紫茎女贞总苷诱导抗病毒细胞因子的应用制造技术

本发明专利技术公开了紫茎女贞总苷的新应用，特别是紫茎女贞总苷诱导抗病毒细胞因子的应用，该紫茎女贞总苷由乙醇提取后用层析柱分离得到。本发明专利技术还公开了一种紫茎女贞总苷制剂，所述制剂含有紫茎女贞总苷，以及药用载体、辅料或稀释剂。本发明专利技术通过一系列实验证明紫茎女贞总苷能在体内能诱导机体产生内源性抗病毒细胞因子，也能在体外诱导细胞产生抗病毒细胞因子。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及紫茎女贞总苷，具体是紫茎女贞总苷诱导抗病毒细胞因子的应用。
技术介绍
紫茎女贞(Ligustrum purpurascensY.C Yang)为木樨科女贞属植物，主要分布在我国西南地区的云南、贵州、四川等地，是民间传统的药用植物，多以植物的嫩叶或叶入药，性味苦甘，具有疏风清热、明目生津功效；主治风热头痛、齿痛、目赤、聤耳、口疮、热病烦渴、痢疾等症，在我国民间已有两千多年的药用历史。紫茎女贞主要含苯丙素苷类化合物、黄酮类化合物、萜类化合物等。其中苯丙素类化合物包括：紫茎女贞苷(ligupurpuroside)A、B、M、N，阿克苷(acteoside)，顺式紫茎女贞苷(cis-ligupurpuroside)B，异阿克苷(isoacteoside)，松果菊苷(echinacoside)，松果菊苷(echinacoside)A和紫葳苷(campenoside)Ⅱ；黄酮类化合物包括槲皮素(quercentin)，金丝桃苷(hyperoside)，木犀草素-7-葡萄糖苷(leuteolin-7-glucoside)，大波斯菊苷(cosmosiin)，野漆树苷(rhoifolin)，山柰酚(kaempferol)，异鼠李素(isorhamnetin)，烟花苷(nicotiflorin)和芹菜素(apigenin)等。抗病毒细胞因子是由机体细胞分泌的，具有联动机体固有免疫和特异性免疫应答，进而抑制或捕杀体内病毒的小分子蛋白。抗病毒细胞因子可分两大类：一类可直接作用体细胞产生抗病毒蛋白，即(1)干扰素：IFN-α、IFN-β、IFN-γ和IFN-λ(IL-28、IL-29)，(2)肿瘤坏死因子：TNF-α和TNF-β；干扰素和肿瘤坏死因子可直接激活细胞内JAK(Janus activated kinase)-STAT(Signal transducer and activator of transcription)信号通路，随后引起下游信号级联反应，包括MTOR信号通路、PI3K信号通路、MAPK信号通路均被激活，最终启动细胞核中一些关键的蛋白基因进行转录，翻译出抗病毒蛋白进而对细菌、病毒以及癌细胞等产生防御作用。另一类是能激活巨噬细胞、自然杀伤细胞和毒性T淋巴细胞等细胞，进而捕杀或吞噬体内病毒的细胞因子，即白介素：IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-21、IL-27等。根据目前的资料显示，尚未检索到有关紫茎女贞总苷诱导抗病毒细胞因子的应用的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提出紫茎女贞总苷的新应用，特别是紫茎女贞总苷诱导抗病毒细胞因子的应用。进一步地，所述紫茎女贞总苷按照以下方法提取而得：取木樨科女贞属植物紫茎女贞的干叶，加入乙醇，加热回流提取，将所得乙醇提取物用水溶解，水溶物用Diaion或大孔吸附树脂柱层析分离，以水-乙醇或水-甲醇混合液洗脱，浓缩洗脱液得到紫茎女贞总苷。进一步地，所述加入乙醇的量为紫茎女贞干叶重量的8～10倍。进一步地，所述加热回流提取的次数是三次。进一步地，所述加热回流提取的温度是60～100℃。进一步地，所述水-乙醇或水-甲醇混合液的体积比为0.5～1.5：1。进一步地，所述水-乙醇或水-甲醇混合液的体积比为1：1。进一步地，所述紫茎女贞总苷为淡黄色粉末，有香味，易溶于水，其水溶液为淡黄色或棕黄色。进一步地，所述紫茎女贞总苷在薄层色谱的硅胶板上有七个斑点，比移值Rf依次为0.035，0.129，0.259，0.483，0.603，0.638，0.922。进一步地，所述抗病毒细胞因子为IFN-α、IFN-β和IFN-γ。进一步地，所述抗病毒细胞因子是淋巴细胞和/或巨噬细胞分泌的。一种紫茎女贞总苷制剂，所述制剂含有上述任一项权利要求的紫茎女贞总苷，以及药用载体、辅料或稀释剂，本领域技术人员可以通过本领域专业书籍获知这些在药学上可接受的药用载体、辅料或稀释剂。本专利技术紫茎女贞总苷制剂可以是胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、注射剂、滴丸、粉针剂和口服液剂中的一种。本专利技术通过实验证明紫茎女贞总苷能在体外诱导小鼠淋巴细胞和巨噬细胞分泌细胞因子：分离得到小鼠淋巴细胞和巨噬细胞，加入不同浓度的紫茎女贞总苷，通过ELISA实验检测细胞培养上清液中抗病毒细胞因子(IFN-α、IFN-β和IFN-γ)的水平，证明紫茎女贞总苷对淋巴细胞和巨噬细胞分泌IFN-α，IFN-β和IFN-γ有促进作用。当紫茎女贞总苷浓度是50μg/ml时，紫茎女贞总苷诱导淋巴细胞分泌IFN-α和IFN-β的量达到最高，当紫茎女贞总苷浓度是25μg/ml时，紫茎女贞总苷诱导淋巴细胞分泌IFN-γ达到最高，当紫茎女贞总苷浓度是50～100μg/ml时，紫茎女贞总苷诱导巨噬细胞分泌IFN-α和IFN-β的量达到最高，当紫茎女贞总苷浓度是50μg/ml时，紫茎女贞总苷诱导巨噬细胞分泌IFN-γ达到最高。本专利技术通过实验证明紫茎女贞总苷能在体内诱导免疫低下小鼠分泌细胞因子：将小鼠分组，用环磷酰胺造模，灌胃给予不同剂量的紫茎女贞总苷，通过ELISA实验测定外周血中IFN-β，IFN-γ含量，证明紫茎女贞总苷对环磷酰胺引起的血清中IFN-β和IFN-γ低下具有一定的恢复作用，其中，中剂量组上调血清中IFN-β和IFN-γ水平的效果最明显。本专利技术的有益效果是：1.本专利技术从紫茎女贞提取出总苷，并利用HPLC、TLC等手段对其进行表征。2.本专利技术提取制备紫茎女贞总苷的方法快速有效，安全可靠，而且原料来源广泛，适合大规模生产。3.本专利技术通过实验证实紫茎女贞总苷能在体内能诱导机体产生内源性抗病毒细胞因子，也能在体外诱导细胞产生抗病毒细胞因子，可以开发成治疗与抗病毒细胞因子相关的疾病的制剂，其制剂是任何经胃肠道或非经胃肠道给药剂型，包括胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、注射剂、滴丸、粉针剂和口服液剂等。附图说明图1是实施例1紫茎女贞总苷的HPLC色谱图；图2是实施例1紫茎女贞总苷的薄层色谱图；图3是实施例2不同浓度的紫茎女贞总苷诱导淋巴细胞产生IFN-α的图；图4是实施例2不同浓度的紫茎女贞总苷诱导淋巴细胞产生IFN-β的图；图5是实施例2不同浓度的紫茎女贞总苷和ConA诱导淋巴细胞产生IFN-γ的图；图6是实施例2不同浓度的紫茎女贞总苷诱导巨噬细胞产生IFN-α的图；图7是实施例2不同浓度的紫茎女贞总苷诱导巨噬细胞产生IFN-β的图；图8是实施例2不同浓度的紫茎女贞总苷和ConA诱导本文档来自技高网...

【技术保护点】
紫茎女贞总苷诱导抗病毒细胞因子的应用，其中所述紫茎女贞总苷按照以下方法提取而得：取木樨科女贞属植物紫茎女贞的干叶，加入乙醇，加热回流提取，将所得乙醇提取物用水溶解，水溶物用Diaion或大孔吸附树脂柱层析分离，以水‑乙醇或水‑甲醇混合液洗脱，浓缩洗脱液得到紫茎女贞总苷。

【技术特征摘要】
1.紫茎女贞总苷诱导抗病毒细胞因子的应用，其中所述紫茎女贞总苷按照以下方法提取
而得：取木樨科女贞属植物紫茎女贞的干叶，加入乙醇，加热回流提取，将所得乙醇提取物
用水溶解，水溶物用Diaion或大孔吸附树脂柱层析分离，以水-乙醇或水-甲醇混合液洗脱，
浓缩洗脱液得到紫茎女贞总苷。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述加入乙醇的量为紫茎女贞干叶重量的
8～10倍。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述加热回流提取的次数是三次。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述水-乙醇或水-甲醇混合液的体积比为
0.5～1.5：1。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述紫茎女贞总苷为淡黄色粉末，有香味，
易溶于水，其水溶液为淡黄色或...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺震旦，廖程晖，宋勋，胡小鹏，李晨阳，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：广东;44