本发明专利技术公开了一株新菌株‑‑紫红曲霉(Monascus purpureus)浙工红曲1号及其在制备1‑脱氧野尻霉素中的应用，紫红曲霉(Monascus purpureus)浙工红曲1号，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年7月18日，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No.9553；本发明专利技术紫红曲霉浙工红曲1号经发酵培养，可获取含有1‑脱氧野尻霉素的培养物，1‑脱氧野尻霉素具有α‑葡萄糖苷酶抑制活性；该菌株及其发酵获取含有1‑脱氧野尻霉素培养物的方法具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
紫红曲霉及其在制备1-脱氧野尻霉素中的应用(一)
本专利技术涉及一株新菌株，特别涉及一株能够生产1-脱氧野尻霉素的红曲霉及应用，利用能够产生1-脱氧野尻霉素的紫红曲霉(Monascuspurpureus)以大米等粮食原料进行发酵。(二)
技术介绍
红曲是红曲霉在大米等粮食上的发酵产物，在中国有千余年的应用历史。红曲的应用范围包括食品的酿造、着色和保藏，以及中药等领域。按照国家相关标准(GB2760，GB4926)，红曲可作为食品添加剂；按照卫生部发布的《真菌类保健食品评审规定》(卫法监发〔2001〕84号)，红曲霉(Monacusanka)和紫红曲霉(Monascuspurpureus)属于可用于保健食品的真菌菌种；《中华人民共和国药典》也将红曲收录为中药材。目前，利用红曲霉能够产生胆固醇生物合成抑制剂—莫拉可林(monacolin)，已成功开发出以红曲为主要成分的降脂中药和保健品。进一步研发具有其它功效的新型红曲产品，对红曲产业的发展有积极的促进作用。糖尿病是以高血糖为特征的代谢性疾病，据《美国医学会杂志》(TheJournaloftheAmericanMedicalAssociation)报道：2013年全世界大约有3.82亿糖尿病患者，糖尿病已成为全球第四大导致死亡的疾病，开发廉价、有效的预防或改善糖尿病的功能性食品具有重要意义。α-葡萄糖苷酶抑制剂能竞争性抑制小肠内的各种α-葡萄糖苷酶，减缓淀粉分解为葡萄糖的速度，从而减慢肠道对葡萄糖的吸收，降低餐后的高血糖。天然的α-葡萄糖苷酶抑制剂存在于动物、植物和微生物中，从微生物中筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂来源菌，具有广阔的工业化应用前景。目前，已发现某些放线菌和芽孢杆菌产生的1-脱氧野尻霉素具有较好的α-葡萄糖苷酶抑制作用。按照常规方法制备的红曲，由于红曲霉产生和分泌多种胞外水解酶(包括多种淀粉酶)，所以常用作酿造糖化剂(酒曲)，促进发酵原料中淀粉的分解；或者作为中药材，与其它药材配伍，促进食物的消化和吸收，如《本草纲目》所记载的“红曲主治消食活血，健脾燥胃”。这说明常规红曲具有促进淀粉等碳水化合物分解的催化活性，一般不具有α-葡萄糖苷酶抑制活性。虽然有研究指出，红曲在降低血脂的同时，对血糖有一定的改善作用，但是其有效成分尚不清楚，作用机制也不明确。同时，目前没有红曲霉能够产生1-脱氧野尻霉素，以及在红曲产品中发现含有1-脱氧野尻霉素的报道。(三)
技术实现思路
本专利技术目的是提供一株新菌株--紫红曲霉(Monascuspurpureus)浙工1号及其制备1-脱氧野尻霉素的应用。本专利技术采用的技术方案是：本专利技术涉及一株新菌株--紫红曲霉(Monascuspurpureus)浙工红曲1号，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年7月18日，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCCNo.9553。本专利技术还涉及一种所述紫红曲霉浙工红曲1号在制备1-脱氧野尻霉素中的应用，具体所述的应用以紫红曲霉浙工红曲1号经液体培养基或固体培养基培养获得的培养物作为菌种，接种至发酵培养基，在温度25～40℃、湿度60％～90％的条件下进行固态发酵，发酵完成后，获得含1-脱氧野尻霉素的发酵产物(即为含1-脱氧野尻霉素的红曲)，将发酵产物分离纯化，获得1-脱氧野尻霉素；所述发酵培养基由食用粮食、葡萄糖、蛋白胨和自来水组成，所述食用粮食与葡萄糖、蛋白胨和自来水的质量比为1:0.01～0.1:0.015～0.15:0.2～0.8(优选1:0.03:0.01:0.3)；所述液体培养基质量终浓度组成为：70～120目大米粉或可溶性淀粉1％～4％，葡萄糖或蔗糖0.5％～3％，蛋白胨0.3％～3％，NaNO30.1％～0.5％，KH2PO40.1％～0.5％，溶剂为自来水，pH值自然；优选液体培养基质量终浓度组成为：100目大米粉2％，葡萄糖2％，蛋白胨0.8％，NaNO30.2％，KH2PO40.15％，溶剂为自来水，pH值自然。所述固体培养基由大米、葡萄糖、蛋白胨和自来水构成，所述大米与葡萄糖、蛋白胨和自来水的质量比为1:0.01:0.005:0.3。进一步，所述食用粮食为籼米、粳米、糯米、红米、黑米、小米、黄豆、大麦或玉米。进一步，所述固体菌种与食用粮食质量比为0.005～0.05:1(优选0.01:1)，所述液体菌种体积用量以食用粮食质量计为0.1～0.3mL/g(优选0.1mL/g)。进一步，所述紫红曲霉浙工红曲1号以106～107cfu/mL孢子悬液的形式接种至液体培养基或固体培养基培养获得的培养物作为菌种，所述孢子悬液是将紫红曲霉浙工红曲1号接种在EMA培养基上，32℃培养7天，用无菌水洗下孢子，将孢子用无菌水调整浓度为106～107cfu/mL；每升麦芽提取粉琼脂培养基(MEA)：麦芽提取粉20g，蛋白胨1.0g，葡萄糖20g，琼脂15g，加蒸馏水至1L。进一步，所述菌种的制备方法为下列之一：(1)将106～107cfu/mL紫红曲霉浙工红曲1号孢子悬液以体积浓度10％(v/v)的接种量接种至液体培养基，在32℃培养2天，取培养物作为液体菌种；所述液体培养基质量终浓度组成为：100目大米粉2％，葡萄糖2％，蛋白胨0.8％，NaNO30.2％，KH2PO40.15％，溶剂为自来水，pH值自然；(2)将106～107cfu/mL紫红曲霉浙工红曲1号孢子悬液接种至固体培养基，在温度为30℃，湿度为80％的条件下培养10天，将培养物作为固体菌种；所述孢子悬液体积用量以固体培养基质量计为0.1mL/g；所述固体培养基组由大米、葡萄糖、蛋白胨和自来水组成，所述大米与葡萄糖、蛋白胨和自来水质量比为1:0.01:0.005:0.3。进一步，所述发酵产物分离纯化方法为：将含1-脱氧野尻霉素的发酵产物在55℃真空烘干，磨成80目粉，分别以5倍(v/w)的体积浓度70％乙醇水溶液在25℃浸提3次，每次提取24h，提取液合并、过滤，滤液真空浓缩至膏状，获得浓缩物a；将浓缩物a进行硅胶柱层析，依次用乙酸乙酯、无水乙醇、蒸馏水进行洗脱，收集蒸馏水洗脱的组分，真空浓缩至干，获得浓缩物b；将浓缩物b再通过中性氧化铝柱层析，先用正己烷，再用乙酸乙酯∶石油醚(1:1，v/v)洗脱，收集乙酸乙酯∶石油醚的洗脱液，真空浓缩至干，获得浓缩物c；将浓缩物c利用制备型TLC层析，以正丙醇∶醋酸∶水(8:2:1，v/v)为展开剂，利用氯-联甲苯胺显色，回收与标准品相符的显色处硅胶，用体积浓度50％乙醇水溶液溶解后浓缩干燥即得到1-脱氧野尻霉素，该方法的得率约为46％。所述浓缩物a，浓缩物b和浓缩物c均为浓缩物，为了便于区分不同步骤获得的浓缩物而命名，字母本身没有含义。与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要体现在：本专利技术提供一株新菌株--紫红曲霉浙工红曲1号，经发酵培养，可获取含有1-脱氧野尻霉素的培养物，1-脱氧野尻霉素具有α-葡萄糖苷酶抑制活性；该菌株及其发酵获取含有1-脱氧野尻霉素培养物的方法具有广阔的应用前景。(四)附图说明图1为紫红曲霉浙工红曲1号发酵产品分离纯化得到的1-脱氧野尻霉素的质谱图。图2为基于ITS所构建的系统发育树。图3为1-脱氧野尻霉素标准品及紫红本文档来自技高网...
【技术保护点】
紫红曲霉(Monascus purpureus)浙工红曲1号，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年7月18日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC No.9553。
【技术特征摘要】
1.紫红曲霉(Monascuspurpureus)浙工红曲1号，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2014年7月18日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCCNo.9553。2.一种权利要求1所述紫红曲霉浙工红曲1号在制备1-脱氧野尻霉素中的应用。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用以紫红曲霉浙工红曲1号经液体培养基或固体培养基培养获得的培养物作为菌种，接种至发酵培养基，在温度25～40℃、湿度60％～90％的条件下进行固态发酵，发酵完成后，获得含1-脱氧野尻霉素的发酵产物，将发酵产物分离纯化，获得1-脱氧野尻霉素；所述发酵培养基由食用粮食、葡萄糖、蛋白胨和自来水组成，所述食用粮食与葡萄糖、蛋白胨和自来水的质量比为1:0.01～0.1:0.015～0.15:0.2～0.8；所述液体培养基质量终浓度组成为：70～120目大米粉或可溶性淀粉1％～4％，葡萄糖或蔗糖0.5％～3％，蛋白胨0.3％～3％，NaNO30.1％～0.5％，KH2PO40.1％～0.5％，溶剂为自来水，pH值自然；所述固体培养基由大米、葡萄糖、蛋白胨和自来水构成，所述大米与葡萄糖、蛋白胨和自来水的质量比为1:0.01:0.005:0.3。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述食用粮食为籼米、粳米、糯米、红米、黑米、小米、黄豆、大麦或玉米。5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述固体菌种与食用粮食质量比为0.005～0.05：1，所述液体菌种体积用量以食用粮食质量计为0.1～0.3mL/g。6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述紫红曲霉浙工红曲1号以106～107cfu/mL孢子悬液的形式接种至液体培养基或固体培养基培养获得的培养物作为菌种；所述孢...
【专利技术属性】
技术研发人员：嘉晓勤，顾澄琛，徐宏，安然，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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