本发明专利技术涉及用于寡核苷酸的化学修饰基序。本发明专利技术的寡核苷酸(如化学修饰的反义寡核苷酸)能够具有增加的体内功效。所述化学修饰的寡核苷酸在效力、递送效率、靶特异性、毒性和/或稳定性方面提供一种或多种优势。化学修饰的寡核苷酸具有特定的化学修饰基序或锁核酸(LNA)模式。寡核苷酸(如反义寡核苷酸)能够靶向RNA，如miRNA或mRNA。本发明专利技术还提供了含有化学修饰的寡核苷酸的组合物以及使用所述化学修饰的寡核苷酸作为治疗剂用于治疗包括心血管病症的各种病症的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】包含锁核酸基序的基于寡核苷酸的抑制剂 相关申请的交叉引用 本申请要求在2012年6月21日提交的美国临时申请第61/662, 746号和2013年 3月15日提交的美国临时申请第61/801,533号的权益，并且两者通过全文引用并入本发 明。 对电子提交文本的说明 随本文电子提交的文本的内容通过全文引用并入本专利技术：序列表的计算机可读形 式副本（文件名：MIRG_036_02TO_SeqList_ST25.txt，记录日期2013年6月21日，文件大 小85千字节）。 专利
本专利技术涉及寡核苷酸，如反义寡核苷酸，包括mRNA和microRNA(miRNA或miR)抑 制剂的化学修饰基序。本专利技术的寡核苷酸，如化学修饰的反义寡核苷酸（例如，miRNA反义 寡核苷酸）当给药于受试者时，在效力、递送效率、靶特异性、稳定性和/或毒性方面能够具 有优势。 专利技术背景 将寡核苷酸递送到身体，如基于反义的治疗面临着众多挑战。结合亲和力和靶向 特异性、细胞摄取效率和核酶抗性均是基于寡核苷酸治疗的递送和活性中的因素。例如，当 将寡核苷酸导入到完整的细胞中时，它们会受到核酸酶攻击和降解，导致活性的丧失。因此 有用的寡核苷酸应当具有对细胞外和细胞内核酸酶良好的抗性以及能够穿透细胞膜。 已经制备了多核苷酸类似物以试图避免其降解，例如通过2'取代的方式（Sproat 等，NucleicAcidsResearch17 (1989) ,3373-3386)。然而这种修饰经常影响多核苷酸对 于其预定生物活性作用的效力。这类减少的效力可归因于经修饰的多核苷酸不能与靶RNA 形成稳定的双链体和/或与细胞体系相互作用的丢失。其他修饰包括使用锁核酸（locked nucleicacid)，其具有改善RNA结合亲和力的潜能（VeeduandWengel,RNABiology 6:3, 321-323 (2009))，但体内功效可能较低。作为反义治疗物使用的寡核苷酸应当对其靶 具有高亲和力以有效地削弱其靶的功能（如抑制靶mRNA的翻译或抑制靶miRNA的活性）。 然而寡核苷酸的修饰能够降低其亲和力和结合特异性，以及降低其削弱其靶的功能的能 力。 因此，尽管描述了作为治疗剂的寡核苷酸的多种递送方法，但仍需要用于稳定和 有效的基于寡核苷酸抑制剂的改善的化学修饰。 专利技术概述 本专利技术部分基于这样的发现：当给药于受试者时，寡核苷酸的特定的化学修饰模 式或基序能够增加效力、递送效率、靶特异性、稳定性和/或改善其毒性特征（toxicity profile)。本专利技术人已经发现特定的寡核苷酸化学修饰模式或基序具有提高寡核苷酸的递 送、稳定性、效力、特异性和/或毒性特征的潜力。例如，miRNA抑制剂的寡核苷酸化学修饰 模式或基序能够改善miRNA抑制剂的递送、稳定性、效力、特异性和/或毒性特征，因而在治 疗背景（therapeuticcontext)下有效地革巴向miRNA功能。 本专利技术提供了能够抑制miRNA的表达（如丰度），具有改善的特性（如增加体内功 效）的具有化学修饰模式或基序的寡核苷酸。该化学修饰模式或基序能够适用于靶向其他 治疗靶，如mRNA的其他寡核苷酸。因此，本专利技术提供了一种治疗包括心血管疾病、肥胖、糖 尿病和其他代谢性疾病在内的多种疾病的新的治疗剂（therapeutic)。 具有特定化学修饰模式或基序的寡核苷酸与具有相同核苷酸序列但不同化学修 饰模式或基序的寡核苷酸相比可具有增加的体内功效。例如，具有特定锁核酸（LNA)模式 的寡核苷酸与具有相同核苷酸序列但不同LNA模式的寡核苷酸相比具有增加的体内功效。 在一个实施方式中，本专利技术的寡核苷酸包含与miRNA的种子区域（seedregion) 互补的序列，其中所述序列包含至少5个LNA。寡核苷酸可包含与miRNA的种子区域互补 的至少5个LNA和至少一个非锁核苷酸。在一些实施方式中，非锁核苷酸位于与种子区域 互补的区域中。寡核苷酸与包含相同序列和LNA组成但不同LNA基序的第二寡核苷酸相比 可具有增加的体内功效。寡核苷酸可包含位于5'末端、3'末端、或5'和3'两末端的LNA。 在一些实施方式中，寡核苷酸包含3个或更少的连续的LNA。例如，所述寡核苷酸包含不超 过3个连续的LNA。所述寡核苷酸的长度可以是至少16个核苷酸。在一些实施方式中，所 述寡核苷酸的长度可以是从8个到20个核苷酸、长度为从18个到50个核苷酸、长度为从 10到18个核苷酸、或长度为从11个到16个核苷酸。寡核苷酸在一些实施方式中的长度为 约8个、约9个、约10个、约11个、约12个、约13个、约14个、约15个、约16个、约17个 或约18个核苷酸。 在另一实施方式中，本专利技术的寡核苷酸包含16个核苷酸的序列，其中所述序列包 含至少5个LNA，位于5'末端的LNA，位于3'末端的LNA，以及不多于3个连续的LNA。从 5'末端到3'末端的寡核苷酸可包含在序列的1、5、6、8、10、11、13、15和16位置的LNA。 本专利技术专利技术描述的寡核苷酸可包含一个或多个非锁核苷酸。在一些实施方式中， 至少一个非锁核苷酸是2'脱氧、2' 0-烷基或2'卤代。在另一个实施方式中，所有的非锁 核苷酸是2'脱氧、2' 0-烷基、2'卤代或其任意组合。 在一些实施方式中，本专利技术描述的寡核苷酸包含至少一个具有2'到4'的亚甲基 桥的LNA。寡核苷酸可具有5'帽结构、3'帽结构、或5'帽和3'帽结构。在一些实施方式 中，寡核苷酸包含一个或多个硫代磷酸酯键或是完全的硫代磷酸酯连的。寡核苷酸可具有 1个到3个磷酸醋键。寡核苷酸可进一步包含侧接（pendent)亲醋性基团或亲水性基团。 在一实施方式中，寡核苷酸是RNA抑制剂，如RNA的表达或活性的抑制剂。在一实 施方式中，寡核苷酸是miRNA抑制剂。例如，寡核苷酸可包含与miRNA的核苷酸序列或其片 段大体上或完全互补的序列。miRNA可以在任何组织中表达或在组织中选择性表达。在一 实施方式中，组织为心脏组织。例如miRNA在心脏组织中选择性表达。 寡核苷酸可以是任何miRNA的抑制剂。在一些实施方式中，寡核苷酸可以是任何 miRNA的抑制剂，但不是miR-208a、miR-208b或miR-499的抑制剂。该抑制剂描述于例如 国际公布第W02012/083005号中，其通过全文引用并入本专利技术中。在一实施方式中，寡核 苷酸是选自表1或表2的miR抑制剂。在另一实施方式中，寡核苷酸是miR-15a、miR-15b、 miR-16-l、miR-16-2、miR-24、miR-25、miR-26a、miR-497、miR-195、miR-424、let7 家族成 员、miR-21、miR-199a_b、miR-214、miR-10a-b、miR-16、miR_125b、miR-146a_b、miR-221、 miR-222、miR-30 家族成员、miR-126、miR-133、miR-l、miR-143、miR-145、miR-486、miR-92a、miR-320、miR-1-1、miR-1-2、miR-451、miR-378、miR-378*、miR-92、miR_34a、miR_3本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种寡核苷酸，其包含与miRNA的种子区域互补的序列，其中所述序列包含至少5个锁核酸(LNA)且所述寡核苷酸包含至少1个非锁核苷酸，以及所述寡核苷酸与含有相同序列和LNA组成以及不同LNA基序的第二寡核苷酸相比具有提高的体内功效。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：E范鲁伊，CM多尔比，RL蒙哥马利，
申请(专利权)人：米拉根医疗股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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