C反应蛋白快速检测方法及检测试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种C反应蛋白快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：将内部带有染料的纳米级的感光微球、包被有活性分子的发光微球以及已标记生物素的活性分子以及待测样本混合，得到混合物；步骤(2)：对所述的混合物进行温育培养，具有免疫特性的各组分反应得到结合物；步骤(3)：采用激发光对所述的结合物进行照射后，所述的结合物发光，使用光子计数器进行测定，得到检测数值。本发明专利技术还提供了一种C反应蛋白快速检测试剂盒。采用本发明专利技术的C反应蛋白快速检测方法及检测试剂盒，检测结果稳定，准确率高、成本低，灵敏度高，精密性好，检测范围宽、适用临床推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外诊断
，特别涉及免疫测定，具体是指一种C反应蛋白快速检测方法及检测试剂盒。
技术介绍
人类C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)是指在机体受到感染或组织损伤时血浆中一些急剧上升的蛋白质(急性蛋白)。CRP可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，从而清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞，在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。关于CRP的研究已经有70多年的历史，传统观点认为CRP是一种非特异的炎症标志物，但近十年的研究揭示了CRP直接参与了炎症与动脉粥样硬化等心血管疾病，并且是心血管疾病最强有力的预示因子与危险因子。CRP在临床应用领域较为广泛。其在医学上的价值正得到广泛验正和承认。现将其临床意义综述如下：1、CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高，并有成倍增长之势。病变好转时，又迅速降至正常，其升高幅度与感染的程度呈正相关。2、CRP与其它炎症因子的相关性：CRP与其它炎症因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有密切相关性。CRP与WBC存在正相关。在炎症反应中起着积极作用，使人体具有非特异性抵抗力。在患者疾病发作时，CRP可早于WBC而上升，回复正常也很快。故具有极高的敏感性。3、CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断：一旦发生炎症，CRP水平即升高，而病>毒性感染CRP大都正常。脓毒血症CRP迅速升高，而依赖血培养则至少需要48小时，且其阳性率不高。4、恶性肿瘤患者CRP大都升高。如CRP与AFP的联合检测，可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊断。CRP测定用于肿瘤的治疗和预后有积极意义。手术前CRP上升，手术后则下降，且其反应不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响，有助于临床估价肿瘤的进程。5、CRP用于评估急性胰腺炎的严重程度。当CRP高于250㎎╱L时，则可提示为广泛坏死性胰腺炎。正常参考值：<10㎎╱L6、可用于区分细菌还是病毒感染，10-15提示病毒感染，15以上提示细菌感染。CRP的检测在八十年代以前作为炎症和组织损伤的非特异性标志物大量应用于临床。但由于过去CRP的检测方法较为落后，假阳性和假阴性很高，影响了它在临床上的价值，近几年来，由于检测技术的更新，测定CRP的快速、简便和可靠的方法已迅速建立。CRP的检测方法市面上常见为免疫透射比浊法，近些年已有部分厂商引入了部分更为先进的检测方法，现有的方法存在着检测灵敏度低、精密性差等局限性。所以需要提供一种新的CRP检测方法，以解决现有技术中的存在的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服上述现有技术中的缺点，提供一种检测结果稳定，准确率高、成本低，灵敏度高，精密性好，检测范围宽、适用临床推广的C反应蛋白快速检测方法及检测试剂盒。为了实现上述目的，本专利技术第一方面提供了一种C反应蛋白快速检测方法，其特点在于，包括以下步骤：步骤(1)：将内部带有染料的纳米级的感光微球、包被有活性分子的发光微球以及已标记生物素的活性分子以及待测样本混合，得到混合物；步骤(2)：对所述的混合物进行温育培养，具有免疫特性的各组分反应得到结合物；步骤(3)：采用激发光对所述的结合物进行照射后，所述的结合物发光，使用光子计数器进行测定，得到检测数值。较佳地，所述的活性分子为CRP抗体。较佳地，所述的感光微球为填充了光敏氰基化合物的醛基感光微球。较佳地，所述的发光微球为填充了稀土螯合物的醛基发光微球。本专利技术第二方面提供了一种C反应蛋白快速检测的试剂盒，包括连接了活性分子发光微球的第一试剂、主要成份为已标记生物素活性分子的第二试剂以及主要成份为感光微球的第三试剂。采用本专利技术的C反应蛋白快速检测方法及检测试剂盒，在均相条件下，将内部带有染料的感光微球(纳米级)、标记生物素的活性分子以及包被有活性分子并且内部带有发光化合物的发光微球(纳米级)的混合物作为试剂和检测样品混合。此时纳米感光微球与标记生物素的活性分子形成连接物再和包被有活性分子的纳米发光微球可迅速有效地捕捉待测样本中的靶分子，在近距离内，三者形成免疫夹心复合物。激发光照射后，纳米感光微球中的染料(光敏氰基化合物)被诱导激活，并释放高能态的活性氧离子(单线态氧)。该高能态的活性氧离子被近距离的纳米发光微球俘获，从而传递能量以激活所述发光微球中的发光化合物(稀土螯合物)。数微秒后，发光微球中的发光化合物将释放出高能级红光。用光子计数器测定这些高能级光子，并通过电脑将光子数换算为目标分子浓度，光子数的多少即精确地反映了目标分子的浓度。而当样本不含靶分子时，无法在近距离形成免疫夹心复合物，活性氧离子也无法传递至发光微球表面。活性氧离子在液相中迅速衰减，检测时则无光能级红光产生。其采用全液相的反应模式，液态均相的模式使各测试间的一致性更好，使产品具有更好的重复性与一致性。且免冲洗，避免反应中引入不必要的干扰物及其它不确定因素，使得检测结果更为稳定。可以快速诊断领域引入独特的化学发光技术，使整体检测性能更优。附图说明图1为本专利技术CRP检测方法微球结合形成二聚体的原理图。图2为本专利技术CRP检测方法微球微粒未结合时的原理图。图3为本专利技术单线态氧随微粒距离衰减时的曲线图。图4为本专利技术实施例的的检测结果与进口CRP试剂盒检测结果的平行比较图。具体实施方式为了能够更清楚地理解本专利技术的
技术实现思路
，下面对本专利技术的具体实施方法作进一步说明。在下述实施例中使用的原料、试剂、仪器来源如下：NaHCO3溶液的配方：原料名称标准用量(1L)碳酸氢钠8.410g纯化水定容至1000mlCB(pH9.6)缓冲液(0.05M)原料名称标准用量(1L)碳酸钠1.540g碳酸氢钠2.940g纯化水定容至1000mlTris缓冲液的配方：MES缓冲液的配方：试剂名称标准用量(1L)MES10.660gNaCl2.922g纯化水定容至1000ml发光微粒缓冲液配方：试剂名称标准用量(1L)碳酸钠1.540g碳酸氢钠2.940gNaCl17.532gBSA2.000gDextran1.000gTritronX-405...

【技术保护点】
一种C反应蛋白快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：将内部带有染料的纳米级的感光微球、包被有活性分子的发光微球以及已标记生物素的活性分子以及待测样本混合，得到混合物；步骤(2)：对所述的混合物进行温育培养，具有免疫特性的各组分反应得到结合物；步骤(3)：采用激发光对所述的结合物进行照射后，所述的结合物发光，使用光子计数器进行测定，得到检测数值。

【技术特征摘要】
1.一种C反应蛋白快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤(1)：将内部带有染料的纳米级的感光微球、包被有活性分子的发光微球以及已标
记生物素的活性分子以及待测样本混合，得到混合物；
步骤(2)：对所述的混合物进行温育培养，具有免疫特性的各组分反应得到结合物；
步骤(3)：采用激发光对所述的结合物进行照射后，所述的结合物发光，使用光子计数
器进行测定，得到检测数值。
2.根据权利1所述的反应蛋白快速检测方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：张伟，卫君超，葛望舒，郑东，
申请(专利权)人：上海丰汇医学科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31