一种银杏达莫注射制剂的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种银杏达莫注射制剂的检测方法，该方法包括银杏达莫注射制剂的指纹图谱测试和含量测定内容；其中指纹图谱测试是对银杏叶提取物中黄酮类和萜类内酯的指纹图谱测试；含量测定是对银杏叶提取物中黄酮类和萜类内酯的测定；与现有技术相比，本发明专利技术检测方法对银杏达莫注射制剂产品的质量控制和有效成分单体的鉴别和含量测定更为有效，方法精密度、稳定性和重复性均非常良好，是对该品种治疗效果的又一上佳保证。

【技术实现步骤摘要】
一种银杏达莫注射制剂的检测方法
：本专利技术涉及一种银杏达莫注射制剂的检测方法，属于药物
技术背景：心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、高血压、脑梗塞等均是当今世界上最常见和危害最大的疾病之一，也是危害我国人民健康的常见病、多发病，已成为人口死亡的主要原因之一；据报告，近年来的发病率有逐年增高趋势，而且中、青年患者不断增加。银杏达莫注射液是由银杏叶提取物与双嘧达莫制作而成的，收载于化学药品地方标准上升国家标准（第一册），标准号：WS-10001-(HD-0087)-2002。该产品能抗血小板聚集，属于冠状动脉扩张药，适用于预防和治疗冠心病、血栓栓塞性疾病，其中银杏叶提取物中含有黄酮类、萜类、酚类、生物碱等活性成分，能起到改善心肌和脑组织代谢、增加冠状动脉及脑血管血流，改善心肌和脑组织等血供的作用，对于治疗心脑血管疾病如冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、老年性痴呆等有较好的疗效，同时可以提高机体免疫力，抵抗疾病发生。但是药物制剂必须要在保证产品质量稳定可控安全的基础之上，才能不短的更新发展。文献“双定性双定量相似度法评价银杏达莫注射液的高效液相色谱指纹图谱”（孙国祥等，色谱第25卷第4期，2007年7月）一文中公开了以双定性相似度S和S、双定量相似度C和P评价银杏达莫注射液的HPLC指纹图谱，以山奈酚、芦丁、槲皮素、异鼠李素、银杏内酯A、B和C为对照品，其中色谱条件为CenturySILC18BDS柱，流动相A：水（含1%醋酸）；B：乙腈（含1%醋酸）。梯度洗脱，顺序为0-20min，0%-15%B；20-35min，15%-22%B；35-45min，22%-26%B；45-55min，26%-32%B；55-70min，32%-55%B；70-80min，55%-62%B。流速1.0mL/min，检测波长265nm，柱温30.0±0.15℃，洗脱时间80min。该检测方法虽然能较好地控制银杏达莫注射液的质量，但分析评价方法复杂，且对产品的其他具体有效成分如白果内酯等的分离、评价等还不完全。文献“银杏达莫注射液指纹图谱研究”（宋劲燕，科技情报开发与经济第18卷第6期，2008年7月）一文中公开了对银杏叶提取物和注射剂的指纹图谱研究，以芦丁为对照品，其中色谱条件为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A：乙腈；B：0.4%磷酸溶液（用三乙胺调节pH至2.5）。梯度洗脱，顺序为0-30min，85%-83%B；30-40min，83%-80%B；40-60min，80%-75%B；60-80min，75%-85%B。流速1.0mL/min，检测波长360nm，柱温40.0℃，洗脱时间80min。该方法仅以芦丁作为对照，对银杏叶提取物中的槲皮素等黄酮类和银杏内酯A等萜类内酯不能很好的标定和指正，也无法评价其有效成分的含量。为了更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，更好的指导生产，使工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地，需要不断研究和摸索出更有利于产品质量检测、明确具体有效成分种类和含量的方法。
技术实现思路
：本专利技术的目的是提供一种银杏达莫注射制剂的检测方法，这种方法针对如下产品向相关的生产、检测机构提供检测的指标、检测的手段、技术方法等，以便更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导生产，使生产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地，所针对的产品为：由银杏叶提取物20-100重量份、双嘧达莫2-10重量份组合制备而成的注射剂，包括直接用于注射给药的注射液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液、直接供静脉滴注的葡萄糖静脉输液和氯化钠静脉输液以及用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物。例如，所述的产品可以是市售的银杏达莫注射液，规格为5ml、10ml，由贵州益佰制药、山西普德药业、通化谷红制药等3家公司生产；也可以是专利CN200510200678.5，名称为：“银杏达莫冻干制剂及其制备方法”提供的制备方法制备的冻干剂型，也可以是专利CN200810068921.6，名称为：“银杏叶提取物与双嘧达莫的组合物制剂及其制备方法”提供的制备方法制备的注射制剂。本专利技术是这样构成的：银杏达莫注射制剂的检测方法，包括以下内容：银杏达莫注射制剂的指纹图谱测试，包括以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以银杏叶提取物萜类内酯成分特征为主的指纹图谱；银杏达莫注射制剂的含量测定，包括以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的含量测定，具体表现为槲皮素、山奈素、异鼠李素的含量；和以银杏叶提取物萜类内酯成分特征为主的含量测定，具体表现为银杏内酯A、B、C和白果内酯的含量。其中，指纹图谱检测方法包括如下内容：a、采用高效液相色谱法测试以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱：（1）供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，注射液挥干水分，冻干粉直接置于甲醇-25%盐酸溶液的混合液中，加热回流后放冷，过滤后，取续滤液作为供试品溶液；（2）对照品溶液的制备：取适量银杏叶药材中的主要活性成分对照品，包括芦丁、山奈酚芸香糖苷、异鼠李素芸香糖苷、山奈素、槲皮素、异鼠李素，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；（3）色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％～2％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.9～1.0ml/min、检测波长为254～360nm、柱温为30-40℃，记录时间为80-90min；（4）标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有15～30个；（5）以（1）～（3）所述方法作为待测银杏达莫注射制剂中以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；（6）将待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分或全部：I.计算待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；II.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；III.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中有5％～50％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于±50％；b、采用高效液相色谱法测试以银杏叶提取物萜类内酯成分特征为主的指纹图谱：（1）供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，冻干粉加水溶解，注射液直接加1%～4%盐酸溶液，用乙酸乙酯萃取3-4次，分取乙酸乙酯液，用1%～10%醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯洗涤，分取乙酸乙酯洗液，用水洗涤1-2次，分取水洗液，用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣加甲醇使溶解,摇匀，作为供试品溶液；（2）对照品溶液的制备：取银杏内酯A,B,C及白果内酯适量，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；（3）色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为甲醇，流动相B为四氢呋喃：水=5-15:80-70的溶液，梯度洗脱，流速为0.7本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种银杏达莫注射制剂的检测方法，所述制剂由银杏叶提取物20‑100重量份、双嘧达莫2‑10重量份组合制备而成的注射剂，其特征在于：该方法包括以下内容：银杏达莫注射制剂的指纹图谱测试，包括以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱和以银杏叶提取物萜类内酯成分特征为主的指纹图谱；银杏达莫注射制剂的含量测定，包括以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的含量测定，具体表现为槲皮素、山奈素、异鼠李素的含量；和以银杏叶提取物萜类内酯成分特征为主的含量测定，具体表现为银杏内酯A、B、C和白果内酯的含量。

【技术特征摘要】
1.一种银杏达莫注射制剂的检测方法，该方法包括以下内容：以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱测试和以银杏叶提取物萜类内酯成分特征为主的指纹图谱测试以及以银杏叶提取物黄酮类成分槲皮素、山奈素、异鼠李素为主的含量测定和以银杏叶提取物萜类内酯成分银杏内酯A、B、C和白果内酯为主的含量测定；其特征在于：指纹图谱测定具体的检测步骤为：a、采用高液相色谱法测试以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱：(1)供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，注射液挥干水分，冻干粉直接置于甲醇-25％盐酸溶液的混合液中，加热回流后放冷，过滤后，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取适量银杏叶药材中的主要活性成分对照品，包括芦丁、山奈酚芸香糖苷、异鼠李素芸香糖苷、山奈素、槲皮素、异鼠李素，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％～2％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.9～1.1ml/min、检测波长为254～360nm、柱温为30-40℃，记录时间为80-90min；(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有15～30个；(5)以(1)～(3)所述方法作为待测银杏达莫注射制剂中以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(6)将待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求的部分或全部：I.计算待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；II.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；III.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中有5％～50％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于±50％；b、采用高效液相色谱法测试以银杏叶提取物萜类内酯成分特征为主的指纹图谱：(1)供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，冻干粉加水溶解，注射液直接加1％～4％盐酸溶液，用乙酸乙酯萃取3-4次，分取乙酸乙酯液，用1％～10％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯洗涤，分取乙酸乙酯洗液，用水洗涤1-2次，分取水洗液，用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣加甲醇使溶解,摇匀，作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取银杏内酯A,B,C及白果内酯适量，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为甲醇，流动相B为四氢呋喃：水＝5-15:80-70的溶液，梯度洗脱，流速为0.7～0.9ml/min，蒸发光散射检测器检测，柱温在25～35℃范围内，记录时间为60-70min；(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以银杏叶提取物萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；(5)以(1)～(3)所述方法作为待测银杏达莫注射制剂中以银杏叶提取物萜类内酯类成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；(6)将待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下列要求中的部分或全部：I.计算待测银杏达莫注射制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～1.00；II.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；III.待测银杏达莫注射制剂指纹图谱中有30％～80％的共有峰面积的比值与标准指纹图谱中各共有峰面积的比值比较，其差值不得大于±50％；含量测定具体的检测步骤为：a、采用高效液相色谱法测定银杏达莫注射制剂中黄酮类有效成分的含量：(1)供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，注射液挥干水分，冻干粉直接置于甲醇-25％盐酸溶液的混合液中，加热回流后放冷，过滤后，取续滤液作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取适量银杏叶药材中的主要活性成分对照品，包括芦丁、山奈酚芸香糖苷、异鼠李素芸香糖苷、山奈素、槲皮素、异鼠李素，用水或甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为乙腈，流动相B为0.1％～2％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.9～1.1ml/min、检测波长为254～360nm、柱温为30-40℃，记录时间为80-90min；(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，进行测定；(5)检测结果：本品每10ml银杏达莫注射液或每瓶注射用银杏达莫中槲皮素含量不得低于0.099mg，山奈素含量不得低于0.166mg，异鼠李素含量不得低于0.044mg；b、采用高效液相色谱法测定银杏达莫注射制剂中萜类内酯有效成分的含量：(1)供试品溶液的制备：取待测银杏达莫注射制剂适量，冻干粉加水溶解，注射液直接加1％～4％盐酸溶液，用乙酸乙酯萃取3-4次，分取乙酸乙酯液，用1％～10％醋酸钠溶液洗涤，分取醋酸钠液，再用乙酸乙酯洗涤，分取乙酸乙酯洗液，用水洗涤1-2次，分取水洗液，用乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯液，回收乙酸乙酯至干，残渣加甲醇使溶解,摇匀，作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取银杏内酯A,B,C及白果内酯适量，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓度，作为对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相A为甲醇，流动相B为四氢呋喃：水＝5-15:80-70的溶液，梯度洗脱，流速为0.7～0.9ml/min，蒸发光散射检测器检测，柱温在25～35℃范围内，记录时间为60-70min；(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，进行测定；(5)检测结果：本品每10ml银杏达莫注射液或每瓶注射用银杏达莫中银杏内酯A含量不得低于0.057mg，银杏内酯B含量不得低于0.021mg，银杏内酯C含量不得低于0.037mg，白果内酯含量不得低于0.081mg。2.按照权利要求1所述的银杏达莫注射制剂的检测方法，其特征在于指纹图谱测定步骤包括如下内容：a、采用高液相色谱法测试以银杏叶提取物黄酮类成分特征为主的指纹图谱：(1)供试品溶液的制备：精密称取待测银杏达莫注射制剂适量，其中注射液为10ml，冻干粉为含双嘧达莫4mg的量，注射液挥干后或冻干粉直接置甲醇-25％盐酸溶液混合溶液25ml，加热回流30分钟，放冷，过滤转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度线，摇匀，作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：精密称取芦丁、山奈酚芸香糖苷、异鼠李素芸香糖苷、山奈素、槲皮素、异鼠李素，加甲醇溶解分别制成每1ml含0.03mg芦丁、0.02mg山奈酚芸香糖苷、0.02mg异鼠李素芸香糖苷、0.03mg山奈素、0.03mg槲皮素、0.02mg异鼠李素的溶液，作为对照品溶液；(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为...

【专利技术属性】
技术研发人员：窦啟玲，杨青波，陈伟，陆煜玫，刘秋，
申请(专利权)人：贵州益佰制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52