一株具有快速降解亚硝态氮功能和抑菌功能的侧孢短芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株具有快速降解亚硝态氮功能和抑菌功能的侧孢短芽孢杆菌及其应用，该筛选菌株为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporu)YB-02其菌种保藏编号为CGMCC-No.9757。本发明专利技术菌株具有高效降解水体亚硝态氮能力、耐胆盐性和耐胰蛋白酶性，还对灿烂弧菌、黄海希瓦氏菌和迟缓爱德华氏菌等海水养殖致病菌具有较高的抑制效果。因此，本发明专利技术菌株可以开发作为用于海水养殖净水和抑菌的益生菌产品，避免抗生素滥用，有效预防渔业病害的发生，提高海产品养殖的质量和产量，对于急性水体污染有高效快捷安全的净水效果，将有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株具有快速降解亚硝态氮功能和抑菌功能的侧孢短芽孢杆菌及其应用
本专利技术属于微生物
，涉及一株具有快速降解亚硝态氮功能和抑菌功能的侧孢短芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
海水是海水养殖动物赖以生存的基本环境条件，俗话说：“三分养鱼，七分养水”。水质的好坏直接影响到它们的生长状况和养殖者的经济效益。随着生活水平的提高，人们对水产品的需求量日益增加，在捕捞量不能满足市场需求的情况下，高密度的集约化水产养殖方式得到了迅猛发展。然而，这种养殖模式中水体的污染程度远远超过了水体自身的净化能力，残存饵料及排泄物在水体中沉积，造成水体自身污染乃至水质恶化，表现为水体严重富营养化，水体中悬浮物增多，化学需氧量、氨氮、亚硝态氮、硫化氢的含量增加，有害重金属含量累积，溶解氧下降，水体酸化和臭底。尤其亚硝态氮的毒性高于氨氮，《海水水质标准》(GB3097-1997)规定海水养殖水体的亚硝态氮低于0.1mg/L，否则对底息型动物(如海参、大菱鲆和红鳍东方鲀等)尤为严重，轻者损害养殖动物神经系统和影响生长、发育和繁殖；重者导致疫病频发和直接死亡。现有海水集约化养殖过程中控制水体亚硝态氮浓度的方法是采用清池倒池，循环过滤，投放化学净水剂和微生态制剂等。但普遍存在费时费力和高能耗高成本的缺点；虽然对于突发的水体恶化，化学净水剂能快速反应转化有害物质，但会对水体环境造成二次污染；微生态制剂为环境友好型净水方案，但存在菌群净水效率低、专一性差、存活繁殖适应性差和保质期活菌剧减等问题。目前用于水环境的微生态制剂的益生菌种主要有光合细菌、芽孢杆菌、乳杆菌、双歧杆菌、硝化细菌等。这些微生物菌种单一，净化效果有限；大多为淡水菌株，不适用于海水养殖应用；不产芽孢菌剂存活期短，对环境耐受能力差；有的菌种生长缓慢，使用中“活化”时间长，导致活菌制剂的加工、保存、运输和使用等问题，阻碍了微生态制剂的研发、生产和应用。农业部第2045号公告《饲料添加剂品种目录(2013)》中，允许使用的36种微生物中有5种芽孢杆菌(地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和侧孢短芽孢杆菌)。但这些芽孢杆菌多为淡水菌株，不适用于海水养殖，对于专用于海水养殖的、具有高效海水养殖水体净化作用的芽孢杆菌以及其微生物制剂的研究较少。本专利技术筛选符合农业部《饲料添加剂品种目录(2013)》中的芽孢杆菌，该菌株具有高效去除海水养殖水体中的亚硝态氮的作用，对环境耐受性强、保质期长；同时，对海水养殖中的6种致病菌具有一定的抑菌效果，在海水养殖中可减少抗生素的同时避免水体恶化引起的病疫和死亡。
技术实现思路
鉴于上述现有技术中的不足，本专利技术的一个目的是提供一株具有快速降解海水养殖水体中亚硝态氮功能和抑菌作用的菌株。本专利技术提供的菌株为侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporu)YB-02，其菌种保藏编号为CGMCC-No.9757。侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporu)YB-02已于2014年10月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(中国科学院微生物研究所，邮编100101)，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。侧孢短芽孢杆菌YB-02(Brevibacilluslaterosporu)CGMCC-No.9757在海水养殖中去除海水中亚硝态氮的应用也属于本专利技术的保护范围。具体地，本专利技术的侧孢短芽孢杆菌YB-02CGMCC-No.9757可以应用于海洋水产养殖水体净水剂的制备。所述海洋水产养殖为海参养殖、大菱鲆养殖和红鳍东方鲀养殖。侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporu)CGMCC-No.9757在海水养殖中抑制海水养殖致病菌的应用也属于本专利技术的保护范围。优选地，所述海水养殖致病菌为灿烂弧菌、黄海希瓦氏菌、迟缓爱德华氏菌、和副溶血弧菌。本专利技术从刺参海水养殖池采集的底泥样品中分离得到具有高效的亚硝酸态氮降解能力的侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporu)CGMCC-No.9757。实验证明，本专利技术的菌株具有高效降解亚硝酸态氮的特性；侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporu)CGMCC-No.9757最适在26～28℃条件下生长，发酵pH7.2～7.5在14～16h达到对数末期，菌数达到5×1010cfu/ml。实验还证明，侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporu)在24h内对亚硝态氮降解达到99.87％，目前还没有具有如此高效的亚硝态氮降解能力的海水用微生态菌；同时对海水养殖中常见的致病菌具有一定的抑菌效果，其中对于灿烂弧菌、黄海希瓦氏菌、迟缓爱德华氏菌、和副溶血弧菌具有较好的的抑菌效果较为明显，克服了目前海水池塘养殖疫病频发和抗生素滥用的问题，在海水无公害化养殖方面，将有广阔的应用前景。附图说明图1为侧孢短芽孢杆菌YB-02在2216E平板上的菌落形态特征。具体实施方式以下的实施例便于更好的理解本专利技术，但并不限定本专利技术。另外，下述实施例中，如无特殊说明，所使用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从生物或化学试剂公司购买。下面通过实例进一步详细描述本专利技术。实施例1菌株的筛选、分离与鉴定1.培养基的配制：亚硝酸盐氮降解菌富集筛选液体培养基：NaNO21g，Na2CO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O0.03g，FeSO4·7H2O0.4g，陈海水1L，pH7.2-7.5。亚硝酸盐氮降解菌分离纯化固体培养基：NaNO20.5g，Na2CO31g，K2HPO40.5g，MgSO4·7H2O0.03g，FeSO4·7H2O0.4g，陈海水1L，琼脂粉12g，pH7.2～7.5。2216E液体培养基：蛋白胨5g，酵母膏1g，FePO40.1g，陈海水1L，pH7.2；固体培养基为液体培养基中加入15gl-1琼脂粉。营养肉汤(NB)培养基：蛋白胨10g，牛肉膏粉3g，氯化钠30g，蒸馏水1000ml，pH值7.2；固体培养基为液体培养基中加入15gl-1琼脂粉。以上培养基使用前，121℃灭菌20min，室温保存。2.菌种的筛选取刺参海水养殖池采集的底泥样品的内层样品2g，加入50ml的PBS缓冲溶液，振荡5min，使样品均匀浑浊，1000rpm离心5min，收集底泥样品上清液，备用。亚硝态氮降解菌菌株YB-02的分离与纯化：取10ml海参海水养殖池底泥样品上清液，分别加入到装有200ml氨氮降解菌富集筛选培养液的锥形瓶中，28℃，150rpm恒温摇床培养3d，富集3次。取培养的菌悬液梯度稀释后取100μl涂布于氨氮降解菌分离纯化固体培养基上，置于28℃培养箱培养。在72h之后，挑取不同形态单菌落在2216E固体培养基上划线培养，重复分离纯化3次，最后得到的单菌落进行16SrDNA测序，该单菌落命名为YB-02。将YB-02的16SrDNA测序结果与GenBank中的序列进行比对分析，与登录号AY_372923.1(Brevibacilluslaterosporu)进行比对分析，基因同源性为99％。根据《伯杰细菌鉴定手册》(第八版)对菌落形态特征和生理生化鉴定，确定YB-02为侧孢短芽孢杆菌(B本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株具有降解亚硝态氮功能和抑菌功能的侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporu)YB‑02，其菌种保藏号为CGMCC‑No.9757。

【技术特征摘要】
1.一株具有降解亚硝态氮功能和抑菌功能的侧孢短芽孢杆菌(Brevibacilluslaterosporu)YB-02，其菌种保藏号为CGMCC-No.9757。2.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐永平，车鉴，李淑英，李晓宇，王丽丽，王熙涛，张建成，阳桂菊，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21