一株哈茨木霉及其应用制造技术

一株哈茨木霉(Trichodermaharzianum)及其应用，该菌株已保藏在中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2014年10月16日，保藏号为：CGMCC No.9772。平板对峙法表明Tr16具有较好的空间竞争能力，其代谢物质抑菌作用较稳定，144h后抑菌率仍达82.25％。将Tr16菌剂于桑椹萌芽期、始花期、盛花期前后3～4d喷施，发现对桑椹菌核病具有较好的防治效果，防治效果达82.53％，且能减少农药及其废弃物造成的污染，有助于保护农业生态环境。

【技术实现步骤摘要】
一株哈茨木霉及其应用
本专利技术涉及植物保护领域，具体涉及一株哈茨木霉在抗桑椹菌核病病害中的应用。
技术介绍
桑椹菌核病是危害桑椹的主要真菌病害。其发病种类主要有3种，分别是桑椹肥大性菌核病、桑椹缩小性菌核病、桑椹小粒性菌核病。其对应的病原菌分别为桑实杯盘菌(Ciboriashiraiana)，肉阜状杯盘菌(Ciboriacarunculoides)，核地杖菌(Scleromitulashiraiana)。桑椹菌核病传染性强，发病范围广，在全国各地区均有发生。一般地势低洼，通气透光性差、湿度大的桑园发病较严重，发病率高达30％～90％，甚至绝收，给果桑产业造成毁灭性危害。目前我国大多都是采用农艺防控、化学手段来防治桑椹菌核病。农艺防控措施主要有：摘除病枝病果，深翻土壤，覆盖地膜等，需要消耗大量人力、物力、财力。化学药剂防治是主要措施，如：果农普遍使用的50％多菌灵可湿性粉剂、70％甲基托布津可湿性粉剂、40％菌核净可湿性粉剂等，都对桑椹菌核病的发生有一定预防作用。虽然这些药剂对人、畜低毒性且高效、方便，但是长期使用仍易对环境产生危害，而且使用农药易留有残留，给人、畜带来一定的安全隐患。同时，农药的长期使用容易使病原菌对农药产生抗性，产生对环境、食品的累积性污染等问题，所以对生物源农药，特别是从天然植物、动物及微生物中寻找和开发新型杀菌剂的开发研究是当前的研究热点。专利号200910103552.4的专利技术专利《一种抗肥大型菌核病菌的中药提取物》提供了一种用中草药提取物制成的抗桑椹肥大型菌核病的杀菌剂；刘华才等研究了一种综合性生物药肥对桑椹菌核病的防控效果，发现该生物药肥AS300倍液和500倍液可有效抑制桑椹菌核病发生，可代替其他杀菌剂在果桑上使用。这2种方法与以往的防治手段相比，安全系数相对增加。木霉是土壤中普遍存在，具有很大应用潜力的一类真菌，其生防效果已在很多应用实验中得到证实。迄今为止，已有50多种木霉制剂注册上市，如美国的Topshield(哈茨T-22)和以色列的Trichodex(哈茨木霉T-39)已经商品化生产。据不完全统计，木霉至少对18个属29种病原真菌有拮抗作用，其中一半是土传病原真菌。针对病原菌产生的一些如菌核、厚垣抱子、卵饱子等特殊的组织结构，木霉能在其周围大量定殖，形成较大群体，并随根的生长扩大其分布范围。木霉对主要土传病害病原真菌镰刀菌、疫霉、腐霉、立枯丝核菌等都有很好的防治效果。本专利技术尝试在桑椹菌核病病害发生前期对病原菌施用木霉菌剂，不仅具有对动物、环境无污染的特点，同时使病害在发生前期即可得到控制，降低桑椹菌核病的发病率。
技术实现思路
解决的技术问题：本专利技术的目的是提供一株哈茨木霉(Trichodermaharzianum)及其应用，该木霉菌株具有防治桑椹菌核病的功能。技术方案：哈茨木霉(Trichodermaharzianum)Tr16，该菌株已保藏在中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏日期：2014年10月16日，保藏号为：CGMCCNo.9772。所述哈茨木霉(Trichodermaharzianum)Tr16在抗桑椹菌核病中应用。上述应用的具体方法为：在桑树萌芽期、始花期、盛花期前后3～4d，于桑树根围土壤及桑树枝条上及时喷洒木霉制剂，每个时期喷洒1～2次。上述应用中，哈茨木霉(Trichodermaharzianum)Tr16发酵产物，与水以1:10体积比混合，有效孢子浓度为1×106个孢子/mL。哈茨木霉(Trichodermaharzianum)Tr16在制备抗桑椹菌核病药物中应用。抗桑椹菌核病药物，有效成分含有哈茨木霉(Trichodermaharzianum)Tr16。本专利技术的木霉Tr16菌株具有以下生物学特性：菌落生长迅速，3～4d即可布满整个平板。气生菌丝先为白色，后产生绿色的分生孢子，菌落背面无色。产孢区平展，呈同心轮纹状排列。在显微镜下观察，分生孢子梗透明，壁光滑，瓶梗呈安瓿瓶型，多数为3～7×1.2～3μm；分生孢子梗初级分支几乎成直角，或稍微朝顶方向弯曲；分生孢子为亚球形至球形，多数为2～2.9×1.9～2.5μm。本专利技术还提供了一种抗桑椹菌核病的木霉菌剂，为哈茨木霉Tr16的发酵物，即将Tr16接种于马铃薯葡萄糖液体培养基，28～30℃震荡培养5～6d，并调节孢子浓度为1×106个/mL，即得本专利技术的哈茨木霉菌剂。本专利技术还提供木霉Tr16菌剂的施用方法：将木霉菌剂与水以1:10体积比混合，在萌芽期、始花期、盛花期前后3～4d，将木霉菌剂均匀喷洒于桑树根围土壤及桑树枝条上，以达到控制桑椹菌核病的目的。有益效果：1、平板对峙法表明Tr16具有较好的空间竞争能力，其代谢物质抑菌作用较稳定，144h后抑菌率仍达82.25％。2、将Tr16菌剂于桑椹萌芽期、始花期、盛花期前后3～4d喷施，发现对桑椹菌核病具有较好的防治效果，防治效果达82.53％，且能减少农药及其废弃物造成的污染，有助于保护农业生态环境。附图说明图1为哈茨木霉(Trichodermaharzianum)Tr16在PDA平板28℃生长6d形态图；图2为哈茨木霉(Trichodermaharzianum)Tr16在显微镜下的瓶梗和孢子形态图；图3为哈茨木霉(Trichodermaharzianum)Tr16与病原菌的拮抗效果图，其中A为病原菌生长2d后在另一侧接种木霉，28℃生长4d后拮抗情况；B为病原菌生长2d后在另一侧接种木霉，28℃生长8d后拮抗情况。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1：1.木霉的分离筛选与鉴定采用稀释涂布法对取自宜宾一发病桑园的土壤进行分离，筛选得到Tr16木霉菌株。分离培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)和TSB培养基。所述的PDA培养基组成为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1000mL，自然pH；所述的TSB培养基组成为：NH4NO31g；KH2PO40.9g；MgSO4·7H2O0.2g；KCl0.15g；玫瑰红0.15g；氯霉素0.25g；链霉素0.05g；PCNB0.15g；甲霜灵0.08g；苯菌灵0.0005g；TritonX-1001ml；Water1L；调pH至5-5.5。121℃灭菌20min。2.形态学鉴定将纯化培养的Tr16菌株接种到PDA平板中央，28℃培养3～5d，观察木霉的生长情况。木霉菌落生长迅速，菌丝白色，呈卷毛状；3d后菌落半径达8cm；3～4d即可产生绿色的分生孢子，分生孢子丰富；菌落反面无色。挑取适量菌丝在显微镜下观察，菌丝透明，壁光滑。分生孢子梗透明，壁光滑；较直，粗大且刚硬；初级分枝近直角，二次分枝复杂，2～4个呈漩涡状排列，整个结构类似金字塔形状。瓶梗为安瓿形，基部明显缢缩，中部显著膨大，多数为3.39～6.55×1.26～2.9μm。分生孢子大多为亚球形，壁光滑，半透明至浅绿色，多数为2.02本文档来自技高网...

【技术保护点】
哈茨木霉(Trichodermaharzianum)Tr16，该菌株已保藏在中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2014年10月16日，保藏号为：CGMCC No.9772。

【技术特征摘要】
1.哈茨木霉（Trichodermaharzianum）Tr16，该菌株已保藏在中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2014年10月16日，保藏号为：CGMCCNo.9772。2.权利要求1所述哈茨木霉（Trichodermaharzianum）Tr16在抗桑椹菌核病中应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于在桑树萌芽期、始花期、盛花期前后3~4d，于桑树根围土壤及桑树枝条上及时喷洒木霉制剂，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张健，马佳慧，韩蓓蓓，吴福安，王俊，
申请(专利权)人：江苏科技大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32