本发明专利技术公开了口服易吸收的青阳参皂苷M1在制备抗癫痫药物中的应用，经实验证明，本发明专利技术所述化合物能够有效被机体吸收入血，并且在最大电休克发作（MES）模型中，可以增强苯巴比妥钠的抗癫痫作用。因此，本发明专利技术所述青阳参皂苷M1可用于制备抗癫痫的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物药用成分和抗癫痫化合物领域，特别是涉及口服易吸收的青阳参皂苷M1在制备抗癫痫药物中的应用。
技术介绍
癫痫（epilepsy）即俗称的“羊角风”或“羊癫风”，是大脑神经元突发性异常放电，导致短暂的大脑功能障碍的一种慢性疾病。中国约有900万左右的癫痫患者，其中500～600万是活动性癫痫患者，同时每年新增加癫痫患者约40万，在中国癫痫已经成为神经科仅次于头痛的第二大常见病。青阳参（Cynanchum otophyllum）是鹅绒藤属植物中的一种常用的民族药，广泛分布于我国西南地区，主要治疗癫痫，眩晕，耳鸣, 腰膝酸软等症。目前已经将其氯仿提取物开发成片剂上市，联合苯巴比妥、苯妥英钠等传统抗癫痫药物，治疗顽固性癫痫大发作【匡培根等，青阳参治疗癫痫大发作，中医杂志，1980(8)】。另外，有文献报到了青阳参对于慢性肝炎【Jeanne Levy and Estera Miahel-Ber.Therapin 22(3)671-88(1967)(Fr); C.A.67 52609h；何树勋等：青阳参治疗迁延性肝炎、慢性肝炎疗效观察，滇产植物药-青阳参的研究资料1981；65-62】、美尼尔综合症【木全章等：青阳参苷丙至苷庚五个化合物及其制备方法和应用；CN9611280 3.8】、抑郁等病症有预防和治疗作用【杨庆雄，人工栽培青阳参化学成分及抗抑郁活性研究，贵州科学，2007（25）421-426】。但目前仅有文献报道了青阳参总苷的抗癫痫作用【李先春，青阳参总苷抗癫痫作用的分子机理研究，华东师范大学博士学位论文，2005】，很少看到具体的青阳参单体化合物的抗癫痫作用，仅有木全章等曾经提过青阳参皂苷A和B有抗癫痫作用的报道，还无详实数据【Mu Quanzhang, Lu Jianrong, Zhou, Qianlan. Two New Antiepilepsy Compounds—Otophylosides A and B. Scientia Sinica (Series B) 1986, Vol. 29(3) 295-301】，更没有研究它们关乎成药的吸收、分布、代谢等生物药剂学性质。青阳参皂苷M1为青阳参苷元3-O-?-D-夹竹桃吡喃糖基-(1→4)-?-D-加拿大嘛吡喃糖基-(1→4)-?-D-洋地黄毒吡喃糖苷，曾有文章报道了其化学结构【殷敏敏等，青阳参乙酸乙酯萃取部位的化学成分，中国药科大学学报，2013,44(3):213-218】，目前尚未见的抗癫痫活性研究，更无对其吸收、分别、代谢、排泄等生物药剂学性质进行研究，其是否能在医药领域的应用未知。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供口服易吸收的青阳参皂苷M1（青阳参苷元3-O-?-D-夹竹桃吡喃糖基-(1→4)-?-D-加拿大嘛吡喃糖基-(1→4)-?-D-洋地黄毒吡喃糖苷）在制备抗癫痫药物中的应用，其作为抗癫痫药物的主要活性成分制成药物，辅助治疗癫痫发作。青阳参皂苷M1的化学结构式如下：；本专利技术的单体化合物可以从天然药物中提取，也可以是化学合成的。本专利技术所述应用中还可以加入一种或多种可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的吸收促进剂、表明活性剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、填充剂和稳定剂等，必要时还可加入色素、香味剂和甜味剂等。可制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液和注射液等多种形式。本专利技术首先采用血清药物化学和体内消化稳定性评价的方法，通过大鼠灌胃吸收试验，筛选出青阳参的一个入血成分——青阳参皂苷M1。此筛选方法得到的成分口服易吸收，克服了传统的体外高通量筛选方法所得活性化合物吸收不良，药物代谢动力学性质不佳的缺点；所得结果填补了青阳参口服吸收不明确的研究空白。之后本专利技术在筛选结果的指导下，有针对性地从青阳参提取物中分离青阳参皂苷M1。因为采用了血清药物化学导向的分离，所以避免了盲目性，分离的工作量减少成为传统工作量的几十分之一，提高了效率。分离得到单体化合物后，采用了1H NMR和13C NMR等技术对其结构进行了准确鉴定。最后，利用最大电休克发作实验（MES）癫痫模型，以小鼠为研究对象，评价青阳参皂苷M1的抗癫痫作用；结果显示，青阳参皂苷M1和苯巴比妥钠合用，可以增强苯巴比妥钠的抗癫痫作用，具有良好的协同效果。以上结果表明，青阳参皂苷M1有良好的吸收特性，可以被吸收入血，且与经典的西药合用能增强对癫痫的治疗作用。附图说明图1为采用体内稳定性评价和血清药物化学法筛选青阳参皂苷M1的HPLC示意图；图2为筛选结果指导下的青阳参皂苷M1分离流程图。具体实施方式以下结合附图和实施例对本专利技术作进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不限于以下的实施例，实施例中，未注明具体条件的实施方法，按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件进行试验。实施例1：采用体内稳定性评价和血清药物化学法筛选青阳参皂苷M1（1）青阳参药材粉碎后，采用质量百分比浓度为70%乙醇回流提取，提取液浓缩为浸膏，制得青阳参提取物；（2）使用HPLC或LC-MS对青阳参提取物进行分析，建立青阳参药材的指纹图谱；（3）采用步骤（1）提取物进行动物口服吸收实验，实验将大鼠分为高、中、低剂量三组，然后用青阳参提取物进行灌胃，高剂量组使用剂量为450mg/kg，中剂量组使用剂量200mg/kg，低剂量组使用剂量为110mg/kg；每组大鼠18只，每个时间点平行3只，分别于0 min、15min、30min、60min、120min、180 min抽取股动脉血，4000rpm离心制备血浆，并处死动物，收集胃肠道内容物；（4）合并各组所有时间点收集的血浆样品，用乙酸乙酯萃取；胃肠内容物先匀浆，再用乙酸乙酯萃取，合并血浆的提取液后用N2吹干，合并胃肠内容物的提取液后用N2吹干；吹干后固体用甲醇复溶、微孔滤膜过滤、HPLC检测；（5）步骤（4）检测结果与提取物指纹图谱对照，选取青阳参提取物指纹图谱、血浆和胃肠内容物中都具有的成分，即为青阳参口服易吸收的单体化合物；实验结果如图1所示，大鼠灌胃15分钟后胃中青阳参皂苷M1含量较高，30分钟时明显减少，逐渐向小肠转移，因此，小肠30分钟时含M1；60分钟时，小肠中的M1消失，却在血液中发现，因此M1是我们需要的入血成分即口服易吸收成分。实施例2：在筛选结果导向下的青阳参皂苷M1的制备（图2）从昆明菊花村药材市场购买的青阳参打成干粉（事先要进行药材清洗粉碎），青阳参根粉用70％乙醇浸泡24小时，之后回流提取三次，每次2小时。乙醇提取液合并后用旋转蒸发仪在温度55摄氏度，压力-0.054下回收乙醇，并浓缩提取液得浸膏。所得到的浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯及正丁醇萃取。进行HPLC检测，发现M1在乙酸乙酯部位，分离乙酸乙酯部位。乙酸乙酯萃取部位( 45 g)经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇梯度洗脱（98:2、96:4、92:8、90:10、1:1），收集各部分洗脱液，减压浓缩，浓缩液转移至10ml青霉素瓶中，TLC检测，将成分大致相同的馏本文档来自技高网...
【技术保护点】
青阳参皂苷M1在制备抗癫痫药物中的应用；所述青阳参皂苷M1的结构式如下：。
【技术特征摘要】
1.青阳参皂苷M1在制备抗癫痫药物中的应用；
【专利技术属性】
技术研发人员：向诚，黄财顺，何俊，孔靓，李宝才，李鹏，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南;53
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