包含表皮生长因子的囊泡和含有所述囊泡的组合物制造技术

本发明专利技术涉及包含表皮生长因子(EGF)、阳离子型表面活性剂和胆固醇或其衍生物的。本发明专利技术还公开了用于基于压缩流体(CF)技术来制备所述囊泡的方法。本发明专利技术的囊泡可用于制备药物和美容产品，和用于组织工程。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含表皮生长因子的囊泡和含有所述囊泡的组合物
本专利技术属于人类医学和兽医学、美容学和组织工程的领域，特别地属于在其组成中包含表皮生长因子(EGF)的囊泡类型的释放系统的领域。本专利技术的囊泡具有相比于游离的EGF而言经改善的治疗效力。现有技术基于由并入了在治疗上有活性的物质的两亲性分子构成的囊泡系统(通常，脂质体)的药物释放系统是制药业中最常使用的系统之一，因为它们可以提供活性成分的更大的稳定性，增加其穿过生物膜的渗透性，和允许活性物质缓慢释放而无需反复施用。EGF是在组织再生期间刺激细胞增殖和运动性的主要生长因子之一。它还通过调节上皮细胞的增殖和其迁移来帮助维持组织内环境稳定。此外，EGF诱导血管发生，其为组织提供了营养支持(Hudson和McCawley,J.Microsc.Res.Tech.1998,43:444-455；Koivisto等人,Exp.CellRes.2006,312:2791-2805；Liang等人,WoundRepairRegen.2008,16:691-698)。该生长因子在制药领域中(Wong等人,Biotechnol.Genet.Eng.Rev.2001,18:51-71；Girdler等人,Am.J.Clin.Oncol.1995,18:403-406；Haedo等人,Rev.Esp.Enferm.Dig.1996,88:409-413；Majima,Ophthalmologica1998,212:250-256)，在美容学中(Hasegawa和Yamamoto,Mech.AgeingDev.1992,66:107-114；US专利号5,618,544)，和在组织工程中(Christopher等人,Biomacromolecules2011,12:3139-3146)具有多种应用。已经开发出了采用不同脂质体系统的EGF制剂。作为例子可提及：将EGF包括在包含磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰胆碱(PC)和胆固醇的单层脂质体中(Brown等人,Ann.Surg.1988,208:788-794)。还报道了将EGF包括在包含PC、胆固醇和透明质酸(Yerushalmi等人,Arch.Biochem.Biophys.1994,313:267-273)或者包含胆固醇和二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)(等人,J.Biomed.Mater.Res.A2008,85A:271-283；等人,Int.Wound.J.2011,8:343-354)的多层脂质体中。已报道的另一类脂质体为多囊泡脂质体，其包含二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油(DMPG)、胆固醇和油酸甘油酯(Li等人,Arch.Pharm.Res.2005,28:988-994)。另一方面，已报道了包含与EGF相缀合的阳离子型脂质的脂质体(Kikuchi等人,Biochem.Biophys.Res.Commun.1996,227:666-671)；包覆有聚乙二醇(PEG)的脂质体，其还包含与PC或与DPPC相组合的胆固醇和二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)(Li等人,Int.J.Pharm.2003,258:11-19)。还已报道了包含DPPC和溶血磷脂酰胆碱(LPC)的脂质体(Saddi等人,TheAngleOrthodontist2008,78:604-609；Alves等人,LifeSci.2009,85:693-699)。采用脂质体系统的EGF制剂也已受到专利保护，例如这样的专利，其公开了：“EGF/脂质体”凝胶组合物，以及包括将EGF包载在包含中性和带负电荷的磷脂的脂质体中的方法(US专利号4944948)；脂质体的凝胶组合物，以及使用带负电荷的脂质体和EGF并且包括带负电荷的脂质例如PG、PC和胆固醇的方法(国际专利申请号WO9009782)。另一个专利申请涉及局部使用在脂质体中的EGF以防止糖尿病性足的切断术，并且使用包含PC和脱氧胆酸钠的脂质体。该专利申请限制于EGF的任何类型的脂质体/非离子型表面活性剂脂质体(niosomes)用于通过局部途径来治疗糖尿病性足的IV和V级慢性局部缺血性损伤的用途(国际专利申请号WO2007/073704)。在现有技术中，还未发现将EGF整合入由胆固醇和阳离子型表面活性剂构成的囊泡系统中。用于获得脂质体的传统方法例如薄膜蒸发(Agrawal等人,J.LiposomeRes.2005,15:141-155)、脱水-再水化(Kirby和Gregoriadis,Nat.Biotechnol.1984,2:979-984)、冷冻-解冻(Ristori等人,Biophys.J.2005,88:535-547)和挤出(MacDonald等人,Biochim.Biophys.Acta1991,1061:297-303)具有某些缺点。这些缺点中的一些与大量的之后难以去除的溶剂的使用相关，或者与由这些方法中的一些所要求的高温相关，这些将其使用限制于热稳定的物质。另一方面，材料的大小和纳米构造结果难以控制，并且它们是在扩大期间(多阶段工艺过程)具有低的可重复性的方法。脂质体制备物的另一个缺点是其差的稳定性。用压缩流体(CF)或高密度气体(无论以液态还是以超临界状态)作为溶媒来进行的材料加工在学术和工业上都唤起了很大的期望,以用于制备微米结构化或纳米结构化的材料，例如具有比用常规方法而得到的那种更大的结构均一性的颗粒材料、囊泡系统、复合颗粒、结构化表面等(Holmes等人,Chem.Eur.J.2003,9:2144-2150；Cooper,Adv.Mater.2001,13:1111-1114；Cooper,Adv.Mater.2003,15:1049-1059；Woods等人,J.Mater.Chem.2004,14:1663-1678)。CF或高密度气体是存在于其临界温度和压力附近或之上的并且在正常条件下为气体的物质。在超临界的区域或接近超临界条件的区域中，CF以独特的相存在，具有在气体特性和液体特性之间的中间特性。最常使用的CF为二氧化碳(CO2)，其被归类为绿色溶剂，因为它是无毒的，不易燃的，易于去除，在颗粒中没有残留，便宜，并且易于回收。自90年代之初起，整个开发了一系列方法，其使用CF来制备具有微米范围、亚微米范围和纳米范围的颗粒大小的微细材料(Jung和Perrut,J.Supercrit.Fluid,2001,20:179-219)。CF的溶剂化能力可以通过温度和组成的变化而发生改变(如在常规液体溶剂的情况下一样)，和还通过压力的变化(其在溶液内快得多地进行传传播)而发生改变。因此，这些脱溶方法共同地具有在非常短的时间段内达到非常高的过饱和程度的能力，这有助于向着晶体生长方向发展的成核作用，并由此获得具有非常窄的大小分布、受控的内部结构和超分子组织的微米颗粒或纳米颗粒。用于用CF来获得微米结构化或纳米结构化的材料的方法之一是称为DELOS-SUSP(DepressurizationofanExpandedLiquidOrganicSolution-SUSPension(经膨胀的液体有机溶液-悬浮液的减压))的方法(国际专利申请号WO2006/0798本文档来自技高网...

【技术保护点】
囊泡，其特征在于，所述囊泡包含表皮生长因子(EGF)、阳离子型表面活性剂和胆固醇或其衍生物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.08.02 CU 2012-01121.囊泡，其特征在于，所述囊泡包含表皮生长因子(EGF)、季铵类型的阳离子型表面活性剂和胆固醇或其衍生物，并且所述囊泡通过压缩流体(CF)技术来获得。2.权利要求1的囊泡，其中所述季铵类型的阳离子型表面活性剂为选自溴化鲸蜡基三甲基铵(CTAB)、西曲溴铵和苯扎氯铵(BKC)的表面活性剂。3.权利要求1或2的囊泡，其中所述季铵类型的阳离子型表面活性剂与所述胆固醇或其衍生物之间的摩尔比例在10M:1M至1M:5M的范围内；并且所述EGF与所述胆固醇或其衍生物之间的摩尔比例在0.5μM:1M至100μM:1M的范围内。4.权利要求1或2的囊泡，其特征在于，所述囊泡具有单层结构和在25和500nm之间的平均大小。5.权利要求4的囊泡，其特征在于，所述囊泡具有单层结构和在50和300nm之间的平均大小。6.权利要求1或2的囊泡，其中将所述EGF掺入到囊泡双层中。7.权利要求1或2的囊泡，其中所述CF技术包括这样的工艺过程，其包括：a)制备EGF和季铵类型的阳离子型表面活性剂的水溶液，b)将胆固醇或其衍生物溶解在用CF使之膨胀的有机溶剂中，c)通过在得自步骤a)的溶液上将得自步骤b)的溶液减压来合成囊泡。8.用于制备包含EGF、季铵类型的阳离子型表面活性剂和胆固醇或其衍生物的囊泡的方法，其特征在于，所述方法包括：a)制备EGF和季铵类型的阳离子型表面活性剂的水溶液，b)将胆固醇或其衍生物溶解在用压缩流体(CF)使之膨胀的有机溶剂中，c)通过在得自步骤a)的溶液上将得自步骤b)的溶液减压来合成囊泡。9.权利要求8的方法，其中步骤b)的有机溶剂为选自下列的溶剂：一元醇、多元醇、酮类、乙二胺、乙腈、乙酸乙酯和其混合物。10.权利要求8的方法，其中所述CF为选自下列的化合物：二氧化碳、乙烷和丙烷。11.权利要求8的方法，其中所述CF为氟氯烃。12.权利要求8的方法，其中所述CF为含氟烃。...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·J·桑塔纳米莲，L·本托萨鲁利，E·马蒂尼兹迪亚兹，J·A·贝兰加阿科斯塔，I·卡布雷拉普伊赫，J·贝西纳米洛，
申请(专利权)人：遗传工程与生物技术中心，科学研究高级委员会，
类型：发明
国别省市：古巴;CU