一种大鼠肝细胞分离方法技术

本发明专利技术提供一种大鼠肝细胞分离方法，包括步骤：（a）取出大鼠肝脏；（b）预热35~38℃的无钙灌流液灌流，直到肝脏胀大；（c）剪断肝下下腔静脉，使血液流出，直到肝脏成土黄色；（d）预热的35~38℃含钙灌流液灌流3~7min；（e）预热35~38℃的含0.05%Ⅳ型胶原酶的灌流液灌流1~3min。本发明专利技术提供的大鼠肝细胞分离方法，操作简单、胶原酶使用量少、细胞产量及成活率高。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种大鼠肝细胞分离方法，其特征在于，包括步骤：（a）取出大鼠肝脏；（b）预热35~38℃的无钙灌流液灌流，直到肝脏胀大；（c）剪断肝下下腔静脉，使血液流出，直到肝脏成土黄色；（d）预热的35~38℃含钙灌流液灌流3~7min；（e）预热35~38℃的含0.05%Ⅳ型胶原酶的灌流液灌流1~3min；（f）止血钳夹住肝下下腔静脉，0.05%Ⅳ型胶原酶继续灌流，待肝脏胀大时停止灌流，原位消化4~6min，原位消化期间不间断使用35~38℃生理盐水淋在肝脏上；（g）去除止血钳，预热35~38℃的含0.05 %Ⅳ型胶原酶的灌流液灌流2~3min；继续执行步骤（f）和步骤（g），当肝脏表面出现裂纹时，执行步骤（h）；（h）分离肝脏，撕开肝包膜，将肝细胞收集到3~5℃含钙灌流液中，过滤，收集滤液；（i）将收集的滤液3~5℃低速离心，弃上清，加含钙灌流液，重悬，重复2~4次；（j）将离心收集的细胞在细胞培养皿中培养，每4h，换液。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢雪琨，陈红丽，樊晋宇，武红艳，郏亚静，
申请(专利权)人：新乡医学院，
类型：发明
国别省市：河南;41