用于预防或治疗糖尿病性血管生成损伤的含C-肽的组合物制造技术

本发明专利技术涉及使用C-肽预防或治疗糖尿病性血管生成障碍或糖尿病性伤口愈合障碍的方法，以及用于该方法的组合物。根据本发明专利技术的C-肽能够通过诱导内皮细胞的趋化性迁移、促进细胞迁移至受伤区域中、促进毛细管样网络的形成和阻止NO形成的诱导及ERK1/2和Akt的磷酸化，促进诱导血管生成。因此，本发明专利技术可以广泛用于预防或治疗由糖尿病性血管生成障碍引起的各种糖尿病并发症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含C-肽的用于预防或治疗糖尿病性血管生成损伤的组合物
本专利技术涉及使用C-肽预防或治疗糖尿病相关疾病。更具体的，本专利技术涉及使用C-肽预防或治疗糖尿病性血管生成损伤的方法，使用C-肽预防或治疗糖尿病性伤口愈合损伤的方法，和包括C-肽的用于预防或治疗损伤的组合物。
技术介绍
糖尿病是一组具有多种病因的代谢性疾病，特征在于由胰岛素活性的完全或功能性缺乏引起的慢性高血糖。维持很长时间的高血糖水平会引起慢性代谢性障碍并且引起血管的损伤，并伴随各种并发症的随后发病。这些典型地在10年糖尿病之后显现，因为几乎身体所有的器官都受到了损伤。在糖尿病患者中尤其观察到不足的血管生成。血管生成是伤口愈合和治疗缺血性组织损害的关键步骤，但是在糖尿病患者中血管生成不能正常进行。相应的，需要一种糖尿病性血管生成障碍的疗法，但是迄今为止还没有报道有引人注目的成果。这些糖尿病并发症与VEGF(血管内皮生长因子)相关。已知VEGF诱导ERK1/2和Akt的磷酸化以及NO的产生，促进血管生成，并且用作血管渗漏因子以引发肌肉水肿。人类的C-肽是从胰岛素原中切下的短肽，并且以与胰岛素等摩尔的浓度被胰腺β细胞分泌到循环中。伴随胰岛素的C-肽缺乏是I型糖尿病和II型糖尿病晚期的典型特征，并且随后出现各种并发症的发病，包括受损的伤口愈合。在糖尿病中，受损的伤口愈合是严重的并发症，导致系统性感染、疼痛、溃疡和截肢，并且甚至可能是致命的。C-肽用于诊断糖尿病，但是还没有报道C-肽在治疗糖尿病性血管生成障碍中的应用的引人注目的成果。在此背景下，本专利技术人对治疗糖尿病性血管生成损伤进行了深入且彻底的研究，并且发现C-肽可以用于在糖尿病中保护生理血管生成损伤或刺激伤口愈合，从而得到了本专利技术。
技术实现思路
因此，本专利技术的一个目的是提供一种使用C-肽预防或治疗糖尿病性血管生成损伤的方法，或用于该方法的组合物。本专利技术的另一个目的是提供一种使用C-肽预防或治疗糖尿病性伤口愈合损伤的方法，或用于该方法的组合物。根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种预防或治疗糖尿病性血管生成损伤的方法，所述方法包括给予有需要的动物有效量的C-肽，也就是说，给予易于受糖尿病性血管生成损伤影响或受到糖尿病性血管生成损伤影响的动物有效量的C-肽。根据本专利技术的另一方面，本专利技术提供了一种预防或治疗糖尿病性血管生成损伤的药物组合物，该药物组合物包括作为活性成分的C-肽。根据本专利技术的又一方面，本专利技术提供了一种预防或治疗糖尿病性伤口愈合损伤的方法，所述方法包括给予有需要的动物有效量的C-肽，也就是说，给予易于受糖尿病性伤口愈合损伤影响或受到糖尿病性伤口愈合损伤影响的动物有效量的C-肽。根据本专利技术的再一方面，本专利技术提供了预防或治疗糖尿病性伤口愈合损伤的药物组合物，该药物组合物包括作为活性成分的C-肽。根据本专利技术的被发现能够诱导血管生成的包括C肽的药物组合物在治疗需要血管生成的广谱的症状中，诸如糖尿病性伤口愈合损伤，以及包括糖尿病性血管生成损伤的各种糖尿病并发症中，都具有预防或治疗应用。附图说明图1提供了如通过转板迁移测定法(A、B)和通过伤口愈合测定法(C、D)分析，示出C-肽在HUVEC中诱导细胞迁移和伤口愈合的图像和曲线图。HUVEC被接种在可渗透支撑物的上孔上，并且在下孔中存在10ng/mlVEGF或有预定浓度的C-肽(C-Pep)的情况下，孵育12h：图1A示出在过滤器的下表面上的迁移的细胞的图像；图1B是柱状图，其中通过对迁移细胞进行计数量化了趋化性迁移(n＝3)；图1C示出了融合的细胞层的共聚焦显微图像，该融合的细胞层是受伤的并且与10ng/mlVEGF或0.5nMC-肽孵育24h；以及图1D是柱状图，其中通过对迁移至刮擦区的细胞进行计数量化了细胞迁移(n＝3)，并且结果表示为三次独立实验的平均值±S.D.。*p<0.05，**p<0.01。CON，对照。图2提供了根据剂量依赖性的小管形成(A、B)、小管形成(C)和体内基质胶塞测定(D)，示出C-肽在体外和体内诱导血管生成的图像和曲线图。将HUVEC在具有示出浓度的C-肽(C-Pep)的基质胶层上培养24h(n＝3)(A,B)：图2A示出小管形成的共聚焦显微图像；图2B是曲线图，其中通过测量来自图2A中的图像的小管长度确定相对小管长度(％)，以检验C-肽诱导的、剂量依赖性的小管形成；图2C是示出通过10ng/mlVEGF或0.5ng/mlC-肽诱导的小管形成的柱状图；以及图2D示出在进行体内基质胶塞测定之后的基质胶的图片，在该体内基质胶塞测定中，小鼠经含100ng/mlVEGF或5nMC-肽的0.5ml基质胶皮下感染7d(n＝8/组)。图3提供了示出C-肽在HUVEC中诱导ERK1/2和Akt磷酸化以及NO产生的图像和柱状图。图3A和3B示出在使用10ng/mlVEGF或0.5nMC-肽处理HUVEC预定时间之后的结果：图3A示出ERK1/2磷酸化的蛋白印记分析的结果，其中，使用蛋白的总量对蛋白磷酸化的水平进行标准化，并且相对于未经刺激的对照水平(CON)进行表示；图3B示出Akt磷酸化的蛋白印记分析的结果，其中，使用蛋白的总量对蛋白磷酸化的水平进行标准化，并且相对于未经刺激的对照水平(CON)进行表示；以及图3C示出在使用10ng/mlVEGF或0.5nMC-肽处理HUVEC2h之后获得的结果，以及使用本领域已知的方法通过共聚焦显微检查确定的细胞内NO的水平。结果表示为来自三次独立实验的平均值±S.D.。*p<0.05，**p<0.01。图4提供了示出各种抑制剂防止由C-肽和VEGF诱导的小管形成的柱状图：图4A是在将HUVEC接种在基质胶层上，并且在所示浓度的L-NAME、PD98058和渥曼青霉素的存在下与0.5nMC-肽(C-pep)孵育24至30h之后，通过共聚焦显微检查量化的小管形成的柱状图，并且结果表示为来自三次独立实验的平均值±S.D.；图4B是在将HUVEC接种在基质胶层上，并且在所示浓度的L-NAME、PD98058和渥曼青霉素的存在下与10ng/mlVEGF孵育24至30h之后，通过共聚焦显微检查量化的小管形成的柱状图，并且结果表示为来自三次独立实验的平均值±S.D.。图5提供了示出C-肽修复糖尿病受损的伤口愈合的柱状图：图5A是在皮肤受损之后4d和12d，在健康小鼠(健康；n＝12/组)、糖尿病小鼠(糖尿病；n＝12/组)和给予C-肽的糖尿病小鼠(糖尿病+C-pep；n＝12/组)的伤口愈合之间进行对比的柱状图。**,p<0.01,N.S.没有显著性差异，以及图5B是使用数码照相观察4mm直径的皮肤伤口愈合之后的柱状图。图6提供了通过转板迁移测定法(A、B)和通过伤口愈合测定法(C、D)进行测量，示出C-肽在NIH3T3细胞中诱导细胞迁移和VEGF表达的图像和曲线图。在图6A和图6B中，将NIH3T3细胞接种在可渗透支撑物的上孔上，并且在下孔中存在1ng/mlFGF-2或者所示浓度的C-肽(C-Pep)的情况下孵育12h：图6A示出在过滤器的下表面上的迁移细胞的图像；图6B是通过对迁移细胞进行计数量化了趋化性迁移(n＝3)的柱状图；图6C示出了融合的细胞层的共聚焦显微图像，该融合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预防或治疗糖尿病性血管生成损伤的组合物，所述组合物包括C‑肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.08.06 US 61/680,1841.包括C-肽的组合物在制造预防或治疗糖尿病性血管生成损伤的药剂中的应用，其中所述糖尿病性血管生成损伤是足部溃疡，其中所述C-肽具有选自由SEQIDNO:1至SEQIDNO:...

【专利技术属性】
技术研发人员：河权秀，林永哲，
申请(专利权)人：江原大学校产学协力团，阿莫绿色技术有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR