微生物发酵生产低温γ-内酰胺酶的方法技术

本发明专利技术涉及一种微生物发酵生产低温γ-内酰胺酶的方法，具体为先将产生γ-内酰胺酶菌种活化，再经过逐级低温驯化，使菌种在低温环境中生长良好，将低温驯化后的γ-内酰胺酶产生菌在10～16℃逐级扩大培养，按发酵液体积3～9％的接种量接种于液体发酵培养基中，在10～16℃培养72～144h时，得低温γ-内酰胺酶，收集到的粗酶液根据不同需要和使用对象不同，进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。本发明专利技术生产的低温γ-内酰胺酶在低温下具有高酶活力及高催化效率，可减少加工工艺，缩短加工时间，降低生产成本，提高生产效率，改善并提高产品质量；该酶制剂应用操作简单、方便、快捷、具有更广阔的工业开发价值与市场应用优势。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种微生物发酵生产低温γ‑内酰胺酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将能产生γ‑内酰胺酶菌种先活化，再逐级低温驯化，驯化温度由高到低，30℃→25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃→12℃→10℃，当菌种在低温环境中稳定生长即驯化结束；该菌种的低温驯化培养基组成为：酵母膏0.2～5.0g，N‑乙酰‑L‑苯丙氨酸1.0～10.0g，NH4Cl2.0～15.0g，Na2HPO40.1～1.0g，NaH2PO40.1～1.0g，MgSO40.05～0.5g，琼脂粉20g，自来水1.0L，pH为6.0～8.0，于103kpa，121℃高压蒸汽灭菌30min；所述的能产生γ‑内酰胺酶菌种来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，菌种编号：1.219或1.758或1.1830；(2)按常规方法将步骤(1)中低温驯化后的γ‑内酰胺酶产生菌在液体种子培养基中于10～16℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；所述的液体种子培养基：酵母膏20.0～25.0g，蛋白胨10.0～20g，NaCl 10.0～15.0g，MgSO40.05～0.5g，ZnSO4·7H2O 2.4～8.0mg，自来水1.0L，pH为6.0～8.0，于103kpa，121℃高压蒸汽灭菌30min；(3)将液体二级种子按发酵液体积的3～9％接种量接入液体产酶培养基中，在10～16℃培养72～144h时，即微生物发酵生产低温γ‑内酰胺酶结束；所述的液体产酶培养基：牛肉膏10.0～25.0g，蛋白胨2.0～20.0g，乙酰胺5.0～20g，Tween800.1～0.4g，(NH4)2SO41.0～1.5g，KH2PO41.4～2.0g，MgSO40.1～0.4g，CaCl20.2～0.3g，ZnSO4·7H2O 2.4～8.0mg，自来水1.0L，pH为5.0～8.0，于103kpa，121℃高压蒸汽灭菌30min；(4)将步骤(3)的发酵液在4000～8000rpm离心收集菌体，超声破碎，收集到的上清液即为粗酶液；(5)根据不同需要和使用对象不同，还可以将步骤(4)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓艳，王晓辉，窦少华，于爽，张庆芳，迟乃玉，张旭姣，王强，金连豆，
申请(专利权)人：大连大学，
类型：发明
国别省市：辽宁;21