一种蒜氨酸注射液的制备工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种蒜氨酸注射液的制备工艺，其特征在于：包含以下步骤：第一步：大蒜剥皮，洗净，蒸馏水漂洗；然后混合蒸馏水，用高速匀浆机匀浆，间隔匀浆2-3次；或大蒜剥皮，洗净，蒸馏水漂洗；然后混合蒸馏水，放于沸水浴，冷却后加入10%氢氧化钠，用高速匀浆机匀浆，匀浆2-3次；第二步：匀浆液装入透析袋，用等量蒸馏水透析；第三步：经两次以上次透析的匀浆液合并，调节pH值，离心，留取沉淀，用pH3.0的蒸馏水洗涤两次，沉淀称重，用pH7.6磷酸盐缓冲液按浓度要求溶解；第四步：检测蒜氨酸浓度；用生理盐水根据检测浓度稀释成注射液要求浓度；第五步：用0.22孔径的微孔滤膜过滤，分装；第六步：细菌、内毒素、蒜氨酸浓度检测。

【技术实现步骤摘要】
一种蒜氨酸注射液的制备工艺
本专利技术涉及以大蒜为原料，采用透析法分离提取蒜氨酸，制备蒜氨酸注射液的新工艺。
技术介绍
蒜氨酸为水溶性氨基酸类化合物，性能稳定，也称为大蒜素前体物质。在大蒜细胞遭到破坏后，激活蒜氨酸酶，分解蒜氨酸生成脂溶性有机含硫化合物，即大蒜素。目前的研究报道蒜氨酸和大蒜素都具有相同的药理作用，都是有机含硫化合物，都具有还原性和抗氧化作用，存在着必然联系。蒜氨酸与大蒜素具有相同生物学活性，具有抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、提高机体免疫力以及预防和治疗心血管疾病等多种生理功能。蒜氨酸对大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,金黄色葡萄球菌,痢疾杆菌和幽门螺旋杆菌的MIC为4.06-16.3g/ml，具有较强的杀菌作用。蒜氨酸对HL-60和H-7402两种肿瘤细胞均很敏感,对两种细胞增殖的其IC50分别为23.675g/ml和26.327g/ml。早期人们对大蒜药用成分的认识开始于大蒜素，大蒜酊为较早的大蒜制剂，是大蒜匀浆后制作的一种酊剂。药效成分为大蒜素，常用于皮肤真菌感染，也用于肠炎、菌痢等肠道细菌感染和慢性重金属中毒的治疗。长期以来，药理和基础均对大蒜素的临床应用开展了许多研究，但至今，未获满意效果。1、大蒜素对皮肤粘膜有刺激作用，静脉滴注大蒜素注射液易导致静脉炎；口服高浓度大蒜液可使消化道功能受损。2、大蒜素为脂溶性，制剂过程中必须使用有机溶剂和增容剂，产生相应的毒性。3、由于大蒜素的上述缺陷，临床使用剂量受到限制，导致大蒜素临床应用效果与实验研究结果出现显著差异。现有蒜氨酸的提取方法复杂，使用较多的化学试剂，技术要求高不易推广，成本较高，效率低，也不适合药物制剂的规模生产。至今人们还存在将蒜氨酸分解为大蒜素才具有药理作用的观念，导致有将蒜氨酸与蒜酶分层冲压制备成双层片芯口服使用的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的用大蒜直接提取蒜氨酸，生产蒜氨酸注射液，提供临床治疗蒜氨酸药理作用的相关疾病。本专利技术的技术方案是：一种蒜氨酸注射液的制备工艺，包含以下步骤：第一步：大蒜剥皮，洗净，蒸馏水漂洗；然后混合蒸馏水，用高速匀浆机匀浆，间隔匀浆2-3次；或大蒜剥皮，洗净，蒸馏水漂洗；然后混合蒸馏水，放于沸水浴，冷却后加入10%氢氧化钠，用高速匀浆机匀浆，匀浆2-3次；第二步：匀浆液装入透析袋，用等量蒸馏水透析；第三步：经两次以上次透析的匀浆液合并，调节pH值，离心，留取沉淀，用pH3.0的蒸馏水洗涤两次，沉淀称重，用pH7.6磷酸盐缓冲液按浓度要求溶解；第四步：检测蒜氨酸浓度；用生理盐水根据检测浓度稀释成注射液要求浓度；第五步：用0.22孔径的微孔滤膜过滤，分装；第六步：细菌、内毒素、蒜氨酸浓度检测。所述蒸馏水为三蒸水。本专利技术的有益效果：目前没有蒜氨酸的静脉给药临床制剂，本专利技术可以实现大剂量使用蒜氨酸的静脉途径给药，可以实现实验室体外和动物实验中显示的蒜氨酸的药理作用效果。可以实现对多重耐药性细菌、真菌、病毒感染的有效治疗。可以实现对肿瘤患者的有效无害治愈的可能。可以实现对免疫功能紊乱的正向调节治疗。可以实现对糖尿病、心血管病、高血脂、肝损伤等病的更好治疗。可以使人们的身体得到更好调节，寿命得到进一步提高。本专利技术实现了蒜氨酸的分离提取制备简单、低成本、安全、高效、高纯度、适用等因素，尽可能不使用化学试剂、有机溶剂等，避免给产品带来化学试剂的污染。本专利技术无有害化学试剂、有机溶剂污染，为纯天然植物氨基酸类物质，方法易于掌握推广和大规模生产。冷却后加入10%氢氧化钠，使PH升高避免蒜氨酸过早析出结晶，不利于透析。用1N盐酸调节PH至3.0，使带电荷的氨基酸失去电荷，易于结晶析出形成沉淀，PH的调节不能过低，应注意观察沉淀的形成情况。附图说明图1为样品紫外光吸收光谱；图2为液相色谱分析蒜氨酸标准曲线；图3为蒜氨酸色谱图。具体实施方式1.蒜氨酸分离提取第一步：大蒜剥皮，并去除带斑、伤疤、干瘪、病污的杂瓣蒜，自来水漂洗干净，蒸馏水漂洗，按大蒜:蒸馏水的比例不小于1，加500g大蒜，加入500ml蒸馏水，水少过于黏稠，在匀浆的过程中会使匀浆液温度升高。匀浆过程采用间歇匀浆；或大蒜剥皮，自来水洗净，蒸馏水漂洗，按500g大蒜，加入500ml蒸馏水后，放于沸水浴30分钟，冷却后加入10%氢氧化钠。第二步：用高速匀浆机匀浆3分钟，间隔10分钟，匀浆两次；第三步：匀浆液装入5000分子量透析袋，用等量蒸馏水透析，24小时换液，换液一次；5000分子量透析袋进行透析，使氨基酸与大分子物质成分分离，透析袋直径不宜过大，透析要彻底。第四步：合并三次透析液，用1N盐酸调节PH至3.0，静置10分钟，4000转/分钟离心20分钟，留取沉淀，使蒜氨酸与不带电荷的小分子成分分离；用PH3.0的蒸馏水洗涤两次，洗去杂质，沉淀称重，用少量PH7.6磷酸盐缓冲液按浓度要求溶解。第五步：用安捷伦1200液相色谱分析仪检测蒜氨酸浓度。第六步：用生理盐水根据检测浓度稀释成注射液要求浓度；第七步：用0.22m孔径的微孔滤膜过滤，分装即可。第八步：细菌、内毒素、蒜氨酸浓度检测。蒜氨酸分离提取：采用透析法使蒜氨酸与大分子物质分离，再根据蒜氨酸等电点沉淀，使蒜氨酸与不带电荷的小分子物质分离，用PH7.6磷酸盐缓冲液配制浓度成1g/ml蒜氨酸注射液。2.蒜氨酸鉴定2.1根据磺基水杨酸实验鉴定其氨基酸的存在。2.2双缩脲试剂验证是否是多肽或者是蛋白质。2.4再根据吸收光波长，用岛津紫外分光光度计最大吸收峰；并与蒜氨酸标准品比较分析。2.5液相色谱仪（安捷伦-1200）进行分离鉴定；并与蒜氨酸标准品比较分析。3.药代动力学实验研究按1g/kg剂量给予家兔耳缘静脉注射，于注射后0.5、1、2、4、6、8、12、24、48小时采血，色谱法检测血液中大蒜素和蒜氨酸。4.动物与细胞中毒实验研究4.1动物耐受试验家兔30只，分六组，5只/组，生理盐水对照组和各药物剂量组，药物剂量0.5、1、2、4、8/kg/次给予家兔耳缘静脉注射，一次/天，连续注射3天，从用药当天开始观察家兔的饮食、毛色、体重、体温、粪便、呼吸、脉搏等生命活动，注射静脉是否有静脉炎症，出凝血时间、血液粘度、血液常规指标的变化，连续14天(中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则要求)；解剖家兔，耳缘静脉切取标本，切片观察镜下静脉变化情况；观察家兔内脏、颅内变化。4.2肌肉刺激性试验家兔20只，分四组，5只/组，生理盐水对照组和各药物剂量组；药物剂量为0.5、1、2、4、8g/kg/次给予家兔两侧股四头肌连续注射3天，从用药当天开始连续观察5天，观察给药后不同时间注射局部肌肉反应情况，如充血、红肿、变性、坏死等。最后一次注射后48小时处死动物，解剖取出注射部位肌肉，纵向切开，观察注射部位肌肉的刺激反应，并进行局部组织病理学检查。4.3体外红细胞溶解试验家兔红细胞经生理盐水洗涤三次，用生理盐水配制成2%的细胞悬液，模仿体内条件，按下表操作，37℃孵育，1小时观察一次，观察三次即可。肉眼观察红细胞的溶解情况，如有溶解，用分光光度计检测红细胞溶解情况。4.4细胞毒性试验原代鸡胚细胞配制成浓度为3×105/ml的细胞悬液，每孔100µl接种96孔板，37℃，5%CO2培养箱中培养24h，细胞贴壁后，换1g/ml蒜氨酸注本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蒜氨酸注射液的制备工艺，其特征在于：包含以下步骤：第一步：大蒜剥皮，洗净，蒸馏水漂洗；然后混合蒸馏水，用高速匀浆机匀浆，间隔匀浆2‑3次；或大蒜剥皮，洗净，蒸馏水漂洗；然后混合蒸馏水，放于沸水浴，冷却后加入10%氢氧化钠，用高速匀浆机匀浆，匀浆2‑3次；第二步：匀浆液装入透析袋，用等量蒸馏水透析；第三步：经两次以上次透析的匀浆液合并，调节pH值，离心，留取沉淀，用pH3.0的蒸馏水洗涤两次，沉淀称重，用pH7.6磷酸盐缓冲液按浓度要求溶解；第四步：检测蒜氨酸浓度；用生理盐水根据检测浓度稀释成注射液要求浓度；第五步：用0.22孔径的微孔滤膜过滤，分装；第六步：细菌、内毒素、蒜氨酸浓度检测。

【技术特征摘要】
1.一种蒜氨酸注射液的制备工艺，其特征在于：包含以下步骤：第一步：大蒜剥皮，洗净，蒸馏水漂洗；然后混合蒸馏水，用高速匀浆机匀浆，间隔匀浆2-3次；或大蒜剥皮，洗净，蒸馏水漂洗；然后混合蒸馏水，放于沸水浴，冷却后加入10%氢氧化钠，用高速匀浆机匀浆，匀浆2-3次；第二步：匀浆液装入透析袋，用等量蒸馏水透析；第三步：经两次以上次透析的匀浆液合并...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明强，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州;52