本发明专利技术涉及一种用于雄激素受体转录后修饰位点预测的体外迷你报告基因及应用。实验表明，lncRNAPCGEM1通过调控雄激素受体异构体AR-V7(AR3)pre-mRNA的转录后修饰，直接决定了表达雄激素受体的肿瘤的激素去势治疗后去势抵抗或复发转移；在此基础上，选取AR的pre-mRNA的包含外显子Exon3和Exon4之间序列，通过基因克隆构建迷你报告基因；一方面，该迷你报告基因用于预测前列腺癌等雄激素受体相关肿瘤的激素去势复发及转移的高度危险因子；另一方面，通过该迷你报告基因，可以能够直观和高效、准确的验证和阻断该特异性目标基因位点的表达及作用。
【技术实现步骤摘要】
一种用于雄激素受体转录后修饰位点预测的体外迷你报告基因及应用
本专利技术涉及分子生物学
，具体地说，是一种用于雄激素受体转录后修饰位点预测的体外迷你报告基因及应用。
技术介绍
癌症占人类死亡病因的近1/4。在过去的几十年里肿瘤复发和转移仍是改善整体存活率的主要障碍，这可能主要归因于人们对于癌症生物学仍然缺乏全面的了解。例如，功能基因组学研究的最新进展表明，参与人类基因转录的绝大多数是非编码RNA包括长链非编码RNA(lncRNAs)。然而，对于lncRNAs在调控癌症基因表达及机制等方面人类仍然所知甚少[1]。近期我们通过对肿瘤表观遗传机制的研究发现lncRNAs可以通过多种机制调控肿瘤的进展。新近有研究表明lncRNAPCGEM1可以与雄激素受体(AR)结合作用[2]。PCGEM1在前列腺癌上调[3]，可促进细胞增殖[4]，而我们则通过临床标本研究发现，PCGEM1以及PCAT1的基因表达与前列腺癌恶性程度及转移复发呈高度相关性，PCGEM1不但可以通过与AR直接作用，更重要的是PCGEM1与AR异构体,如AR-V7(AR3)的表达呈高度正相关，我们进一步证明了PCGEM1通过选择性转录修饰调控了AR的异构体如AR3的表达。由此发现lncRNAs如PCGEM1可能通过调控AR基因转录的表观遗传机制参与AR相关肿瘤的增殖、恶性侵袭复发及转移驱动。因为在一定程度上是由于AR的异构体如AR3介导了该类肿瘤的激素去势抵抗，而并非野生型全长AR。而研究已表明AR3在AR在很大程度上诱导形成了相关肿瘤如前列腺癌的激素去势抵抗[5]。针对上述AR相关肿瘤的特异性调节lncRNAPCGEM1显著参与调控了与该类肿瘤的激素去势抵抗相关AR异构体(如AR3)的表达。本专利技术是建立在研究所表明的lncRNAPCGEM1或hnRNPA1和U2AF65参与调控的表观遗传机制的基础上，即lncRNAsPCGEM1通过调控雄激素受体异构体AR3pre-mRNA的转录后修饰及共定位，直接决定了表达雄激素受体的肿瘤如前列腺癌、肺癌及乳腺癌等的激素去势治疗后去势抵抗或复发转移。本专利技术涉及的迷你报告基因质粒主要是建立在表观遗传机制调控的基础上，如lncRNAPCGEM1通过调控雄激素受体异构体AR3pre-mRNA的转录后修饰，直接决定了表达雄激素受体的肿瘤如前列腺癌、肺癌及乳腺癌等的激素去势治疗后去势抵抗或复发转移。应用该迷你报告基因，可以验证lncRNAPCGEM1或hnRNPA1,U2AF65等转录修饰剪切因子的作用机制。上述调节因子可以通过该迷你报告基因上表现出经基因转录后修饰机制对雄激素受体(AR)异构体产生的调控作用。一方面，该迷你报告基因用于预测前列腺癌等雄激素受体相关肿瘤的激素去势复发及转移的高度危险因子；另一方面，通过该迷你报告基因，可以能够直观和高效、准确的验证和阻断该特异性目标基因位点的表达及作用。最终服务于临床雄激素受体相关肿瘤的激素去势治疗后复发及转移的靶向治疗。为临床有效靶向阻断PCGEM1所介导的雄激素受体异构体AR3，可以有效的降低雄激素受体(AR)相关肿瘤的激素去势治疗后的去势抵抗和复发转移情况。本专利技术的AR3迷你报告基因及试剂盒是基于当前最新的研究结果而建立。这是一种目前其他方法都无法替代的技术方法，迄今为止尚未见相关报道。参考文献：1.XieC,YuanJ,LiH,LiM,ZhaoG,BuD,etal.NONCODEv4:exploringtheworldoflongnon-codingRNAgenes.Nucleicacidsresearch.2013；doi:10.1093/nar/gkt1222.2.YangL,LinC,JinC,YangJC,TanasaB,LiW,etal.lncRNA-dependentmechanismsofandrogen-receptor-regulatedgeneactivationprograms.Nature.2013；29:598-602.3.SrikantanV,ZouZ,PetrovicsG,XuL,AugustusM,DavisL,etal.PCGEM1,aprostate-specificgene,isoverexpressedinprostatecancer.ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica.2000；97:12216-21.4.PetrovicsG,ZhangW,MakaremM,StreetJP,ConnellyR,SunL,etal.ElevatedexpressionofPCGEM1,aprostate-specificgenewithcellgrowth-promotingfunction,isassociatedwithhigh-riskprostatecancerpatients.Oncogene.2004；23:605-11.5.AntonarakisES,etal.AR-V7andresistancetoenzalutamideandabirateroneinprostatecancer.TheNewEnglandjournalofmedicine.2014；371,1028-1038.
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种用于雄激素受体转录后修饰位点预测的AR3迷你报告基因。本专利技术的再一的目的是，提供所述迷你报告基因的用途。本专利技术的另一的目的是，提供一种用于检测和定量细胞中的AR3表达的试剂盒。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案是：一种用于雄激素受体转录后修饰位点预测的AR3迷你报告基因，包含序列如SEQIDNO.13所示的核苷酸序列。所述AR3迷你报告基因通过下述方法克隆构建组成：a)通过PCR法，以SEQIDNO.1及SEQIDNO.3所示的序列作为引物，以人类基因组DNA为模板扩增AR的外显子exon3和部分内含子序列(长2.3kb)；b)通过PCR法，以SEQIDNO.2及SEQIDNO.5所示的序列作为引物，以人类基因组DNA为模板扩增AR的内含子加上部分外显子exon3b序列(E3b，序列长1kb)；c)以SEQIDNO.4及SEQIDNO.6所示的序列作为引物，应用PCR法扩增mCherry；d)将a)、b)和c)扩增产物通过常规方法顺序连接克隆进pCDH-Pu载体(SBI)，插入位点为EcoRI和NotI酶切位点。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：所述的AR3迷你报告基因在制备药物中的应用。所述的AR3迷你报告基因在制备治疗癌症药物中的应用。所述的癌症是实体瘤，或所述的癌症细胞来源于实体瘤。所述的癌症为前列腺癌、肺癌、乳腺癌、睾丸癌、子宫颈癌或结肠癌。为实现上述第三个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种用于检测和定量细胞中的AR3表达的试剂盒，包含：a)上述的AR3迷你报告基因；b)适合重配a)的盐水或缓冲溶液。本专利技术目的是提供一种用于雄激素受体(AR)转录后修饰位点预测的体外迷你报告基因及其应用。所述迷你报告基因用于诊断AR相关肿瘤的激素去势复发、转移及其他相关肿瘤本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于雄激素受体转录后修饰位点预测的AR3迷你报告基因，其特征在于，包含序列如SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种用于雄激素受体转录后修饰位点预测的AR3迷你报告基因质粒，其特征在于，所述AR3迷你报告基因质粒通过下述方法克隆构建：a)通过PCR法，以SEQIDNO.1及SEQIDNO.3所示的序列作为引物，以人类基因组DNA为模板扩增AR的外显子exon3和部分内含子序列；b)通过PCR法，以SEQIDNO.2及SEQIDNO.5所示的序列作为引物，以人类基因组DNA为模板扩增AR的内含子加上部分外显子exon3b序列；c)以SEQIDNO.4及...
【专利技术属性】
技术研发人员：张子强，Y·莫，邱忠民，朱竹先，吕寒静，
申请(专利权)人：上海市同济医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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