银杏酸在制备预防和/或治疗破骨细胞过度活化所致疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术属药物领域，涉及银杏酸新的药用用途。具体涉及如下结构式四角蒲桃提取物银杏酸(C17:1)在制备预防和/或治疗破骨细胞过度活化所致疾病药物中的应用。所述银杏酸(C17:1)通过阻止NFATc1核转位，抑制破骨细胞分化和骨侵蚀能力，用于制备预防和治疗骨质疏松、骨溶解、类风湿关节炎、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症、成骨不全、牙槽骨缺失、或免疫抑制治疗或长期使用糖皮质激素的引起的骨质丢失等疾病的药物。

【技术实现步骤摘要】
银杏酸在制备预防和/或治疗破骨细胞过度活化所致疾病药物中的应用
本专利技术属药物领域，涉及银杏酸新的药用用途。具体涉及四角蒲桃提取物银杏酸(C17:1)在制备预防和/或治疗破骨细胞过度活化所致疾病药物中的应用。所述银杏酸(C17:1)通过阻止NFATc1核转位，抑制破骨细胞分化和骨侵蚀能力，用于制备预防和治疗骨质疏松、骨溶解、类风湿关节炎、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症、成骨不全、牙槽骨缺失、或免疫抑制治疗或长期使用糖皮质激素的引起的骨质丢失等疾病的药物。
技术介绍
研究显示，破骨细胞是来自髓系细胞系的具有重吸收骨质能力的极性多核细胞。附着于骨表面的破骨细胞通过皱褶缘的质子泵建立的酸性环境使得骨骼中的钙质溶解，由破骨细胞合成的基质酶，包括组织蛋白酶K、MMP9、及TRAP，则可降解骨基质。大量研究表明，破骨细胞的过度活化导致骨重塑的不平衡，进一步导致骨质疏松、骨溶解、类风湿关节炎、多发性骨髓瘤、恶性肿瘤的高钙血症等骨骼相关疾病。有研究在由佐剂、胶原、血清或TNF诱导的关节炎动物模型中，发现破骨细胞在关节骨侵蚀的病理过程中发挥至关重要的作用；而缺失破骨细胞的关节炎小鼠则不出现骨侵蚀。因此，破骨细胞是骨质侵蚀过程中的关键细胞。目前通过抑制破骨细胞活性治疗上述各种疾病正逐渐成为制药公司和各大药厂关注的焦点，其中代表性药物是Denosumab，该药物是人源化的抗体，可选择性地结合活化T细胞核转录因子c1（nuclearfactorofactivatedTcell1，NFATc1）抑制破骨细胞的分化，阻止骨侵蚀和关节周围骨质流失的发生，该药物已在2008年上市，并广泛应用于上述各种疾病的治疗。最新研究表明活化T细胞核因子c1（NFATc1）作为转录因子，在破骨细胞的分化过程中发挥十分关键的作用。研究显示，由RANKL直接诱导的细胞内钙离子（Ca2+）波动能引起细胞内钙调磷酸激酶磷酸化进而选择性地激活NFATc1，促使其转位入核，从而启动破骨细胞分化过程中依赖于NFATc1的基因表达。NFATc1可以通过核因子κB配体（RANKL）受体两条下游信号通路—TRAF6和c-Fos被诱导表达，不表达NFATc1的胚胎干细胞即使RANKL通路正常激活也不能够分化成为破骨细胞。由于NFATc1作为一种核转录调控因子，在非活化时主要定位于细胞质中，一旦活化即持续地转位入核才能发挥其生物学效应，因而NFATc1成为抑制破骨细胞的分化和骨侵蚀的新靶点。南药四角蒲桃（Syzygiumtetragonum）为桃金娘科(Myrtaceae)蒲桃属（Syzygium）植物四角蒲桃（Syzygiumtetragonum）的根，主要生长于广东、海南、广西、云南等地。味辛苦，性微温。具有祛风除湿，消肿止痛的功效，主治风湿痹痛，跌打肿痛等症，被民间用于治疗各种关节疾病。目前对于其有效成份及治疗功效的研究鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供四角蒲桃提取物银杏酸新的药用用途，具体涉及银杏酸(C17:1)在制备预防和/或治疗破骨细胞过度活化所致疾病药物中的应用。所述银杏酸(C17:1)通过阻止NFATc1核转位，抑制破骨细胞分化和骨侵蚀能力，用于制备预防和治疗骨质疏松、骨溶解、类风湿关节炎、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症、成骨不全、牙槽骨缺失、或免疫抑制治疗或长期使用糖皮质激素的引起的骨质丢失等疾病的药物。本专利技术研究设计了靶向NFATc1转位入核的活细胞筛选体系，对四角蒲桃中分离的化合物进行活性筛选，结果显示，其中化合物银杏酸(C17:1)能明显阻止NFATc1转位入核，可明显抑制骨髓单核细胞向破骨细胞的分化和骨侵蚀能力。本专利技术的化合物银杏酸(C17:1)结构式如下：其分子式为C24H38O3，分子量为374.561，化学名为6-[10′(Z)-十七碳烯基]水杨酸。所述银杏酸(C17:1)通过下述方法制备：采用中药四角蒲桃药材，经乙醇回流提取3次，将滤液减压回收，制成浸膏蒸干得粗提物，再以95％的乙醇溶解成为饱和溶液，以大孔树脂过滤，用95％EtOH洗脱；洗脱液减压浓缩后以1倍量聚酰胺吸附，以95％EtOH洗脱，以TLC监测并浓缩有效部位，干燥即得银杏酸(C17:1)终产品。本专利技术中，经实验表明，所述的银杏酸(C17:1)能阻止NFATc1向核内转位，明显抑制骨髓单核细胞向破骨细胞的分化，降低破骨细胞活化的特征性酶抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）表达，下调NFATc1的下游靶基因骨质降解酶MMP9的表达和酶活性，抑制破骨细胞的骨侵蚀能力。进一步的，所述的银杏酸(C17:1)用于制备预防和治疗骨质疏松、骨溶解、类风湿关节炎、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症、成骨不全、牙槽骨缺失、或免疫抑制治疗或长期使用糖皮质激素的引起的骨质丢失等疾病的药物。本专利技术提供了含有有效量的银杏酸(C17:1)以及药学可接受成份的组合物在制备抑制破骨细胞分化和功能药物中的应用。根据本专利技术可以将治疗有效量的银杏酸(C17:1)和药学上允许的任意一种辅料制成药物组合物，或添加其他与银杏酸(C17:1)无拮抗作用的其他抗破骨细胞分化与功能药物制成药物组合物。或，在本专利技术的抑制破骨细胞分化的药物中加入一种或多种药学上可以接受的载体；其制剂可以是药学上任意一种剂型，包括但不限于末剂、散剂、片剂、丸剂、滴剂、颗粒剂、悬浮剂、溶液剂、胶囊剂、糖衣剂、口服液、注射剂、脂质体、舌下含片等。本专利技术克服了常规中药存在的不足之处，从中药中寻找获得药理作用靶点明确、具有抑制破骨细胞活性和功能的化合物单体，具体涉及四角蒲桃提取物银杏酸，进一步用于制备预防和治疗破骨细胞活性增强导致的各类疾病如骨质疏松、类风湿关节炎、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症等疾病的药物。附图说明图1：银杏酸（C17:1）（YXS）抑制NFATc1核转位的剂量效应关系，其中，EGFP-NFATc1U2OS细胞株分别用6.25,12.5,25,and50μM银杏酸（C17:1）处理2h，之后用卡巴胆碱2μM处理30min，细胞固定并用hochest染核后进行高内涵筛选，（A）高内涵筛选所得细胞图，（B）定量核质荧光差值（*p<0.05,**p<0.01与刺激后无加药组相比）。图2：银杏酸（C17:1）（YXS）对RANKL诱导的破骨细胞前体细胞NFATc1核转位的抑制作用，其中，采用50ng/mlRANKL和0,6.25,12.5,25μM银杏酸（C17:1）（YXS）处理RAW264.7细胞两天，提取核蛋白和胞浆蛋白，以及总蛋白进行WesternBlot分析，用GAPDH作为内参。图3：银杏酸（C17:1）对破骨细胞分化的影响，其中，破骨细胞前体细胞用50ng/mlRANKL处理5天，同时分别加入0,3.125,6.25,12.5,25μM银杏酸（C17:1）处理，第六天时取出进行TRAP染色、拍照，（A）显微镜下TRAP染色后破骨细胞形成的情况，（B）TRAP阳性细胞计数（**p<0.01），（C）破骨细胞前体细胞分别用12.5,25,50μM银杏酸（C17:1）处理5天之后进行CCK-8法细胞毒性实验。图4：银杏酸（C17:1本文档来自技高网...

【技术保护点】
如下结构式的银杏酸(C17:1)化合物在制备预防和/或治疗破骨细胞过度活化所致疾病药物中的应用，

【技术特征摘要】
1.如下结构式的银杏酸(C17:1)化合物在制备预防和/或治疗骨质疏松、多发性骨髓瘤、Paget’s病、恶性肿瘤的高钙血症、成骨不全或牙槽骨缺失病药物中的应用，2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的银杏酸(C17:1)化合物抑制破骨细胞分化和功能。3.根据权利要求1所述的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈晓燕，尹胜，周春，张馨文，朱翰东，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31