈伤组织；图2.本专利技术盐生草愈伤组织继代繁殖4-5代后的胚性愈伤组织。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下面对本专利技术的内容进行详细的说明。实施例1：一种快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，将常规灭菌后的盐生草种子置于培养基中，种子间距在0.8-1.0cm之间，培养15天，获得无菌实生苗作为诱导愈伤的外植体，培养基主要由1/2Hoagland营养液，8g/L的琼脂粉组成，PH＝5.8；剪取无菌实生苗顶端分生组织为诱导愈伤的材料，接种于诱导愈伤组织培养基上培养15天，材料间距0.5cm，诱导愈伤的发生；将获得的浅绿色至绿色，质地松脆的愈伤组织切割成直径0.3-0.5cm小块，然后转接到诱导愈伤组织培养基，每7天继代1次，连续继代培养4代，每次将愈伤组织切割成直径在0.3-0.5cm之间小块。诱导愈伤组织及继代繁殖所用培养基主要由1/2MS营养液，2.0mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)，7g/L琼脂，30g/L蔗糖，0.1g/L肌醇组成，PH＝5.8。实生苗培养，愈伤诱导和继代培养均为连续光照培养，光照强度在1000lx之间，温度25℃的环境下进行。结果：诱导愈伤率100％，诱导愈伤呈浅绿色至绿色，质地松脆，无褐变等发生；在继代增殖过程中，愈伤组织生长迅速，最终得到嫩绿色，质地松散，呈颗粒状的胚性愈伤组织。实施例2：一种快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，将常规灭菌后的盐生草种子置于培养基，种子间距在0.8-1.0cm之间，培养15天，获得无菌实生苗作为诱导愈伤的外植体，培养基主要由Hoagland营养液，6g/L的琼脂粉组成，PH＝5.7；剪取无菌实生苗顶端分生组织为诱导愈伤的材料，接种于诱导愈伤组织培养基上培养10天，材料间距0.8cm，诱导愈伤的发生；将获得的浅绿色至绿色，质地松脆的愈伤组织切割成直径0.3-0.5cm小块，然后转接到诱导愈伤组织培养基，每7天继代1次，连续继代培养5代，每次将愈伤组织切割成直径在0.3-0.5cm之间小块。诱导愈伤组织及继代繁殖所用培养基主要由MS营养液，1.0mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)，7g/L琼脂+20g/L蔗糖，0.1g/L肌醇组成，PH＝5.8，愈伤诱导和继代培养均为连续光照培养，光照强度2000lx，温度25℃的环境下进行。结果：诱导愈伤率100％，诱导愈伤呈浅绿色至绿色，质地松脆，无褐变等发生；在继代增殖过程中，愈伤组织生长迅速，最终得到嫩绿色，质地松散，呈颗粒状的胚性愈伤组织。实施例3：一种快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，将常规灭菌后的盐生草种子置于培养基中，种子间距在0.8-1.0cm之间，培养10天，获得无菌实生苗作为诱导愈伤的外植体，培养基主要由1/2Hoagland营养液6g/L的琼脂粉组成，PH＝5.8；剪取无菌实生苗顶端分生组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，其特征在于步骤为：(1)无菌外植体的获得：将常规灭菌后的盐生草种子置于无菌实生苗的培养基中培养，种子间距在0.8‑1.0cm之间，培养10‑15天后获得无菌实生苗作为诱导愈伤的外植体；(2)愈伤组织诱导：剪取步骤(1)获得的无菌实生苗顶端分生组织为诱导愈伤的材料，接种于诱导愈伤组织培养基上，材料间距在0.5‑1.0cm之间，培养10‑15天诱导愈伤的发生；(3)继代培养获得胚性愈伤组织：将步骤(2)获得的浅绿色至绿色，质地松脆的愈伤组织切割成直径在0.3‑0.5cm小块，然后转接到诱导愈伤组织培养基，每7‑10天继代一次，每次将愈伤组织切割成直径为0.3‑0.5cm之间小块，连续继代4‑5次，最终获得质地松散，颗粒状，颜色嫩绿的胚性愈伤组织。

【技术特征摘要】
1.一种快速诱导盐生草胚性愈伤组织的方法，其特征在于步骤为：
(1)无菌外植体的获得：将常规灭菌后的盐生草种子置于无菌实生苗的培养基中培
养，种子间距在0.8-1.0cm之间，培养10-15天后获得无菌实生苗作为诱导愈伤的外
植体；
(2)愈伤组织诱导：剪取步骤(1)获得的无菌实生苗顶端分生组织为诱导愈伤的材
料，接种于诱导愈伤组织培养基上，材料间距在0.5-1.0cm之间，培养10-15天诱导
愈伤的发生；
(3)继代培养获得胚性愈伤组织：将步骤(2)获得的浅绿色至绿色，质地松脆的愈
伤组织切割成直径在0.3-0.5cm小块，然后转接到诱导愈伤组织培养基，每7-10天继
代一次，每次将愈伤组织切割成直径为0.3-0.5cm之间小块，连续继代4-5次，最终
获得质地松散，颗粒状，颜色嫩绿的胚...

【专利技术属性】
技术研发人员：王化俊，汪军成，姚立蓉，任盼荣，孟亚雄，李葆春，马小乐，杨轲，赖勇，司二静，李爱博，马艳红，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62