一种新型速测表皮干细胞试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种新型速测表皮干细胞试剂盒。盒体内盛放有测试条、滴瓶；所述测试条为直角型测试条且在纵向和横向上设置有多个反应槽；所述滴瓶分别为10G7蛋白抗体液滴瓶、α6整合素抗体液滴瓶、显色液滴瓶。在一次鉴定免疫检测实验中，能在测定样品的同时检测阳性对照和阴性对照，避免了使用免疫层析试纸条时由于单份检测可能隐藏的假阴性和假失效的结果；本实用新型专利技术结构简单，使用方便，不需要仪器就能检测，检测灵敏度比免疫层析试纸条高出十倍以上。

【技术实现步骤摘要】

:本技术属于免疫检测
，特别涉及一种新型速测表皮干细胞试剂盒。
技术介绍
:皮肤是人体最大的器官，在抵御微生物入侵、紫外线辐射及防止水分的丢失、调节体温上起重要作用，同时也是免疫系统的组成部分之一。除了这些生物学功能外，皮肤在维持人的外貌上还起十分重要的作用。出生后各种原因所致的皮肤损伤即使愈合也会留下不同程度的损伤，目前尚缺乏有效的治疗手段。而实际上皮肤是再生能力较强的组织，皮肤外层的表皮终身不断自我更新，其基底部的干细胞持续增殖分化以取代外层终末分化细胞，从而进行组织结构的更新，外层细胞的死亡脱落与基底干细胞的分裂维持一定的平衡，这是维持正常的组织结构和细胞内环境稳定的基本要求。因此，检测鉴定表皮干细胞对了解表皮干细胞如何增殖与分化及其调控机制对于促进损伤皮肤功能与结构的完全修复意义重大。近来，有实验结合干细胞表面的α 6整合素及另一个与增殖有关的表面标志10G7，可以区分表皮干细胞与短暂分化细胞。检测发现α 6阳性而10G7阴性的细胞处于静息状态，在体外培养中具有很强的增殖潜能，证实为表皮干细胞:而α 6与10G7均阳性的细胞是短暂分化细胞，体外培养证实其增殖能力有限；α 6阴性的细胞其角蛋白KlO则呈阳性表达，说明是有丝分裂后终末分化细胞。因而可以利用α6整合素与10G7来区分干细胞、短暂分化细胞和分化的表皮细胞。目前鉴定表皮干细胞，是对多个标志蛋白分别进行检测，而且没有同时进行阳性和阴性检测，因此,鉴定准确率低、检测稈序复杂、耗时长、不适合于怏谏检测。公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
:本技术的目的在于提供一种新型速测表皮干细胞试剂盒，从而克服上述现有技术中的缺陷。为实现上述目的，本技术提供了一种新型速测表皮干细胞试剂盒，包括:测试条、滴瓶、盒体；所述盒体内盛放有测试条、滴瓶；所述测试条为直角型测试条且在纵向和横向上设置有多个反应槽；所述滴瓶分别为10G7蛋白抗体液滴瓶、α 6整合素抗体液滴瓶、显色液滴瓶。优选地，上述技术方案中，直角型测试条在纵向与横向交汇处设有经过缓冲液包被过的阴性槽，直角型测试条纵向第一个反应槽、横向第一个反应槽为经过10G7蛋白和α 6整合素的混合液包被过的阳性槽，直角型测试条纵向与横向上其余反应槽为样品测试槽。优选地，上述技术方案中，直角型测试条上的反应槽形状为圆形或方形或两者的组合。优选地，上述技术方案中，方形反应槽边长为2-10mm。优选地，上述技术方案中，方形反应槽边长为5_8mm。优选地，上述技术方案中，圆形反应槽直径为2-10mm。优选地，上述技术方案中，圆形反应槽直径为5-8_。优选地，上述技术方案中，10G7蛋白抗体液滴瓶和α 6整合素抗体液滴瓶中的10G7蛋白抗体和α 6整合素抗体都是经过氧化氢酶标记的抗体。优选地，上述技术方案中，显色液滴瓶内装有TMB显色液。与现有技术相比，本技术具有如下有益效果:在一次鉴定免疫检测实验中，能在测定样品的同时检测阳性对照和阴性对照，避免了使用免疫层析试纸条时由于单份检测可能隐藏的假阴性和假失效的结果；本技术结构简单，使用方便，不需要仪器就能检测，检测灵敏度比免疫层析试纸条高出十倍以上。【附图说明】:图1为本技术结构示意图；主要附图标记说明:1-直角型测试条、2-10G7蛋白抗体液滴瓶、3-α 6整合素抗体液滴瓶、4-显色液滴瓶、5-盒体。【具体实施方式】:下面对本技术的【具体实施方式】进行详细描述，但应当理解本技术的保护范围并不受【具体实施方式】的限制。除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。一种新型速测表皮干细胞试剂盒，包括:测试条、滴瓶、盒体；所述盒体内盛放有测试条、滴瓶；所述测试条为直角型测试条I且在纵向和横向上设置有多个反应槽；所述滴瓶分别为10G7蛋白抗体液滴瓶2、α 6整合素抗体液滴瓶3、显色液滴瓶4。实施例1Α、制备试剂盒如图1所示，选用聚苯乙烯塑料注模成直角型测试条I。所述直角型测试条I的纵横交汇处的方形反应槽(标记为Y)作为阴性槽，其边长为8mm，其相邻的纵向和横向各有3个圆形反应槽，圆形反应槽直径为8mm。在阴性槽中加入PBS缓冲液lOOul，与该阴性槽相邻的纵向第一个反应槽(标记为A)和横向的第一个反应槽(标记为G)作为阳性槽，在阳性槽中各加入10ul的10G7蛋白和α 6整合素白混合液(10G7蛋白、α 6整合素各2ug/ml)，室温静置4小时后洗槽，然后在阴性槽、阳性槽中各加入200ul含有2% BSA的PBS缓冲液(其余各反应槽不做任何处理，留作检测时固定待测细胞用)室温静置封闭2小时，然后甩干，40°C烘干后用铝箔袋真空密封，置于冰箱备用。将过氧化氢酶(HRP)标记的表皮干细胞标志物——10G7蛋白抗体和α 6整合素抗体分别用1%牛血清蛋白-PBS缓冲液释至lug/ml，无菌过滤后，再按每瓶0.5ml分别装在2ml-容量的10G7蛋白抗体液滴瓶2、α 6整合素抗体液滴瓶3里，置于冰箱备用。将TMB溶解于用50mM柠檬酸缓冲液(pH4.5)，调浓度至0.2mg/ml，再加过氧化氢至0.03% (此TMB-过氧化氢混合液即为过氧化氢酶显色液)，再按每瓶2ml分装在3ml_容量的液滴瓶里，无菌过滤后装在显色液滴瓶4里，置于冰箱备用。B、检测I)待检细胞液准备:分别取体外培养的表皮干细胞和纤维细胞用PBS调细胞密度至50万个/毫升，备用；2)待测细胞固定:取A步骤中所述的直角型测试条I 一条，分别为各反应槽作记号:阴性槽为Y，其纵向第一个为A (阳性槽)，纵向第2、3个分别为A2、A3，横向第一个为G(阳性槽)，第2、3个分别为G2、G3 ;分别在A2槽和G2槽中加入步骤I)中调配的表皮干细胞液lOOul，在A3和G3槽中加入步骤I)中调配的纤维细胞液10ul ;然后在A2、G2、A3、G3槽中分别再加入10ul的40%乙醛，室温静置2小时后，轻轻吸取上清液弃去，(此时细胞已被固定在反应槽上);然后在A2、G2、A3、G3槽中各加入200ul含有2% BSA的PBS缓冲液，室温静置封闭2小时，然后甩干，备用；3)分别在反应槽Y、G、G2、G3中各滴加3滴(约10ul)过氧化氢酶(HRP)标记的10G7蛋白抗体液，在反应槽Y、A、A2、A3中各滴加3滴(约10ul)过氧化氢酶(HRP)标记的α 6整合素抗体液；轻晃后室温下静置60分钟；4)洗涤:倒掉反应槽中液体并用过滤水冲洗反应槽5次，每次冲洗后，将反应槽倒干再用吸水纸除去反应槽内水珠；5)显色:在每个反应槽内加入3滴(约10ul)显色液，轻晃测试条并观察反应槽中颜色变化，直至阴性反应槽内有清晰的蓝颜色出现；6)结果分析:比较各反应槽(阳性对照，阴性对照和各样品)的颜色深浅程度以确定该被检样品是阳性还是阴性。本试验结果显示:阴性槽(Y)没有显色，阳性槽(Α和G)均显色，加表皮干细胞的Α2槽显色(说明含有表皮干细胞标本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型速测表皮干细胞试剂盒，其特征在于：包括，测试条、滴瓶、盒体；所述盒体内盛放有测试条、滴瓶；所述测试条为直角型测试条且在纵向和横向上设置有多个反应槽；所述滴瓶分别为10G7蛋白抗体液滴瓶、α6整合素抗体液滴瓶、显色液滴瓶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邹潮，马蕾，
申请(专利权)人：江阴康奈尔生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：江苏;32