本发明专利技术涉及一株具有抗病毒活性的菌株及其应用，该菌株为塔宾曲霉菌(Aspergillus tubingensis)FJBJll，已于2015年1月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC No.10435。将菌株用于制备病毒病防治制剂。本发明专利技术通过从菌株发酵液中分离纯化抗病毒活性物质，并将其研制成微生物源抗病毒剂，具有广阔的应用前景。本发明专利技术中制备的活性物质抗病毒活性高，不污染环境，可用于防治由烟草花叶病毒（TMV）引起的植物病毒病害，适合推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一株具有抗病毒活性的菌株及其应用。
技术介绍
烟草花叶病毒（TbAaccomosaicTMV)具有寄主范围广、危害大、防治难的 特点，其防治一直是科研人员关注的重点。随着化学合成农药产生的环境和生态问题受到 人们的日益关注，化学农药的使用受到越来越多的限制，而以植物源农药和微生物源农药 为主的生物农药受到越来越多的重视。目前虽然已从植物中分离到了一些对植物病毒具有 强烈抑制作用的活性物质，但真正研发成抗植物病毒剂的植物活性物质还很少，主要原因 是绝大多数植物源抗病毒活性物质的化学结构复杂，难以进行人工合成或合成成本昂贵， 且含有这些活性物质的植物还存在着生长周期长、产量低等缺点。如从苦木科植物鸦胆子 中分离获得的鸦胆子苦醇、鸦胆子素B和鸦胆子素D等多种苦木素化合物对植物病毒均有 强烈的抑制活性，但这些化合物的手性碳多、结构复杂，难以进行人工合成，且鸦胆子的生 长周期长、产量低，从而制约了其在农业生产上的进一步开发应用。发酵工程可为具有潜在 价值的微生物创造良好的生长、繁殖条件，并能进行大规模的培养，其在生物制药领域显现 出了巨大的潜力，具有显著的经济效益、社会效益和生态效益，是解决天然活性物质资源短 缺问题最经济有效的途径。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株具有抗病毒活性的菌株及其应用，通过从菌株发酵液 中分离纯化抗病毒活性物质，并将其研制成微生物源抗病毒剂，具有广阔的应用前景。 本专利技术采取的技术方案如下： 本专利技术首先提供了 一株具有抗病毒活性的菌株，为塔宾曲霉to办FJBJ11，已于2015年1月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心登记保藏，保藏编号为CGMCCNo. 10435。 其次，本专利技术还保护了所述的具有抗病毒活性的菌株在制备病毒病防治制剂中的 应用。 更具体地，所述病毒病是由烟草花叶病毒引起的病毒病。 将所述菌株培养发酵后，获取发酵液粗提物，从中分离纯化出抗病毒活性物质，用 于制备病毒病防治制剂。 所述抗病毒活性物质的制备方法，具体步骤如下：（1)将塔宾曲霉菌 〇45/76?/沿77^5 FJBJ11纯菌种接种于PDA平板培养基上，26-3CTC培养3~7 d; (2)用灭菌打孔器在培养基菌落边缘打取直径为4~5mm的4-6块菌饼，接种于PDB培 养基上，26-30 °C、120~140r/min摇床振荡培养3~5d作为种子液；（3)将种子液以 5 %~15%的接种量接入液体培养基中，26-30 °C、120~130r/min摇床振荡培养8~15 d，得到发酵液；所述液体培养基成分组成为：蛋白胨10g，葡萄糖或蔗糖30~40g，酵母粉 10~15g,CaCl2 1~1. 5g，蒸馈水1000mL;(4)将发酵液过滤后的滤液经D101大孔树 脂柱层析吸附，先用2-4个柱体积的水洗脱，再用3-5个柱体积的甲醇洗脱，收集甲醇洗脱 液，减压浓缩至膏状，膏状物用质量体积比为1 :5_10的甲醇充分溶解，过滤，滤液减压浓缩 得到发酵液粗提物；（5)发酵液粗提物用80%甲醇溶液充分溶解，溶解后的溶液经Sephadex LH-20柱层析分离，以氯仿：甲醇体积比=1:1为洗脱剂，对分离得到的各组分进行薄层层 析分析和抗病毒活性跟踪指导，取抗病毒活性最好的组分再次进行SephadexLH-20柱层析 分离，分离纯化出抗病毒活性物质。 本专利技术中制备的活性物质畸形素&可用于防治由烟草花叶病毒（TMV)引起的植物 病毒病害，试验结果表明畸形素4对TMV具有很好的抑制效果。该活性物质与目前使用的 多数植物抗病毒剂有效化学成分相比有很大的优势： (1) 抗病毒活性高； (2) 不污染环境。畸形素&为植物内生真菌塔宾曲霉菌的代谢产物，本身就是天然产 物，与环境相容性好，在自然界中易降解，不会污染环境。 (3 )该活性物质可通过发酵工程大量生产，生产和提取工艺简单，适合推广应用。【具体实施方式】 本专利技术的一株具有抗病毒活性的菌株，为塔宾曲霉 FJBJ11，已于2015年1月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保 藏，保藏编号为CGMCCNo. 10435,保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 为了更好了解本专利技术，以下通过实施例作进一步说明，但其绝不对本专利技术的范围 构成限制。 实施例1:一种从塔宾曲霉菌FJBJ11发酵液中分离纯化抗病毒活性物质畸形素Ai 的方法 (1)将塔宾曲霉菌FJBJ11纯菌种接种于PDA平板培养基上，28°C培养3d;(2)用灭菌 打孔器在培养基菌落边缘打取直径为4mm的5块菌饼，将菌饼置于装有100mLPDB培养 基的250mL锥形瓶中，28 °C、120r/min摇床振荡培养4d作为种子液；（3)将种子液以 5 %的接种量接入由蛋白胨10g，葡萄糖30g，酵母粉15g，CaCl2 1.5g和蒸馏水1000 mL配制成的液体培养基中，28 °C、120r/min摇床振荡培养10d。（4)将发酵液过滤后的 滤液50L经D101大孔树脂柱层析吸附，先用4个柱体积的水洗脱，再用3个柱体积的甲醇 洗脱，收集醇洗脱液，减压浓缩至膏状物，膏状物用质量体积比为1 :10的甲醇充分溶解，过 滤，滤液减压浓缩去除溶剂获得发酵液粗提物37g。（5)发酵液粗提物用少量甲醇：水（4: 1)的混合溶剂充分溶解，溶液经SephadexLH-20柱层析分离，以甲醇：水（4 :1)的混合溶 剂为洗脱剂进行洗脱，分部收集洗出液，洗出液经薄层层析分析后合并相同洗出液，共得到 6个合并组分，抗病毒活性（以烟草花叶病毒为靶标，采用半叶枯斑法和叶圆盘法两种方法 分别对得到的组分进行抗病毒活性测定）测定结果表明第二个合并组分抗病毒活性最好， 将该组分减压浓缩去除溶剂后所得的干物质（500mg)用少量氯仿：甲醇（1:1)充分溶解， 溶解后的溶液再次经SephadexLH-20柱层析，以氯仿：甲醇（1:1)为洗脱剂进行洗脱，分 部收集洗出液，合并相同洗出液，待洗脱剂挥干后分别获得350mg的化合物1、34mg的化 合物2和75mg的化合物3,其中化合物1的抗病毒活性最好，该化合物分子量为529,分子 式为C23H39N505S2，该物质是塔宾曲霉菌FJBJ11代谢产物中抗TMV的有效活性成分，其结构 式如下：【主权项】1. 一株具有抗病毒活性的菌株，为塔宾曲霉（ 于2015年1月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编 号为CGMCCNo. 10435。2. 如权利要求1所述的具有抗病毒活性的菌株在制备病毒病防治制剂中的应用。3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述病毒病是由烟草花叶病毒引起的病 毒病。4. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将所述菌株培养发酵后，获取发酵液粗提 物，从中分离纯化出抗病毒活性物质，用于制备病毒病防治制剂。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述抗病毒活性物质的制备方法，具体步 骤如下：（1)将塔宾曲霉菌FJBJll纯菌种接种于PDA平板培 养基上，26-30°C培养3~7d; (2)用灭菌打孔器在培养基菌落边缘打取直径为4~5mm 的4-6块菌饼，接种于PDB培养基上本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株具有抗病毒活性的菌株，为塔宾曲霉 (Aspergillus tubingensis) FJBJll，已于2015年1月26日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC No.10435。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谭庆伟，王福荣，陈启建，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。