具有神经保护作用的肽及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种肽以及其在治疗阿尔兹海默症药物中的应用。本发明专利技术提供的肽的氨基酸序列为V F Q V R A R T V A或 N G V T D Q S P F S。本发明专利技术通过大量实验研究筛选，优选得到特定氨基酸序列的肽，实验结果表明本发明专利技术提供的肽pep32和pep63能够竞争性与ADDLs结合，从而可有效阻止ADDLs和EphB2的结合，阻止EphB2的降解，进而维持NMDAR在突触膜上的表达，改善ADDLs的神经毒性，从而具有很好的神经保护作用。采用本发明专利技术提供的肽可以用于制备神经元保护药物，可以用来制备预防和/或治疗阿尔兹海默病的药物，在神经医疗领域有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
具有神经保护作用的肽及应用
本专利技术涉及一种具有神经保护作用的肽，尤其涉及一种具有改善ADDLs介导的神经毒性的肽，该肽可以用于制备防治阿尔茨海默病，属于生物医学

技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)，亦称老年痴呆症(seniledementia)，是一种以进行性智能衰退为特征的中枢神经系统退行性疾病，其确切的发病机制尚不明确。近年来越来越多的研究表明，可溶性β淀粉样蛋白(amyloidβ-peptide,Aβ)寡聚物，也称Aβ来源的可扩散性配体(Aβ-deriveddiffusibleligands,ADDLs)是AD病因的关键分子。目前，ADDLs已经成为治疗AD的热门靶点，靶向ADDLs治疗不但可以改善AD的早期症状，而且还可能会延缓AD的进程。以ADDLs为靶点研究改善认知功能障碍的治疗策略会促进抗AD药物的设计和开发，对于预防和早期治疗AD具有重要的临床意义和社会价值。ADDLs攻击神经细胞时，它们并不是各处都存在，而是选择性地结合与学习和记忆相关的神经细胞受体。最近的研究发现ADDLs可以和海马神经元表面的受体酪氨酸激酶EphB2结合，这种结合导致EphB2的降解，进而削弱N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-asparticacidreceptor,NMDAR)正常功能的发挥。但内源的ADDLs和EphB2在AD模型小鼠的海马组织是否发生原位结合还有待研究。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，本专利技术通过大量实验研究，筛选出ADDLs和EphB2的相互作用位点，优选出干扰二者相互作用的新型肽，本专利技术优选的肽可以结合ADDLs，从而可阻止ADDLs和EphB2的结合，阻止EphB2的降解，进而维持NMDAR在突触膜上的表达，具有很好的改善ADDLs的神经毒性，改善突触可塑性及认知功能，从而具有很好的神经保护作用，可用于制备防治阿尔茨海默病的药物。技术方案：为了实现以上目的，本专利技术采取的技术方案为：一种具有神经保护作用的肽，该肽具有下述的氨基酸序列：Val-Phe-Gln-Val-Arg-Ala-Arg-Thr-Val-Ala(缬氨酸-苯丙氨酸-谷氨酰胺-缬氨酸-精氨酸-丙氨酸-精氨酸-苏氨酸-缬氨酸-丙氨酸)。本专利技术简称该肽为pep63，其氨基酸序列如序列1。一种具有神经保护作用的肽，该肽具有下述的氨基酸序列：Asn-Gly-Val-Thr-Asp-Gln-Ser-Pro--Phe-Ser(天冬酰胺-甘氨酸-缬氨酸-苏氨酸-天冬氨酸-谷氨酰胺-丝氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-丝氨酸)。本专利技术简称该肽为pep32，其氨基酸序列如序列2。本专利技术所述的以上二种具有神经保护作用的肽在制备防治阿尔茨海默病药物中的应用。本专利技术提供具有神经保护作用的肽，其中Pep63(氨基酸序列VFQVRARTVA)和Pep32(氨基酸序列NGVTDQSPFS)，可以竞争性地结合ADDLs，阻止EphB2的降解，进而维持NMDAR在突触膜上的表达，改善ADDLs的神经毒性，最终改善突触可塑性及认知功能，从而具有神经保护作用和治疗阿尔茨海默病的功效。本专利技术提供的神经保护肽pep63和pep32可以用于制备改善ADDLs的神经毒性的制剂。本专利技术通过免疫共沉淀实验，证明内源的ADDLs和EphB2在AD模型小鼠的海马组织中发生了原位结合。本专利技术首先采用多肽阵列检测的方法，详细研究了ADDLs和EphB2的相互作用位点，根据ADDLs和EphB2的相互作用位点设计了4种不同的干扰小肽。同时，本专利技术对设计的4种小肽进行了筛选。研究证实上述的肽pep32和pep63能够竞争性与ADDLs结合，从而阻止ADDLs和EphB2的结合，阻止EphB2的降解，进而维持NMDAR在突触膜上的表达，改善ADDLs的神经毒性，具有很好的神经保护作用。本专利技术的具有神经保护作用的肽在制备防治阿尔茨海默病药物中的应用，根据中国药典方法及其相关常用方法，把本专利技术具有神经保护作用的肽和药学上可接受的载体制备成丸剂、胶囊剂、片剂或注射剂制剂。有益效果：本专利技术和现有技术相比具有以下优点：本专利技术通过大量实验研究筛选，优选得到特定氨基酸序列的肽，实验结果表明本专利技术提供的肽pep32和pep63能够竞争性与ADDLs结合，从而可有效阻止ADDLs和EphB2的结合，阻止EphB2的降解，进而维持NMDAR在突触膜上的表达，改善ADDLs的神经毒性，从而具有很好的神经保护作用。采用本专利技术提供的肽可以用于制备神经元保护药物，可以用来制备预防和/或治疗阿尔兹海默病的药物，在神经医疗领域有很好的应用前景。附图说明图1是内源的ADDLs和EphB2在AD模型小鼠的海马组织的结合。图2是ADDLs和EphB2相互作用位点的示意图。图3是本专利技术提供的肽pep32和pep63对ADDLs和EphB2结合的抑制作用示意图。图4是本专利技术提供的肽pep32和pep63对ADDLs神经毒性的改善作用示意图。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐明本专利技术，应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围，在阅读了本专利技术之后，本领域技术人员对本专利技术的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。其中，实验试剂和所述肽购买情况如下：Anti-EphB2(1:1000)购自R&D公司，Anti-GluN2B由浙江大学罗建红惠赠，β-Actin购自SantaCruz公司。Anti-BetaAmyloid1-16(6E10)购自Covance公司，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔以及山羊抗小鼠二抗购自碧云天生物技术有限公司，免疫共沉淀试剂盒购自Millipore公司，亚细胞提取试剂盒购自Calbiochem公司。HFIP以及DMSO购自Sigma公司。Aβ1-42购自Sigma公司。采用SPSS13.0软件行统计学分析；实验数据均数±标准差(mean±SD)表示；组内比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用q检验，两组之间的比较采用t检验；p<0.05，表示差异有统计学意义。本专利技术实施例中采用免疫印迹(immunoblot；IB)检测蛋白的表达。按高灿等人已建立的方法(GaoC,etal.,Hippocampus2010；20:1072-1082)。样品经SDS-PAGE分离后，以半干转法/湿转至PVDF膜上。转移完毕后，加入封闭液，室温封闭2h，一抗4℃过夜。TTBS洗膜，再和二抗于室温下作用1h，曝光，显影，定影，图像经扫描，用ImageJ软件进行分析。本专利技术实施例中采用免疫共沉淀(immunoprecipitation；IP)检测蛋白质与蛋白质的相互作用。根据Millipore公司(Cat.17-500)的试剂盒说明操作。操作叙述如下：收集样品总蛋白，裂解，离心取上清，加入相应抗体孵育，再与预处理好的proteinA琼脂糖珠孵育，使抗体与proteinA琼脂糖珠偶连。免疫共沉淀反应之后，离心去上清，取沉淀物，加入SDS煮沸，然后走SDS-PAGE进行分离本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有神经保护作用的肽，其特征在于，该肽具有下述的氨基酸序列：Val‑Phe‑Gln‑Val‑Arg‑Ala‑ Arg‑Thr‑ Val‑ Ala。

【技术特征摘要】
1.肽Val-Phe-Gln-Val-Arg-Ala-Arg-Thr-Val-Ala在制备防治阿尔茨海默病药物中的应用。2.根据权利要求1所述的肽Val-Phe-Gln-Val-Arg-Ala-Arg-Thr-Val-Ala在制备防治阿尔茨海默病药物中的应用，其特征在于，把肽Val-Phe-Gln-Val-Arg-Ala-Arg-Thr-Val-Ala和药学上可接受的载体制备成丸剂、胶囊剂、片剂或注射剂制剂。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：高灿，石小东，孙凯，孙楠，郝景茹，胡蕊，
申请(专利权)人：徐州医学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32