Anti‑hsa‑miR‑487a在制备治疗肝癌的药物中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种Anti‑hsa‑miR‑487a在制备治疗肝癌的药物中的用途。本发明专利技术通过研究首次证实名为hsa‑miR‑487a的miRNA在肝癌中存在高表达，利用该RNA的这一特性，采用hsa‑miR‑487a探针预测患者术后预后，便于后期个体治疗的采用。

【技术实现步骤摘要】
Anti-hsa-miR-487a在制备治疗肝癌的药物中的用途
本专利技术涉及一种内源性的非编码小miRNAs、包含其的药物组合物，以及其用于治疗或术后预防肝癌的新用途，特别地，涉及一种hsa-miR-487a用于治疗或术后预防肝癌药物中的用途。
技术介绍
众所周知，肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC，简称肝癌)是全球男性第五大常见肿瘤，具有预后恶劣、死亡率高等特点，严重威胁我国人民的生命与健康。如2008年世界新增肝癌病例为7483万人，而同年肝癌死亡病例高达到6959万人，其发病率与死亡率几近1:1。尽管近年来随着影像诊断与手术技术的不断进步以及以索拉非尼为代表的肝癌靶向治疗药物的面世，为肝癌的早期诊断与治疗提供了可能与更多且更有效的治疗选择，使肝癌的治疗水平得到了一定的提高。然而，综观目前肝癌临床治疗现状，肝癌术后复发转移率仍高居不下，术后5年生存率仍徘徊在30％上下，严重的制约了肝癌总体治疗水平的提高，无法使之得到根本性的改善。究其原因就是尚未完全弄清楚肝癌发生、发展与侵袭转移的确切机制。这严重制约了对肝癌进展过程的理解和对新的治疗肝癌药物的研发。因此，如何深入研究探讨HCC发生、发展与侵袭转移的机制已成为现今HCC研究领域中的一个十分重要科学问题。微小RNA(microRNAs，简称miRNAs)是一类长度约为20～24nt，有显著生物学意义的内源性非编码蛋白质的单链小RNA分子。miRNA于基因转录后阶段发挥相应的调控作用。据已有文献估计，miRNA能够对体内约1/3的蛋白合成起到调控作用，miRNAs可广泛参与不同生理及病理过程的调节，如发育、凋亡、分化、增殖、代谢、应激等。鉴于miRNA常常定位于染色体易于丢失、重排、扩增的脆点，致使miRNA定位的染色体脆点部分易于出现缺失、重排、扩增，进而导致miRNA表达出现异常，并直接导致细胞增殖、分化、转移、凋亡等功能也随之发生异常改变，诱使肿瘤细胞的出现。miRNA强大的功能及特殊的生成、调控方式已经吸引了众多学者的关注，目前大量研究已证明miRNA在肿瘤的发生、增殖、分化、侵袭、转移、凋亡方面均发挥重要的作用，在肿瘤的诊断、预后评估、治疗等领域开始崭露头角。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术人通过研究发现了与肝癌侵袭转移和肝癌增殖过程密切相关的分子机制，并利用在该分子机制中起关键作用的小分子RNA——hsa-miR-487a的表达量的变化和作用通路，提供了用于治疗肝癌的药物组合物。根据本专利技术的一个方面，提供了一种药物组合物，其包含小分子核酸hsa-miR-487a。进一步地，小分子核酸hsa-miR-487a与递送载体相连接后用于药物组合物中。进步一地，递送载体为吗啉代核酸。根据本专利技术的另一方面，还提供了一种小分子核酸hsa-miR-487a在制备治疗或术后预防肝癌的药物中的应用。进步一地，应用包括将小分子核酸hsa-miR-487a与递送载体连接后用于药物中。进步一地，递送载体为吗啉代核酸。进步一地，药物为用于肝癌的生长期或肝癌转移期的药物。进步一地，含有小分子核酸hsa-miR-487a的肝癌诊断试剂盒。根据本专利技术的另一方面，还提供了一种用于检测肝癌的试剂盒，试剂盒包括小分子核酸hsa-miR-487a。本专利技术具有以下有益效果：1.本专利技术通过研究首次证实hsa-miR-487a的作用通路，及其具有可促进肝癌细胞的侵袭转移与增殖的作用的特性。利用该特性，将具有该结构的miRNA与现有的药物载体相结合，给药后，该药物能有效抑制动物体内该基因的表达，从而抑制肝癌细胞的增殖和转移，从而达到提高肝癌患者预后的目的。2.本专利技术提供的hsa-miR-487a的应用包括了对于肝癌的治疗或术后预防。3.本专利技术通过研究首次证实名为hsa-miR-487a的miRNA在肝癌中存在高表达，利用该RNA的这一特性，可以用于制备检测潜在肝癌患者的试剂盒。除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本专利技术还有其它的目的、特征和优点。下面将参照图，对本专利技术作进一步详细的说明。附图说明构成本申请的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1示出肝细胞癌芯片结果示意图；图2示入选550例患者的纳入排除及分组过程的流程示意图；图3示hsa-miR-487a在肝细胞癌中的表达水平，其中图A与图B分别示训练队列和验证队列中肝癌hsa-miR-487a的表达水平，红线示癌组织中hsa-miR-487a高于癌旁组织2倍水平，在两个队列中分别有85/132与43/66例样本中癌组织hsa-miR-487a表达水平高于癌旁组织两倍以上；图C示在两个队列中，统计显示癌组织中hsa-miR-487a表达水平均显著高于癌旁组织；图D示在两个队列肝细胞癌的三种亚型中，hsa-miR-487a在高转移潜能的亚型NHCC中表达显著高于低转移潜能的SHCC与SLHCC组；图4示肝癌组织与癌旁组织中hsa-miR-487a表达水平。采用原位杂交技术检测肝癌组织石蜡固定切片中hsa-miR-487a表达水平。图A示阴性对照原位杂交探针Scramble结果图，图B示作为内参及阳性对照的原位杂交探针U6结果图，图C示采用hsa-miR-487a探针检测检测样本中hsa-miR-487a表达水平。图片中蓝色为原位杂交探针阳性颗粒，红色为核固红非特异性核染料。图中可见hsa-miR-487a在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织，两者之间可看到显著的分界线；图5示正常肝细胞系与肝癌细胞系中hsa-miR-487a表达水平。采用realtime-PCR检测原代肝细胞系(PHH)，正常肝细胞系(L02)与肝癌细胞系(HepG2，PLC，Bel7402，MHCC97-L，SMMC7721，Huh7，Hep3B，MHCC97-H，HCCLM3)细胞系中hsa-miR-487a的表达水平。hsa-miR-487a在肝癌细胞系中表达均高于正常肝细胞系；图6示肝癌组织中高表达hsa-miR-487a的患者往往具有相对差的总体生存率与无病生存率。图A与图B分别示意训练队列与验证队列中hsa-miR-487a高低表达组中总体生存率和无病生存率。hsa-miR-487a低表达组中患者具有较好的术后总体生存率与无病生存率；图7示采用慢病毒感染肝癌细胞系感染效率。亮视野(Brightfield)示光镜下所见，绿色荧光(GFP)示同视野下成功被感染慢病毒的细胞。叠加图(Merge)则是将亮视野与绿色荧光图叠加后所获得的图片，可清晰看出镜下已成功感染病毒与未感染病毒的细胞；图8示采用慢病毒感染肝癌细胞系后其中hsa-miR-487a的表达水平。图A示空白的HCCLM3细胞系(untreated)和HCCLM3细胞系感染hsa-miR-487a干预病毒(Anti-hsa-miR-487a)或阴性对照病毒(Negativecontrol，NC)后其中hsa-miR-487a表达水平。图B示空白的HepG2细胞系(untreated)和HepG2细胞系感染hsa-miR-487a过表达病毒(hsa-miR-487a)或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物组合物，其特征在于，其包含小分子核酸hsa‑miR‑487a。

【技术特征摘要】
1.一种药物，其特征在于，所述药物为Morpholino-Anti-hsa-miR-487a，其序列为GATGTCCCTGTATGATTCGTCAT。2.如权利要求1所述的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨连粤，常睿敏，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43