一种分析酱油曲醅中未知微生物的方法技术

本发明专利技术公开了一种分析酱油曲醅中未知微生物的方法。该方法先进行样品的采集，从采集的酱油醅中提取基因组DNA；建立扩增16S rDNA V3可变区的PCR反应体系和反应程序；PCR产物的纯化；对纯化后的PCR产物进行变性梯度凝胶电泳，电泳结束后，用SYBRGREEN染色，用凝胶成像仪拍照；采用Quantity one软件对图谱进行多样性分析和聚类分析；对图谱上的优势条带和差异条带进行切胶回收；对回收条带进行PCR扩增；扩增产物用来做测序分析；所测得的序列经于NCBI上进行Blast比对分析，然后进行同源性分析。本发明专利技术以微生物的DNA序列为对象，可明确酱油制曲和发酵过程中微生物群落结构和动力学变化规律。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种分析酱油曲醅中未知微生物的方法，其特征在于包括如下步骤：1)样品的采集：在酱油发酵罐采集样品，在酱油发酵周期分时间段进行采样；2)从采集的酱油醅中提取基因组DNA；3)建立扩增16S rDNA V3可变区的PCR反应体系和反应程序，用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，用GelDoc 2000 System凝胶成像仪拍照，分析结果；扩增所用的引物为SEQ.ID.NO1和SEQ.ID.NO2；4)PCR产物的纯化；5)对纯化后的PCR产物进行变性梯度凝胶电泳，电泳结束后，用SYBR GREEN染色，用凝胶成像仪拍照；6)采用Quantity one软件对图谱进行多样性分析和聚类分析；7)对图谱上的优势条带和差异条带进行切胶回收；8)对回收条带进行PCR扩增，扩增所用的引物为SEQ.ID.NO3和SEQ.ID.NO2；9)扩增产物用来做测序分析，测序反应所用的引物为SEQ.ID.NO3和SEQ.ID.NO2；10)所测得的序列经于NCBI上进行Blast比对分析，然后进行同源性分析。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：耿予欢，李国基，杨洁明，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44