一种附骨痈模型兔的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种属于实验动物领域，尤其涉及一种附骨痈模型兔的制备，以及采用该模型进行附骨痈骨不连治疗作用评价的应用。该方法包括以下的步骤：1）动物选择及饲养条件、2）菌种复苏及培养、3）胫骨局部物理刺激、4）麻醉、5）附骨痈模型制备、6）术后观察及处理、7）附骨痈模型评价、8）附骨痈模型兔在附骨痈骨不连治疗作用评价中的应用。本发明专利技术开发的附骨痈兔模型，能够为促进附骨痈骨不连治疗的药物的筛选和开发提供动物模型和检测指标。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种附骨痈模型兔的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：1）动物选择及饲养条件    新西兰兔，雄性，体重2.0‑2.5kg，动物饲养及整体实验均屏障级实验动物中心完成；2）菌种复苏及培养取金黄色葡萄球菌标准菌株（ATCC 25923 Staphylococcus aureus subsp. aureus）的冷冻干燥菌种，加入0.3mL营养肉汁琼脂培养基，轻轻振荡，使冻干菌体溶解呈悬浮状，吸取全部菌悬液，移植于营养肉汁琼脂培养基试管中，在37℃有氧条件下，培养24h；取试管置比浊仪中，与1.0麦氏单位浓度的标准比浊管进行比浊，达到统一浓度后，用移液枪提取0.1mL，加至1 ml的生理盐水，配制成1×108cfu/mL浓度的菌液，立即使用；3）胫骨局部物理刺激兔子左下肢采用预冷的冰带捆缚，每天刺激3次，每次20min，2次刺激间隔30min，连续处理七天；4）麻醉麻醉前测量动物体重，3%戊巴比妥钠，以50mg/Kg剂量腹腔注射麻醉，给药同时观察肌肉紧张度、角膜反射和对皮肤捏夹的反应，当上述反应明显减弱或消失时即完全麻醉；5）附骨痈模型制备兔子固定于手术台上，左下肢胫骨至膝关节周围剃毛，聚维酮碘消毒；于胫骨前内侧缘切开皮肤，逐层分离皮下、筋膜、肌肉，剥离骨膜，显露胫骨上端前内侧，用骨钻钻孔至髓腔，抽取骨髓后，向髓腔内注射5%鱼肝油酸钠，5min后按体重注射一定浓度的金黄色葡萄球菌，孔洞用无菌骨蜡封闭，缝合皮肤，3周后对模型进行指标检测及评价；6）术后观察及处理所有动物麻醉清醒后单笼饲养，笼内自由活动，统一标准饲养，不使用任何抗菌药物，动物均出现患肢跛行，进食量减少现象；7）附骨痈模型评价大体情况：观察动物基本情况，包括患肢局部情况，局部皮肤颜色呈暗红色、步态蹒跚、体温上升、局部肿胀并形成窦道；血液生化指标检查：耳缘静脉取血，进行血常规、及血清ALP检查；微生物学检查：取髓腔内组织，置于无菌牛肉汤24小时后作细菌培养，均证实为金黄色葡萄球感染菌；三维重建CT检查：按照120KV，35mA，0.14L，DLP4，TI为2.7s条件进行扫描，经三维重建形成三维图，精确评估骨缺损面积；病理组织学检查：随机选取造模成功的动物，处死取材，置10%福尔马林液中固定48小时，再冲洗后置复合脱钙液脱钙24小时，脱水、石蜡包埋切片，纵切厚度5μm，HE染色，光镜下观察新骨形成情况及骨缺损处血管化情况；根据Lane‑Sandhu组织学评分法，对病理组织HE染色光镜下所见进行组织学评分。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张扬，黄孝闻，沈立锋，王绪平，俞忠明，董宇，
申请(专利权)人：浙江省中医药研究院，
类型：发明
国别省市：浙江;33